超聲波技術替代冰凍切片技術在甲狀腺術中快速制片的應用

劉憲軍

[摘要] 目的 試驗超聲波技術在甲狀腺手術過程中替代冰凍切片技術快速制出病理切片，探尋適合甲狀腺冰凍切片的替代制片技術。 方法 2018年4月23日臨床手術送檢的活體組織，同一塊組織按照1.0 cm×1.0 cm×0.1 cm取材六塊，隨機等分為三組。分別設置80 min，70 min，55 min每一個程序總的試驗時間，觀察最終切片與冰凍切片的質量對比。 結果 在取材標準的情況下，采用C組制片質量能夠達到快速診斷要求，三組的切片質量均優于冰凍切片質量，差異有統計學意義（P<0.05）。但是A、B兩組相對組織處理的時間較長，三組切片質量均勢的情況下，C組更能符合替代快速冰凍切片的要求。 結論 超聲波快速處理儀可以幫助解決術中的甲狀腺手術快速制片的要求。

[關鍵詞] 超聲波快速處理儀；甲狀腺快速制片；冰凍切片機；蘇木素

[中圖分類號] R736.1 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2018）27-0141-03

[Abstract] Objective To test ultrasonic technology in the rapid section production of thyroid surgery instead of frozen section technology， and to explore alternative thyroid frozen section production technology. Methods The living tissue submitted for clinical operation on April 23， 2018 was selected as the research object. Six pieces from the same organization were taken according to 1.0 cm×1.0 cm×0.1 cm and randomly divided into three groups. And 80 minutes， 70 minutes， and 55 minutes was set as the total test time of the program， respectively. The quality of the final slice and the frozen slice were observed. Results In the case of the standard of the material， using the group C production quality can achieve rapid diagnostic demand. The slice quality of group A， group B， group C was better than that of the frozen slicer. There was little statistically significant difference（P<0.05）. The experiment was successful and had clinical pathological alternative significance. However， the relative tissue treatment time of the group A and group B was longer. In the case of equal quality of the three groups， group C met the requirements of replacing fast frozen slices better. Conclusion Ultrasonic rapid processing instrument can help solve the requirements of rapid section production of thyroid surgery.

[Key words] Ultrasonic rapid processing instrument； Rapid thyroid section production； Frozen slicer； Hematoxylin

快速冰凍制片技術是普通外科甲狀腺手術中明確腫物性質最快的技術手段[1-4]，但由于不可預料的客觀因素或者客觀條件所限[5]，超聲波快速處理儀不失為一種很好的技術支持，對于術中及時了解病變性質，以便確定手術范圍，縮短手術創面的暴露時間方面起到了至關重要的指導作用。但是由于時間限制，快速冰凍切片的質量和確診率往往不如石蠟切片。為了盡可能地降低快速冰凍切片的延遲診斷率和誤診率，提高切片制作質量，需要從多個方面改善制作步驟，其中在手術量不大或者不可預知的客觀因素，或者客觀條件限制，完全可以以此方法替代冰凍切片機[5]，解決甲狀腺手術中的快速制片要求。

1 材料與方法

1.1 標本來源

研究時間：2018年4月23日；組織來源：臨床科室手術中的活體組織，在手術室送檢病理科甲狀腺標本中，選取6塊甲狀腺新鮮組織需要進行冰凍切片的標本。

1.2 主要儀器與試劑

天津久圣公司的超聲波快速組織處理儀[6]，溫度控制范圍40℃～100℃，超聲頻率1MHZ，功率500 W。AF液（40%甲醛溶液10 mL加無水乙醇90 mL配比），95%乙醇及無水乙醇，二甲苯，病理科專用石蠟，蘇木素染色液，伊紅染色液。試劑均使用丹麥DAKO生物試劑公司的染色試劑。

1.3 超聲波制片方法

取材，根據手術室送檢的新鮮的沒有固定的甲狀腺組織，放在取材臺上，標尺測量甲狀腺的體積，以2 mm厚度最大面積逐層切割甲狀腺組織，選取甲狀腺組織病變部位與正常組織交界處，規格是1 cm×1 cm×0.1 cm，準備用超聲波水浴加熱處理，首先將快速處理儀調整好水浴溫度為70℃，選取的甲狀腺組織6塊分別標記試驗號碼A、B、C三組，每個材塊規格為1 cm×1 cm，厚度1 mm標準。A組的試驗程序（80 min）設置為：AF液脫水固定時間為10 min，95%乙醇時間為15 min，無水乙醇時間為20 min，二甲苯透明15 min，浸蠟20 min；B組的試驗程序（70 min）[9]為AF液脫水固定時間為8 min，95%乙醇14 min，無水乙醇18 min，二甲苯透明12 min，浸蠟18 min；C組的試驗程序（55 min）為AF液時間為5 min，95%乙醇10 min，無水乙醇15 min，二甲苯10 min，浸蠟15 min。以以上三個程序分別進行超聲波水浴加熱甲狀腺組織處理。組織處理完畢同常規石蠟制片一樣包埋、冷凍、切片、烤片、染色、封片，此過程大約20 min符合制片染色效果要求。

1.4冰凍切片制作

按照取材甲狀腺冰凍切片的標準進行取材一塊，放在-25℃的冰凍切片機冷臺上冷凍[14]，冷凍好后進行組織切片，厚度5 μm，選擇最好的切片貼附于載玻片磨砂面端對側1/3中間位置[7]，然后進行甲醇固定5 s，自來水洗5 s，蘇木色精染色3 min，40℃自來水洗5 s，0.1%的鹽酸酒精分化，40℃自來水洗5 s，0.5%的碳酸氫鈉溶液返藍[15]，40℃自來水洗5 s，伊紅染液染色，40℃自來水洗5 s，梯度75%×2，85%×2，95%×2，100%×2乙醇各濃度分別進行脫水4 min，二甲苯透明共計4 min，中性樹膠封片。

