用蒽酮-硫酸比色法測定經澄清劑精制后一貫煎中多糖含量的可行性分析

白 蘭，鄭 宇

（1.四川省醫學科學院·四川省人民醫院，電子科技大學附屬醫院·四川省人民醫院，個體化藥物治療四川省重點實驗室，四川 成都610072；2.成都中醫藥大學，四川 成都 610075）

一貫煎[1]是清朝魏之琇發明的滋陰疏肝名方。該方是治療陰虛肝郁、肝胃不和所致脘脅疼痛的常用藥方。現代中醫常用一貫煎治療慢性肝炎、慢性胃炎、胃及十二指腸潰瘍、肋間神經痛、神經官能癥等。研究發現，一貫煎處方中的生地黃、枸杞、北沙參、當歸、麥冬均含有多糖成分[2]，且一貫煎的臨床藥理作用與其所含的多糖成分有關[3，4]。因此，對一貫煎中多糖的含量進行測定具有重要的臨床意義。本次研究主要探討用蒽酮-硫酸比色法測定經澄清劑精制后一貫煎中多糖含量的可行性。

1 儀器與試劑

1.1 實驗儀器

本次實驗使用的儀器是UV1700型紫外分光光度儀（日本島津公司生產）、BP 211D 型十萬分之一電子分析天平(德國Sartorius 公司生產)、超聲清洗器、水浴鍋及制冰機等。

1.2 實驗試劑

本次實驗使用的試劑是D-無水葡萄糖（中國藥品生物制品檢定所生產，批準文號：110833-201205）及苯酚、硫酸。

2 實驗方法

2.1 制備一貫煎樣品溶液的方法

按照一貫煎的處方稱取藥材，加10倍的清水煎煮2次，每次煎煮1.5 h，對所得藥液進行濾過處理。將兩次煎煮所得的藥液合并在一起，制作成濃縮液以備用（藥材與藥液體積的比值為1:1）。將濃縮液按照1:8的比例稀釋后，放到溫度為80℃的恒溫水浴中進行攪拌。將稀釋后的濃縮液平均分為A組和B組。在A組濃縮液中加入濃度為2%的ZTC 1+1天然澄清劑Ⅲ型。120 min后，在B組濃縮藥液中加入濃度為4%的ZTC 1+1天然澄清劑Ⅲ型。對兩組稀釋后的濃縮液持續攪拌30 min后，將其放到溫度為4℃的環境中靜置24 h，并進行濾過處理，將濾液濃縮至藥材與藥液體積的比值為1:1時即得經澄清劑精制后的一貫煎樣品溶液。

2.2 制備對照品溶液的方法

精密稱取104.8 g 的D-無水葡萄糖標準品，將其放到容量為100 ml的量瓶中，用蒸餾水將其稀釋至刻度后搖勻，即得濃度為1.048 mg/ml的對照品溶液。

2.3 制備供試品溶液的方法

精密量取0.5 ml的一貫煎樣品溶液，將其放到容量為100 ml的量瓶中，用蒸餾水將其稀釋至刻度后搖勻。再精密量取0.1 ml的一貫煎樣品溶液，將其放到容量為25 ml的刻度試管中，按照2.1中的方法進行操作，即得供試品溶液。

3 實驗結果

3.1 進行線性關系實驗的結果

分 別 精 密 量 取 0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml的對照品溶液，將其分別置于容量為25 ml的刻度試管中，并分別加入適量的蒸餾水，使其達到2.0 ml。然后在刻度試管中分別加入6 ml的蒽酮試液（用濃度為80%的硫酸將0.1 g的蒽酮稀釋至100 ml，現用現配）。將刻度試管放到渦旋振蕩機中處理。然后將刻度試管放到沸水浴中加熱15 min。取出刻度試管后，立即將其置于冰水浴中冷卻15 min。使用同樣的方法將2 ml的蒸餾水制作成空白對照溶液。將這兩種溶液放到UV1700型紫外分光光度儀中進行紫外分光掃描，進行紫外分光掃描的波長為627 nm，以測定這兩種溶液的吸光度。將吸光度(Y)作為縱坐標，將D-無水葡萄糖的濃度(X)作為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程為Y=1.669X-0.1431（r=0.9989）。結果表明，D-無水葡萄糖的測定量在0.2096～1.2576 mg／L范圍內時的線性關系良好。

3.2 進行最大吸收波長實驗的結果

將對照品溶液和供試品溶液放到UV1700型紫外分光光度儀中進行紫外分光掃描。進行紫外分光掃描的波長為500～700 nm。結果顯示，在進行紫外分光掃描的波長為627 nm時有最大的吸收波長且無干擾。詳情見圖1。

圖1 對照品溶液（左）與供試品溶液（右）的波長掃描圖

3.3 進行精密度實驗的結果

取0.4 ml的對照品溶液，對其進行6次吸光度實驗。結果顯示，對照品溶液的平均吸光度為0.447，其RSD=0.38%。說明該測定法的精密度良好。

3.4 進行重復性實驗的結果

取同一批次的6份樣品，按照2.3中的方法制備供試品溶液，對供試品溶液進行重復性實驗。結果顯示，供試品溶液中多糖的平均含量為0.7786 g/ml，其RSD=1.9%，說明此法的重復性良好。

3.5 進行穩定性試驗的結果

取重復性實驗項下的1份供試品溶液，在同一條件下，分別在第0 min、第10 min、第20 min、第30 min、第40 min、第60 min時進行檢測，記錄并計算供試品溶液的峰面積。結果顯示，供試品溶液的RSD=0.8%。說明供試品溶液在常溫條件下放置60 min的穩定性較好。

3.6 進行加樣回收率實驗的結果

精密量取同一批次6份0.05 ml的一貫煎樣品溶液，將這些樣品溶液分為三組，分別加入0.1 ml、0.2 ml、0.3 ml的對照品溶液。按照2.3中的方法制備供試品溶液。對所得的供試品溶液進行回收率實驗。結果顯示，三組供試品溶液的平均回收率為97.50%、99.52%、99.47%。詳情見表1。

表1 對一貫煎樣品溶液進行回收率實驗的結果

3.7 進行多糖含量實驗的結果

精密量取三批一貫煎樣品溶液各0.5 ml，按照2.3中的方法制備供試品溶液，測定這三批供試品溶液中多糖的含量。結果顯示，這三批供試品溶液中多糖的含量分別為0.897 g/ml、0.815 g/ml、0.933 g/ml。

4 討論

研究發現，采用蒽酮-硫酸比色法基本可以測定中藥復方制劑中所有碳水化合物及寡糖類、多糖類的含量[5]。中藥復方制劑中的有效成分較多且結構較為復雜，導致難以對其中的多糖成分進行定量檢測。對中藥復方制劑中的多糖成分進行定量檢測，需建立在提取、分離純化、純度分析、組分分析等一系列前期工作的基礎上。目前，靈芝、香菇、石斛等中藥中的多糖已經可以通過分離、精制、純化等操作進行處理，常用的定量檢測方法是蒽酮-硫酸比色法。筆者相信，隨著我國中藥成分提取技術及分析技術的不斷進步，該方法的臨床應用會越來越廣泛。