急性腦梗死患者血清白細胞介素—9、抗心磷脂抗體和同型半胱氨酸水平測定及臨床價值探討

李傳利

[摘要] 目的 探討和分析血清白細胞介素-9（IL-9）、抗心磷脂抗體（ACA）及同型半胱氨酸（Hcy）在急性腦梗死患者臨床治療中的價值。 方法 選擇2016年9月～2017年4月在我院就診的急性腦梗死患者115例作為研究對象，另選取我院健康體檢者103例作為對照組。采用ELISA法檢測急性腦梗死組與健康對照組的血清IL-9、ACA水平，采用循環酶法檢測血清Hcy水平。比較急性腦梗死組與健康對照組IL-9、ACA和Hcy的水平差異，并分析IL-9和Hcy水平與患者的神經功能缺損NIHSS評分的相關性。 結果 急性腦梗死組IL-9水平為（0.94±0.28）pg/mL，較健康對照組高，差異有統計學意義（P<0.01）。急性腦梗死組ACA陽性率為46.1%，高于健康對照組的7.8%，差異有統計學意義（P<0.01）；急性腦梗死組Hcy的水平為（18.15±13.29）μmol/L，顯著高于健康對照組（P<0.01）。Pearson相關分析表明，IL-9水平與患者的神經功能缺損NIHSS評分呈正相關（P<0.01），而Hcy與其相應的NIHSS評分不相關。 結論 急性腦梗死患者血清IL-9、ACA及Hcy的水平升高，且IL-9與神經功能缺損有相關性。該三個指標與急性腦梗死的發生密切相關，該三個指標的檢測對急性腦梗死的預防、早期診斷與治療具有重要的臨床意義。

[關鍵詞] 急性腦梗死；白細胞介素-9；抗心磷脂抗體；同型半胱氨酸

[中圖分類號] R743.3 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2018）27-0124-04

[Abstract] Objective To investigate and analyze the clinical value of serum interleukin-9（IL-9）， anticardiolipin antibody（ACA） and homocysteine（Hcy） in the clinical treatment of patients with acute cerebral infarction. Methods A total of 115 patients with acute cerebral infarction who were admitted in our hospital from September 2016 to April 2017 were enrolled. A total of 103 healthy subjects from our hospital were selected as the control group. Serum IL-9 and ACA levels were measured by ELISA in acute cerebral infarction group and healthy control group. Serum Hcy level was detected by circulating enzyme method. The differences in IL-9， ACA and Hcy between the acute cerebral infarction group and the healthy control group were compared. And the correlation between IL-9， Hcy level and the NIHSS score of the neurological deficit was analyzed. Results The level of IL-9 in the acute cerebral infarction group was（0.94±0.28） pg/mL， which was higher than that in the healthy control group， and the difference was statistically significant（P<0.01）. The positive rate of ACA in acute cerebral infarction was 46.1%， which was higher than that in healthy control group（7.8%）. The difference was statistically significant（P<0.01）. The level of Hcy in acute cerebral infarction group（18.15±13.29） μmol/L， was significantly higher than that of the healthy control group（P<0.01）. Pearson correlation analysis showed that IL-9 level was positively correlated with NIHSS scores in patients with neurological deficits（P<0.001）， whereas Hcy was not correlated with the corresponding NIHSS scores. Conclusion The levels of serum IL-9， ACA and Hcy are elevated in patients with acute cerebral infarction， and IL-9 is associated with neurological deficits. These three indicators are closely related to the occurrence of acute cerebral infarction. The detection of these three indicators has important clinical significance for the prevention， early diagnosis and treatment of acute cerebral infarction.

[Key words] Acute cerebral infarction； Interleukin-9； Anticardiolipin antibody； Homocysteine

急性腦梗死（acute cerebral infarction，ACI）是一種嚴重的引起腦部組織缺血性、缺氧性損害甚至壞死的腦血管疾病，其主要病因為腦部供血動脈粥樣硬化及血栓形成而引發的腦血流阻斷[1]。ACI在臨床具有較高的致死率和致殘率，嚴重威脅患者健康和生命安全，因此ACI的早期診斷及預防性干預，對降低急性腦梗死發生率、控制患者病情及改善預后具有重要意義[2]。IL-9是一種炎性介質，近年來研究發現IL-9介入腦動脈的炎癥過程，進而促進腦部動脈粥樣硬化和血栓的發生發展[3]?？剐牧字贵w（anticardiolipin antibody，ACA）是一種自身抗體，其與許多免疫介導的血栓性疾病密切相關；同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）是引起并促進動脈粥樣硬化進程的重要危險因素。本研究對急性腦梗死患者臨床資料進行研究分析，探討急性腦梗死與IL-9、ACA 及Hcy水平的關系，為急性腦梗死的早期預防、早期診斷及治療提供一定的理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2016年9月～2017年4月我院神經內科收治的急性腦梗死患者115例納入急性腦梗死組（ACI組），其中男74例，女41例，年齡43～89（47.6±11.7）歲。健康對照組（HC組）：選擇年齡匹配，同期來我院體檢的無心腦血管疾病、無感染、肝臟疾病、自身免疫性疾病、腎臟及內分泌等疾病的健康者103例，其中男65例，女38例，年齡46～79（48.1±12.5）歲。所有受試者近1個月內未服用任何藥物。兩組實驗對象的性別和年齡比例比較無統計學差異，對于參加本研究項目知情，且均簽署知情同意書。

