不同年齡段不同下生殖道疾病女性HPV感染和宮頸病變狀況分析

施曉春 周青雪 施新顏 劉艷飛 汪露

[摘要] 目的 了解不同年齡段不同下生殖道疾病狀況女性HPV感染情況和宮頸病變情況。 方法 采用多聚酶鏈反應（PCR）技術擴增靶點DNA，采用核酸雜交技術檢測14種HPV高危型別，采用液基細胞學檢查（TCT）技術檢測宮頸病變情況。 結果 5 176例女性中，高危亞型HPV感染率為19.1%，其中≤20歲年齡組和61～65歲年齡組HPV感染率明顯高于其他年齡組（P<0.01）。11 968例TCT檢查女性中，TCT陽性率為7.47%，其中ASC-US和LSIL患者比例相對較高，分別占4.24%和2.32%，26～30歲年齡組和31～35歲年齡組TCT陽性率明顯高于其他年齡組（P<0.01）。陰道炎組、宮頸炎性疾病組和宮頸腫瘤組女性HPV感染率均顯著高于體檢組（P<0.01）。 結論 不同年齡段不同下生殖道疾病女性患者間HPV感染和宮頸病變情況存在差異，應加強對低齡女性、高齡女性和具有下生殖道疾病女性的宮頸癌篩查力度，從而更好地控制女性宮頸癌前病變和宮頸癌患病風險。

[關鍵詞] 人乳頭狀瘤病毒；宮頸病變；感染；液基細胞學檢查

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2018）27-0128-04

[Abstract] Objective To understand the status of HPV infection and cervical lesions in women with different lower genital tract diseases in different age groups. Methods Polymerase chain reaction（PCR） was used to amplify target DNA. Nucleic acid hybridization technique was applied to detect 14 HPV high-risk types. Thinprep cytology test （TCT） technique was used to detect cervical lesions. Results Among the 5 176 women， the high-risk subtype HPV infection rate was 19.1%. Among them， the HPV infection rate in the ≤20-year age group and the 61-65-year age group was significantly higher than that in other age groups（P<0.01）. Among 11 968 women with TCT， the positive rate of TCT was 7.47%. The proportion of patients with ASC-US and LSIL was relatively higher， accounting for 4.24% and 2.32% respectively. The positive rate of TCT in the 26-30 age group and the 31-35 age group was significantly higher than that in other age groups （P<0.01）. The incidence rates of HPV infection in the women in the vaginitis group， cervicitis disease group， and cervical cancer group were all significantly higher than that in the physical examination group（P<0.01）. Conclusion There are differences in HPV infections and cervical lesions among the women with different lower genital tract diseases at different ages. Efforts should be made to strengthen the screening of cervical cancer for younger women， older women and women with lower genital tract diseases， so as to better control the risk of cervical precancerous lesions and cervical cancer.

[Key words] HPV； Cervical lesions； Infections； Thinprep cytology test （TCT）

宮頸癌（cervical cancer，CC）嚴重威脅著女性健康，是最常見的女性惡性腫瘤之一[1]，我國2015年宮頸癌新發病例9.89萬，死亡病例3.05萬[2，3]。近年來CC發病率逐漸升高，全球每年約有50萬新發病例，給患者家庭造成了較重的負擔[4，5]。CC發生的主要原因是高危型人乳頭狀瘤病毒（human papillomavirus，HPV）的持續感染，在高危型HPV中感染率最高的分別是HPV16型和HPV18型，高達70%～85%[6-8]。因而，積極探討高危型HPV，尤其是HPV16型和HPV18型與宮頸癌前病變和宮頸腫瘤的相關性，了解不同年齡段不同下生殖道疾病狀況女性中HPV感染情況及宮頸病變情況，對于開展CC相關篩查及預防策略的制定具有十分重要的意義[8]。若能早發現、早診斷和早治療，將有效降低CC的發生率和死亡率。HPV基因檢測和液基細胞學檢查（thinprep cytologic test，TCT）均是篩檢CC的有效方式[9，10]，本研究共收集了2016年4月～2017年12月期間于我院就診患者的5 176例HPV檢測標本和11 968例TCT標本，年齡15～90歲。根據患者不同年齡和不同下生殖道疾病狀況進行分組，然后對各組中HPV感染情況和TCT陽性分布情況進行統計分析和比較，研究結果可為不同年齡段、不同下生殖道疾病狀況女性的CC篩查、預防和診治提供理論基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2016年4月～2017年12月于我院就診和健康查體的女性為研究對象，共收集5 176例HPV檢測標本和11 968例TCT標本，年齡15～90歲，平均（38.46±10.46）歲，按照年齡分為11個組，依次為≤20歲、21～25歲、26～30歲、31～35歲、36～40歲、41～45歲、46～50歲、51～55歲、56～60歲、61～65歲和≥66歲組。對于復檢者只統計初次HPV和TCT檢測結果。