1.5 評分方法

根據中華醫學會病理質控中心評分標準：①組織切面完整；②切片厚度3～5 μm；③切片無刀痕、裂痕、顫痕；④切片平坦、無鄒褶折疊；⑤切片無污染；⑥切片無氣泡；⑦切片透明度好；⑧細胞核與細胞質染色對比清晰；⑨切片無松散、粘貼位置適當；⑩切片整潔，標簽端正粘牢、編號清晰。根據中華醫學會病理分會的評分標準C組評分：①組織切面稍不完整減2分，得8分；②切片薄（3～5 μm）且均勻10分；③切片有裂隙，顫痕減去2分，得8分；④切面平坦，無鄒褶得10分；⑤切片無污染10分；⑥切片無氣泡10分；⑦透明度略差減3分，得7分；⑧細胞核與細胞質染色對比清晰10分；⑨切片不松散10分；⑩切片整潔10分。最終評為甲級93分。A組和B組與C組比較雖然效果也達到了甲級切片標準，但是因為處理組織時間過長，尚不能采用。冰凍切片的評分；①組織切面稍不完整減2分，得8分；②切片較厚（7 μm）減3分，得7分；③切面有顫痕減2分，的8分；④切面不平坦減2分，得8分；⑤切面無污染10分；⑥切片無氣泡10分；⑦透明度高10分；⑧細胞核與細胞質染色對比清晰10分；⑨切片松散減3分，得7分；⑩切片整潔10分，最終評分的88分。

1.6 統計學方法

本次試驗采用了統計的前瞻性研究，實驗設計采用自身配對設計，臨床病理試驗為第一次試驗，主要做法分組為隨機，對照，重復，均等.控制重要非試驗因素，如水溫，處理時間，組織厚度等計量資料，P<0.05為差異有統計意義。

2 結果

A、B、C三組標本在其他條件相同情況下，經過超聲波不同時間處理，C組制片染色效果優于A、B兩組，C組與冰凍切片比較符合快速診斷的質量要求，胞漿鮮艷，核仁清晰，組織結構完整。

在取材標準的情況下，采用C組制片質量能夠達到快速診斷要求，且優于冰凍切片質量，差異有統計學意義（P<0.05）。可以在冰凍切片機出現故障或不具備購買冰凍切片機的病理科應用，雖然出片時間略長（術中冰凍切片質控時間為15～20 min，此實驗出片時間為55 min），但可以解決術中甲狀腺快速制片要求的難題。見封三圖6。

3 討論

冰凍切片（frozen section）是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度[8]，然后進行切片的病理技術操作方法，因為其制片過程較石蠟切片快捷，簡便，而多用于臨床手術中的快速病理診斷。在臨床外科手術過程中，如婦科的卵巢瘤、畸胎瘤、普通外科的甲狀腺腫瘤、乳腺外科的乳腺腫瘤、神經外科的膠質細胞瘤等均可以進行冰凍切片的快速制片，從而進行快速病理診斷定性。減少了石蠟切片長時間的處理時間（從取材到做出常規切片約15 h），又由于冰凍切片機價格昂貴及不可預知的機械故障，對不同組織有著質量較高的切片要求，在實際工作中試驗了超聲波技術替代冰凍切片技術在甲狀腺快速制片中的應用。根據不同設置的程序進行試驗，A組的切片處理因為其固定、脫水、透明、浸蠟時間較長，切片相對要容易操作，但是因為其整個處理時間較長，不符合手術中對甲狀腺快速診斷的要求，且與C組處理的組織在HE染色結果判讀并無明顯根本差別[9]，而且C組處理時間更短，符合快速的特點。

冰凍切片診斷技術是臨床外科手術定性比較依賴的病理檢查方法[11]，近年來，隨著人們對醫療技術的要求提高及對疾病快速準確診斷的認可，將需要進行明確診斷的病變組織置于-25℃的條件下進行快速冷凍，避免產生冰晶及使細胞過度膨脹，影響診斷。不同的組織在-20℃左右的情況下，組織的硬度，細胞膨脹的系數，冰凍切片時對刀鋒的適應度，切出的切片能否順利的進入防卷板，如果溫度高一點，切片聚堆，無法展片，制片就不成功，影響診斷效果，所以適宜的溫度是冰凍切片的關鍵[10]。甲狀腺組織適宜的冰凍溫度為-25℃。對不同組織的疾病均有不同的解決方法。高效、快速、準確是我們病理科技術方面面臨的挑戰和今后不斷探索及發展的方向，此項超聲波快速處理術中甲狀腺的臨床診斷要求，其操作過程類似于石蠟切片的組織處理過程，診斷醫生根據臨床醫生送檢的甲狀腺組織，均等切開組織找出甲狀腺非腫瘤組織與病變相鄰部位取材試驗，經過95%乙醇及無水乙醇脫水，二甲苯透明，生物組織的特殊石蠟浸蠟[15]，在相同的處理試劑的前提下進行了超聲波技術及加溫組織處理[9]。超聲波技術是一項廣泛應用于醫學各個方面的成熟的技術，臨床超聲檢查，理療科的超聲波物理療法等，那么超聲波技術應用于病理科快速制片技術，就是利用超聲波的物理特性，加速組織間的物理交換過程，從而達到病理活體組織快速處理的目的[10]。可以幫助解決臨床檢驗具有傳染性疾病又需要進行術中快速診斷的患者或設備不全或突然停電的特殊情況。

綜上所述，這是一種低成本，高效益，成熟的尤其解決縣級醫院的技術難題，值得繼續探討學習發展。

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（收稿日期：2018-06-07）