1.2 納入和排除標準

納入標準：急性腦梗死組所有患者均于發病24 h內就診，符合第4屆腦血管病會議制定的診斷標準，且均經頭顱CT和（或）MRI證實。

排除標準：（1）其他原因引起的腦梗死；（2）出血性腦血管疾?。唬?）有嚴重血液系統、肝臟、自身免疫系統疾病、腎臟及惡性腫瘤等；（4）既往有神經系統方面的疾病且有嚴重后遺癥者或其他原因引起的嚴重軀體疾病不能配合完成正常檢查者；（5）妊娠或哺乳期者。

1.3 標本采集

所有受試者均于入院次日早晨空腹抽取靜脈血，促凝劑真空采血管釆血2～4 mL，1 h內3500 r/min離心10 min，分離血清，2 h內完成Hcy檢測。分裝剩余血清至EP管中，每管120 μL，-80℃凍存，用于IL-9、ACA檢測。

1.4 儀器和試劑

IL-9檢測試劑盒購自R&D;；ACA檢測試劑盒購自德國歐蒙醫學診斷有限公司；酶標儀為美國Thermo Fisher Scientific公司生產；Hcy檢測試劑盒購自寧波瑞源生物科技有限公司，檢測儀器為日本日立公司生產的7600-110全自動生化分析儀。

1.5 方法

IL-9、ACA的水平采用ELISA法檢測，實驗步驟嚴格按照說明書執行，設置標準曲線孔、陰性對照孔和空白孔，根據標準曲線計算樣本濃度，ACA≥12 RU/mL判為陽性，ACA<12 RU/mL判為陰性。Hcy采用循環酶法檢測，其正常參考范圍為4.0～15.4 μmol/L 。

1.6 神經功能缺損評分

根據美國國立衛生研究院卒中量表（NIH stroke scale，NIHSS）對ACI組患者發病期內的神經功能缺損進行評定。

1.7 統計學分析

采用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析。計數資料用%表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，相關性分析采用Pearson相關系數分析法。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ACI組與健康對照組血清ACA陽性率比較

ACI 組 ACA 陽性53例（46.1%），對照組陽性8例（7.8%），兩組比較差異有統計學意義（χ2=39.59，P<0.01）。見表1。

2.2 ACI組與健康對照組IL-9和Hcy水平比較

ACI組IL-9的血清學水平顯著高于健康對照組（P<0.01）；而Hcy的血清學水平，ACI組顯著高于健康對照組，差異有統計學意義（P<0.01）。見表2。

2.3 腦梗死相關因素的Pearson相關性分析

ACI組患者血清中的IL-9水平與其相應的NIHSS評分具有Pearson相關關系，其r=0.66，說明二者的水平呈正相關關系，差異有統計學意義（P<0.01）。而Hcy與其相應的NIHSS評分不具有相關性。見表3。

3討論

急性腦梗死是一種嚴重致死致殘的疾病，目前靜脈溶栓是唯一有效的治療方法，但一方面很大程度被時間窗限制，另一方面只有約1/3的患者能夠避免殘疾[4]。因此，建立有效的血清學檢測指標，早期預防、早期診斷，對急性腦梗死患者的意義尤為重要。

近年來，IL-9是目前新被發現參與急性腦梗死的細胞因子，可由淋巴細胞、上皮細胞、NK細胞等多種免疫細胞分泌產生，其在體內的生物學作用具有多效性，但在急性腦梗死中的作用尚不明確。

目前，已有研究表明急性缺血性腦卒中患者的血清IL-9水平要顯著高于健康對照組[5]，在大鼠的腦卒中動物模型中也得出過相同結論[6]，與本研究結果一致。然而，IL-9在急性腦梗死中發揮的生物學作用和具體機制并不明確，相關研究在國外尚屬起步階段，國內研究更是有限。在動物模型中，使用IL-9預處理，會加重腦內注射門冬氨酸受體拮抗劑引發的白質損傷[7]。這表明IL-9作為一種炎癥介質，可能通過引發其他的炎癥細胞和炎癥因子的參與，加重腦損傷部位的炎癥反應，從而使急性缺血性腦損傷的病變加重。

在急性腦梗死的起始和發展階段，多種免疫細胞和炎癥因子參與的免疫應答和炎癥過程最終將導致嚴重的腦損傷和神經功能缺損[8]。在中樞神經系統的炎癥性疾病中，IL-9發揮著重要的中介作用。IL-9通過結合星形膠質細胞的IL-9R，促進其CCL-20的表達，從而促進Th17細胞遷移入中樞神經系統[9]。Th17細胞產生釋放的IL-17，會直接或間接殺傷破壞神經元和神經組織，形成或加重急性腦梗死的腦組織損傷和神經功能缺損[10]。

