藥品微生物限度檢查方法適用性資料問題分析

張小莉

（陜西省咸陽市食品藥品檢驗檢測中心，陜西 咸陽 712000）

為了使藥品質量標準更加嚴謹和可控，需證明所用檢查方法適宜，并保證方法的準確性和完整性。2005年10月國藥典發 [2005] 98號文《關于執行2005年版〈中國藥典〉微生物限度檢查法和無菌檢查法有關問題的說明》提出應“符合2005年版藥典規定”的要求，即從2005年版《中國藥典》[1]開始，需對藥品微生物限度檢查法進行方法適用性考察，建立適合該產品的微生物限度檢查方法，保證藥品質量。藥品微生物限度檢查法始于1972年[2]，2005年至今3版藥典均要求對其方法進行驗證。因2015年版藥品微生物限度檢查適用性方法與國際標準接軌，相比于2010年版《中國藥典》發生了很大變化[3]，尤其是微生物限度檢查法。由于對新方法理解和掌握程度不同，出現的問題也不盡相同。在此對從不同企業索取驗證資料時發現的各種問題進行匯總，并分析產生的原因?，F報道如下。

1 資料問題

1.1 內容不符合標準

1.1.1 未理解2015年版《中國藥典》[4]相關檢查方法實質

操作方法有誤：菌落計數驗證和2010年版《中國藥典》一樣，供試品溶液和菌液同時加入，然后傾注培養基。2015年版《中國藥典》和國際接軌，以低稀釋級的供試品溶液作為菌液稀釋液，更能保證方法的可靠性。

菌落計數驗證不完整：2015年版《中國藥典》菌落計數驗證中需氧菌總數所驗證的菌株除了細菌（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌），還有霉菌和酵母菌（黑曲霉和白色念珠菌）。這2種菌株同時也是需氧菌，只是微生物分類角度不同。

對“所加菌液不超過供試液1%”未理解：該項實質是避免菌液稀釋供試品溶液，如取供試品溶液0.9 mL和菌液0.1 mL混勻，則菌液體積超標。

對控制菌的檢出限理解不到位：如取大腸埃希菌-供試品溶液（1∶10，V/V）1 mL 加至 100 mL 胰酪大豆胨液體培養基中培養，藥典明確規定取樣量相當于1 g或1 mL；但沙門菌如果方法同上，就把要求的取10 mL改為了1 mL，相當于沙門菌檢出限縮小了90%。這樣減少取樣量實際上降低了控制菌的檢出概率。

1.1.2 質量控制和管理人員工作作風差

如在菌落計數中，對黑曲霉菌株不進行驗證。有驗證資料提到，因黑曲霉驗證試驗污染環境，未開展該驗證。隨著國家對制藥企業管控力度的加大，企業生產和檢驗環境更加符合《生產質量管理規范》（GMP）要求，人員素質進一步提高。另外，隨著檢驗水平的發展，人們對黑曲霉的認識及質量意識的提高，相關驗證逐步在企業開展，但驗證時注意對試驗人員和環境的保護。

1.2 資料信息問題

資料法律效力：現在索取的是具有企業公章的資料。公章與產品包裝的標示生產單位不一致時，應及時與生產單位溝通。

傳真或發送資料時問題頻出：資料內容不完整[5]和書寫或結論表達不規范占大多數[6-7]的情況有所改善，但傳真資料中仍有僅描述試驗過程而無結果的情況；試驗結果描述內容張冠李戴（如前半部分描述名稱是爐甘石洗劑，結論是本方法適合開塞露產品檢查）；或資料頁碼傳真不全。

特殊保護品種在資料中未予說明：如含神曲等發酵原粉的保密處方工藝制劑，資料中不僅應包括試驗材料信息和過程，還應在結論中說明微生物限度判定標準。以免因用錯標準造成結果偏差。

沿用以往藥典術語：2015年版《中國藥典》不再有常規法、培養基稀釋法等術語，資料中的具體體積或溶液濃度應以數字清晰表達，不用模糊語言。

2 企業問題

2.1 服務態度有待提高

企業提供資料后，有問題打電話（咨詢）再無人接聽，聯系不上。即使聯系到生產企業，但因藥品說明書留的常為銷售電話，而不是質量檢驗室電話，導致電話來回轉接。而即使打通企業負責電話，部分企業竟然回答“全國都在用這個資料，沒有意見反饋，就那樣用吧，快更換2020版了”，讓人尷尬。這與企業未重視資料細節問題有關，更重要的是檢驗人員與制藥企業檢驗人員理解不同，需要進行溝通。