1.2 儀器與試劑

HPV檢測主要儀器和試劑均采用羅氏診斷產品（上海）有限公司生產的Cobas4800全自動基因抽提擴增檢測儀、人乳頭狀瘤病毒（HPV）核酸擴增熒光PCR檢測試劑盒（批號：Y00444、Y13681）、液基細胞制備試劑盒（批號：X08876、X06335）、HPV質控試劑盒（批號：X09695、X02711）、HPV清洗液（批號：X09951）和HPV樣本提取試劑盒（批號：X57489、Y04027）。TCT檢測采用美國新柏氏TCT液基細胞學檢測儀及相應配套試劑。

1.3 方法

1.3.1 HPV標本采集 患者在安靜狀態下，由臨床醫生采樣，首先擦去宮頸口過多的分泌物，然后將棉拭子插入宮頸口，輕壓并順時針旋轉4～5周，取得宮頸脫落細胞[11]。迅速將采樣棉拭子浸入盛有1 mL無菌生理鹽水的樣本管中，充分漂洗，將棉拭子貼壁擠壓后丟棄，立即送檢。

1.3.2 HPV DNA的抽提、PCR擴增及結果判讀 HPV DNA的抽提和PCR擴增嚴格按照羅氏人乳頭狀瘤病毒（HPV）樣本處理試劑盒、樣本提取試劑盒、檢測試劑盒（PCR熒光法）以及Cobas4800全自動基因抽提擴增檢測儀標準操作程序執行，擴增結束后，查看儀器相關參數，若抽提過程正常且陰性和陽性質控均在控則接受結果并報告臨床。人乳頭狀瘤病毒（HPV）核酸擴增熒光PCR檢測試劑盒采用多重核酸擴增（Multiplex PCR）熒光檢測法，根據高危型人乳頭瘤病毒（HPV）的L1基因靶序列設計高度特異的引物和探針，能在同一PCR反應中檢測宮頸口脫落細胞中的14種高危亞型HPV（HPV16/18/33/35/39/45/51/52/56/58/59/66/68/68b）的脫氧核糖核酸（DNA）。

1.3.3 液基細胞學檢查 受檢女性應在檢查前3 d內禁止性生活、陰道沖洗及陰道內用藥，婦科醫生將TCT專用毛刷置入宮頸內，于宮頸鱗-柱狀交界處取脫落細胞，立即將標本放入含ThinPrep保存液的小瓶中進行漂洗，再按照說明書操作步驟進行制片、固定和染色，采用TCT檢測儀進行液基細胞學檢測[12]。細胞學診斷采用2006版TBS分級系統：未見惡性細胞和上皮內病變細胞（NILM）、鱗狀上皮內低度病變（LSIL）、鱗狀上皮內高度病變（HSIL）、意義不明確的非典型鱗狀上皮細胞（ASC-US）、非典型腺細胞（AGC）、不能排除高級別鱗狀上皮內病變的宮頸不典型鱗狀細胞（ASC-H），結果判斷標準：TCT檢查結果為NILM判定為陰性結果，其余均判定為陽性結果。

1.4統計學處理

采用SPSS 20.0統計學軟件進行統計學處理，計數資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同年齡段女性14種HPV高危亞型感染情況

本研究共檢出HPV陽性標本989例，陽性率為19.1%，其中各年齡組HPV高危亞型感染情況見表1。HPV16、HPV18和其他12種高危亞型HPV（HPV33/35/39/45/51/52/56/58/59/66/68/68b）感染率見圖1。本研究結果發現，≤20歲年齡組和61～65歲年齡組與其他年齡組相比HPV感染率較高，且差異均有統計學意義（P<0.01）。見表1。

2.2 不同年齡段女性宮頸病變情況

本研究共收集TCT檢查標本11 968例，其中陽性894例，占7.47%，陰性11 074例，占92.53%。在TCT陽性患者中，ASC-US最多，共檢出507例，占4.24%，其次為LSIL，共278例，占2.32%，見表2。通過對不同年齡段的女性的宮頸病變情況進行分析，我們發現≤20歲、21～25歲、26～30歲、31～35歲、36～40歲、41～45歲、46～50歲、51～55歲、56～60歲、61～65歲年齡組女性中ASC-US患者和LSIL患者例數均顯著高于AGC、ASC-H和HSIL患者（P<0.01），在≥66歲年齡組的157例女性中，除NILM外，LSIL患者數量最多（5例，占3.18%），其次為ASC-US患者和HSIL患者（各3例，均占1.91%），未檢出AGC和ASC-H患者（0例），見圖2。在894例TCT陽性結果中，各年齡組女性所占比例依次為0.56%、7.94%、25.39%、19.02%、10.63%、9.51%、10.85%、8.72%、4.25%、1.90%和1.23%，其中26～30歲組和31～35歲組TCT陽性率顯著高于其他年齡組女性（P<0.01），見表2。