NIHSS評分是ACI后神經系統功能缺損的評價體系，本研究中我們發現患者的NIHSS評分與其血清IL-9的水平具有相關性，提示IL-9的水平可能與ACI的嚴重程度相關。目前，有研究也得出過類似結論，發現缺血性腦梗死患者血清IL-9水平及IL-9分泌型T細胞水平均較健康對照組升高，且CD3+CD4+IL-9+和CD3+CD8+IL-9+細胞數量的升高與疾病的嚴重程度呈正相關[11]。該研究還表明，IL-9對腦組織的損傷，很有可能是通過激活損傷性的STAT信號通路、封閉保護性[12]的PI3K/AKT信號通路來實現的[11]。然而也有學者認為，其他類型的細胞比例更具有指導意義，如最近的研究發現外周血中CD4+CD28-細胞的比例對于急性腦梗死患者的分型和治療有著重要意義[13]。

然而，關于IL-9在急性腦梗死中的作用還有諸多不確定性。一方面，在ACI的不同時相細胞因子的水平也會有不同變化。已有研究證實，在急性缺血性腦卒中后12個月IL-9處于低水平，且這種低水平的IL-9與患者的卒中后疲勞現象存在相關關系[14]。另一方面，IL-9/IL-9R系統可能參與大腦皮質層神經元的一種新的內源性抗凋亡機制，從而對腦細胞有一定的保護作用，且能一定程度的抵抗壓力引起的神經損傷[15]。因此，要確定IL-9急性腦梗死中的作用，還需要更多堅實的研究和有力的證據。

一直以來，ACA被認為是急性腦梗死的誘因之一，但其與急性腦梗死的關系并未引起廣泛研究。本研究中我們采用ELISA法，檢測到急性腦梗死組患者的抗心磷脂抗體陽性率較健康對照組高，且差異有統計學意義，與目前抗心磷脂抗體的研究現狀是一致的。近年來，隨著溶栓治療和腦卒中中心的開展普及，抗心磷脂抗體作為一種血栓促進性因子，在急性腦梗死中的作用和角色逐漸受到了國內外學者的關注。尤其是國內許多學者在腦梗死患者的外周血中均檢測到高水平的抗心磷脂抗體[16]。國外許多相關研究表明腦梗死的發生和抗心磷脂抗體相關，有研究顯示，在沒有其他的凝血功能紊亂誘發因素的腦梗死患者中，有6%～25%的個體檢測到抗心磷脂抗體的存在，主要包括狼瘡抗凝物、抗心磷脂抗體、抗-β2糖蛋白I抗體[17]?？剐牧字贵w陽性患者的頸動脈超聲檢查顯示，頸動脈有較厚的動脈粥樣硬化斑塊存在[18]，是目前較為直觀的證據。除了ACA已知的引發動脈粥樣斑塊形成的作用，還有研究發現，ACA陽性患者若合并有丙型肝炎病毒感染，會增加急性腦梗死的意外風險[19]。

目前已有大量文獻證實，Hcy在急性腦梗死患者中的血清水平升高，Hcy水平的升高與腦梗死的形成、腦梗死的復發、梗死后軀體功能障礙的預判，尤其與腦梗死患者大血管動脈粥樣硬化斑塊的形成，均具有顯著的相關性。此外，Hcy在人體的血管調節異常和認知功能損傷中均發揮一定的作用。有研究表明，高水平的Hcy會增加心腦血管意外的風險，且預后差。Hcy水平的升高還可以預測評估癡呆的發生風險，而這種風險是獨立于腦部小血管病變和其他血管風險因子之外的[20]。最新研究發現，高水平的Hcy在急性腦梗死中并非獨立致死因素，但卻與女性腦卒中患者5年死亡高風險有相關性[21]，提示臨床加強女性腦卒中后的血清Hcy檢測，為預后提供依據。

本研究中我們將急性腦梗死患者的Hcy水平與其相應的NIHSS評分進行Pearson相關性分析，我們并沒有得到預期中二者的相關關系。近幾年國內也有研究得出過與我們結論不相符的結果，經過分析，腦梗死患者的Hcy水平與其相應的NIHSS評分是呈顯著相關關系的。我們認為可能的原因主要有以下幾方面：一方面，本研究中納入研究的對象為急性腦梗死患者，在患者入院診治的第一時間內抽取外周靜脈血，在疾病發生的早期時相，Hcy水平可能并沒有達到預期，但是其水平與健康對照組相比還是有顯著性差異的。另一方面，不同實驗室采用的Hcy檢測試劑的廠家不同，得到的Hcy數值也不盡相同?？傊?，關于Hcy在急性腦梗死中的作用，還需要進一步的實驗研究確證。

綜上所述，IL-9為急性腦梗死的檢測治療提供新方向，聯合ACA和Hcy監測，可為不同人群提供個體化治療意見，最大限度降低急性腦梗死對患者的生命安全和生命質量的威脅。

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（收稿日期：2018-06-05）