2.2 職業素質問題

非法添加抑菌物質：如一個處方部分是含動物原藥材的中藥膠囊。按中藥成分分析和參照別家企業方法抑菌作用不強。企業方法以大腸埃希菌、沙門菌、耐膽鹽革蘭陰性菌陽性對照菌加入腸道菌增菌液體培養基100 mL中。按照該企業提供的驗證方法均未檢出所加目標菌。然后沙門菌稀釋2 g→1 000 mL胰酪大豆胨液體（TSB）培養基中；大腸埃希菌（1∶10）10 mL加入1 000 mL TSB培養基中；耐膽鹽革蘭陰性菌（1∶10）1 mL加入100 mL腸道菌增菌液體培養基中；仍未檢出上述3種菌株陽性對照（培養基符合適用性要求，菌株來源可靠，種屬符合藥典要求）。因動物來源控制菌易檢出，所以可認為該制劑添加了抑菌物質。因該添加物不影響產品理化指標，標準不檢查其是否非法添加，被鉆了空子。這種資料雖符合方法標準，但已經不適合該產品。因為做資料時的處方和工藝與審批工藝不一樣。

編寫資料時照本宣科，未予驗證：當對資料有疑問打電話咨詢企業時，企業答復是“才準備做該產品的方法，暫時不好答復”。

3 分析與改進建議

3.1 索取情況

各地藥監部門和制藥企業進行協商溝通，資料由過去企業保密不愿提供，到現在根據藥品附帶說明書的聯系方式或個別企業網上查找時均能聯系到該企業并配合，一般能索取到帶有該企業公章的微生物限度檢查方法適用性資料。有種情況是企業委托第三方實驗室完成，公章僅是委托單位的情況，而無本生產企業公章。還有一種情況是委托生產，應注意資料提供的聯系方式是委托方還是受托方，并核實資料上的試驗單位。

3.2 溝通的必要性

實驗室間的差異：從企業或企業委托單位實驗室轉移至第三方實驗室時，應避免方法轉移[8]時出現誤差。如所用陽性對照菌株與第三方實驗室存在亞型差異[9]，造成陽性對照未檢出（這種情況也應重視）。企業考察方法適用性時，應注意微生物限度檢查的影響因素[10-11]，或試劑、培養基性質差異、培養條件、使用耗材不同造成的影響。

藥材產地改變造成方法偏差：如生產工藝未改變，但藥材產地來源發生改變，企業忽略了藥材理化特性或生物活性差異，未重新進行方法驗證，造成陽性對照未檢出，與第三方實驗室結果形成差異。也應考慮有抑菌作用的藥物在不同企業的不同驗證方法對結果的影響。

3.3 建議

資料中問題處理意見：針對“問題資料”情況，每版藥典發布執行前，相關方法會發生重大變化。有關部門在宣傳期應加大宣傳和培訓力度，讓藥品檢驗人員理解并掌握新方法，避免理解偏差。同時，提高檢驗人員素質和制藥人員職業道德。即將出版發行的2020年版《中國藥典》中藥材微生物限度驗證方法會發生很大變化，各個生產企業或藥品檢驗機構應時刻關注動態，以便在執行新版方法時快速適應，避免理解錯誤。針對“制藥企業問題”情況，執法部門應加大監管力度，一方面提高制藥人員的職業素質，以公眾用藥安全有效為著力點，切實保證藥品質量，另一方面應意識到微生物限度檢查方法的重要性[12]。

規范統一資料編寫格式[13]：按照制劑的處方、主要藥材來源、制劑用途、工藝進行分類，固定各類資料編排格式，有試驗材料信息、試驗內容，有相應結論和判定標準。便于查閱和提煉信息。

及時匯總，及時更新：國家藥典委員會可將各地方法收集匯總成冊，或由各地省食品藥品檢驗研究機構收集各地產品微生物限度方法并匯總成冊，發布給各地食品藥品檢驗機構，便于查閱?；蛩幤繁O督管理部門組織設立網站，全國藥品生產企業把每個品種方法適用性資料上傳到指定網站（同時注意方法更新），便于食品藥品檢驗機構查閱或藥品生產企業相互借鑒[14]。