2.3 不同下生殖道疾病狀況女性的HPV感染情況分析

根據臨床診斷將研究對象分組，我們發現陰道炎組、宮頸炎性疾病組和宮頸腫瘤組與體檢組相比差異均有統計學意義（χ2=37.485，P<0.01；χ2=95.269，P<0.01；χ2=53.607，P<0.01），陰道炎組和宮頸腫瘤組相比差異有統計學意義（χ2=4.558，P<0.05），而陰道炎組和宮頸炎性疾病組、宮頸炎性疾病組和宮頸腫瘤組無統計學差異（χ2=1.224，P>0.05；χ2=2.461，P>0.05），見表3。

3 討論

CC是女性惡性腫瘤中僅次于乳腺癌的第二大常見惡性腫瘤[13，14]，研究表明CC患者的HPV感染率明顯高于正常人群，且主要感染型別為HPV16型和HPV 18型[15]，粱海燕等[16]人報道高危型HPV尤其是HPV 16和HPV18持續感染2年以上，女性宮頸病變風險顯著增加[16]，故高危型HPV感染與CC的發生和發展關系密切[17]，甚至有學者提出高危型HPV病毒載量可作為腫瘤標志物用于女性宮頸病變的治療隨訪[18]。

為了解杭州地區不同年齡段不同下生殖道疾病女性人群中HPV感染和宮頸病變狀況，本研究對不同年齡段不同下生殖道疾病狀況女性的HPV感染情況以及TCT檢查結果進行統計和分析，結果顯示，2016年4月～2017年12月期間我院5 176例女性HPV檢測標本中，14種高危型HPV（HPV16/18/33/35/39/45/51/52/56/58/59/66/68/68b）的陽性率為19.1%，與李明雷等報道的17.74%[19]和李愛敏等報道的20.47%相近[20]。

本研究結果顯示，杭州地區女性HPV感染率與年齡呈兩個特異性高峰，一個是≤20歲年齡組，陽性率為55.0%，其中最小年齡為16歲，提示杭州地區高危型HPV感染具有年輕化趨勢，這可能與患者宮頸局部組織結構尚未發育完善、機體對HPV病毒免疫力低以及性健康知識缺乏等因素有關，另一個高峰是61～65歲年齡組，陽性率為32.3%，提示隨著年齡增加HPV感染風險增加，這可能與高齡女性免疫功能降低、體內雌性激素水平下降等因素有關，本研究結果與李明雷等[19]、李愛敏等[20]和Xu HH等人[21]報道的<21歲和>50歲人群的HPV感染率較其他人群明顯升高的研究結果一致。上述研究結果提示，在CC篩查中，相關部門應尤其重視低齡女性和高齡女性的篩查。

在11 968例行TCT檢查的女性中，TCT陽性率為7.47%，其中在TCT陽性患者中，ASC-US患者最多，占4.24%，其次為LSIL，占2.32%，而在894例TCT陽性結果中，26～30歲組比例最高，占25.39%，其次為31～35歲組，占19.02%，與其他年齡組女性相比，差異有統計學意義（P<0.05），結果提示相比于其他年齡段女性，26～35歲年齡組女性TCT陽性風險較大，在CC篩查中應重視TCT檢查。許劍利等[18]報道HPV檢測靈敏度高，但特異度和準確度低，TCT檢查靈敏度低，但特異度和準確度高，二者可相互補充，建議在CC篩查中將二者聯合應用以提高篩查效率[18]。

按臨床診斷將所有患者分組，結果顯示陰道炎組、宮頸炎性疾病組和宮頸腫瘤組與體檢組相比HPV感染率均明顯升高（P<0.01），與陰道炎組相比，宮頸腫瘤組HPV感染率也明顯升高（P<0.05），上述結果提示，HPV感染可增加女性下生殖道炎性病變風險，且隨著HPV的持續感染，宮頸惡化程度也隨之增加，進而增加CC患病風險。由于HPV感染與女性下生殖道病變程度具有相關性，因而當女性患有陰道或宮頸炎性疾病時應重視HPV的篩查，盡量做到早發現、早診斷、早治療，從而降低宮頸炎性疾病和CC的發病率。

總之，在CC篩查中，我們應加強對低齡女性和高齡女性人群的篩查力度，重視中間年齡段女性的TCT篩查，普及性教育，提倡安全性行為，提高各年齡段女性對HPV感染的認知度，引導健康生活，以預防為主，早發現、早診斷、早治療，從而更好地控制女性宮頸癌前病變和CC患病風險。

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（收稿日期：2018-05-22）