茶葉茶多酚檢測(cè)方法研究進(jìn)展

田玉鳳，鄭美慧，田曉靜

（西北民族大學(xué) 生命科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅蘭州 730030）

茶葉是茶樹(shù)的芽和葉子，我國(guó)很多地方都種植，是一種理想的保健飲品。茶葉中含有豐富的茶多酚、生物堿、氨基酸、茶多糖等活性成分；微量元素（如硒、鉻、鐵、鋅等）在人體的新陳代謝和生長(zhǎng)發(fā)育中起重要作用，如抗氧化[1-3]、提高綜合免疫力[4]、抑菌[5-6]，抗癌[7-8]、降血脂[9]、抗衰老、抗輻射等作用[10]?，F(xiàn)已廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、醫(yī)療保健等領(lǐng)域[11]。

茶多酚（Tea Phlyphenols，TP）又名茶鞣質(zhì)，是一類多羥基類化合物，是茶中酚類化合物的總稱。茶多酚不僅是茶葉中的主要生物活性成分[12]，而且是茶中苦味、澀味和色澤的重要來(lái)源，也是評(píng)價(jià)茶葉品質(zhì)的重要指標(biāo)之一[3]。茶多酚的含量對(duì)茶葉質(zhì)量有很大影響，選用合適高效的檢測(cè)方法實(shí)現(xiàn)茶葉的品質(zhì)鑒定和分級(jí)，將促進(jìn)其在工業(yè)、食品和醫(yī)療領(lǐng)域的開(kāi)發(fā)和利用。

1 檢測(cè)方法

1.1 光譜分析法

1.1.1 分光光度法

分光光度法（Spectrophotometry）是利用被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)下的吸收度，再根據(jù)吸光度與被測(cè)物質(zhì)濃度之間的線性關(guān)系進(jìn)行檢測(cè)分析的方法[13]。主要有以下幾種方法。

1.1.2 福林酚比色法

福林酚比色法（Folin-ciocalteucolorimetry，F(xiàn)C）是通過(guò)福林酚試劑氧化茶多酚中的-OH而顯藍(lán)色進(jìn)行比色測(cè)定的。高海榮等人[14]對(duì)比福林酚比色法和重鉻酸鉀分光光度法分析信陽(yáng)毛尖、鐵觀音、大紅袍及普洱餅茶4種茶葉中茶多酚總量的差異，發(fā)現(xiàn)福林酚比色法比重鉻酸鉀分光光度法更為有效。趙春玲等人[15]以沒(méi)食子酸乙酯為標(biāo)準(zhǔn)品，建立了一種利用硝酸鋁光度法檢測(cè)茶葉中茶多酚含量的有效方法，平均回收率100.7%，RSD為1.07%。鐘育均等人[16]建立了硅鉬藍(lán)光度法測(cè)定紅茶和綠茶茶多酚的新方法，檢測(cè)限為0.000 097 mg/mL，精密度和加標(biāo)回收率是理想的。福林酚比色法快速、簡(jiǎn)單，并且減少人體接觸試劑的機(jī)會(huì)[17]。

1.1.3 三維熒光光譜法

三維熒光光譜（Three-dimensional Fluorescence Spectrometry，3D-EEM）是利用某些物質(zhì)分子受熒光照射時(shí)，發(fā)射具有不同特征和強(qiáng)度的熒光光譜，并在不同的激發(fā)波長(zhǎng)上進(jìn)行定性定量分析[18]。張琪瑞[19]利用三維熒光光譜結(jié)合熒光體積積分技術(shù)，分析鐵觀音和黃山毛峰兩種茶葉中的葉綠素α、茶多酚與黃酮類物質(zhì)的浸出情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在相同浸泡條件下，葉綠素α浸出量接近最大值，茶多酚與黃酮類物質(zhì)含量適中，浸泡溫度可顯著影響茶多酚的浸出量。

1.1.4 近紅外光譜法

近紅外光譜法（Near Infrared Spectrometry，NIR）利用分子的振動(dòng)頻譜，直接獲得與分子的內(nèi)部結(jié)構(gòu)、官能團(tuán)和分子狀態(tài)有關(guān)的定量或定性信息[20]。趙雅等人[21]采用近紅外光法結(jié)合偏最小二乘法在1 872 nm建立了茶多酚含量預(yù)測(cè)模型，R2=0.937 8。劉輝軍等人[22]采用近紅外光譜分析技術(shù)，結(jié)合非線性偏最小二乘法，在不同的光譜區(qū)間組合建立了最佳的分析模型，相關(guān)系數(shù)R2=0.967。馬健[23]采用近紅外光譜進(jìn)行采樣建模分析，建立偏最小二乘法模型，對(duì)信陽(yáng)毛尖進(jìn)行含量檢測(cè)，預(yù)測(cè)集的相關(guān)系數(shù)R2=0.975 5。蘆永軍等人[24]采用近紅外光譜結(jié)合定標(biāo)過(guò)程檢測(cè)茶多酚中兒茶素含量，其相關(guān)系數(shù)R2=0.994 7。

1.2 色譜分析法

色譜分析法通常用于分離和測(cè)定茶湯中的茶多酚，可用于茶多酚單體的含量檢測(cè)。主要有液相色譜法、高效薄層色譜法、質(zhì)譜法等。

基于ERP系統(tǒng)的水泥工程管理系統(tǒng)，滿足了普通用戶和管理員的各種需求，有助于水泥企業(yè)提高產(chǎn)品質(zhì)量，提升服務(wù)質(zhì)量，進(jìn)一步提高企業(yè)的競(jìng)爭(zhēng)力。對(duì)于采用ERP系統(tǒng)的水泥企業(yè)來(lái)講，需要對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行持續(xù)的研究，找出其中存在的缺陷和不足并加以改進(jìn)，使其更加完善。

1.2.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是根據(jù)物質(zhì)在不同兩相中的分配系數(shù)不同，經(jīng)洗脫劑從而使混合物中各組分分離出來(lái)。采用HPLC法會(huì)涉及到樣品的前處理問(wèn)題，目前常采用溶劑萃取法對(duì)樣品進(jìn)行處理，有純水[25]、甲醇、乙腈[26]、乙醇[27]、乙酸乙酯[28]等。HPLC法可同時(shí)測(cè)定多組分，可對(duì)茶多酚中的各組分測(cè)定。王增明等人[29]建立了HPLC法測(cè)定茶多酚中表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）和表兒茶素沒(méi)食子酸酯（ECG）含量的檢測(cè)方法，發(fā)現(xiàn)EGCG和ECG的線性范圍和相關(guān)系數(shù)分別為159.4～797.0 mg/L，R=0.999 6和40.16～120.18 mg/L，R=0.999 7，方法的精密度和重復(fù)性良好。郭佳莉等人[30]利用超聲波提取茶多酚，并采用高效液相色譜法分析測(cè)定相同產(chǎn)地不同級(jí)別茶葉的茶多酚，其線性范圍和相關(guān)系數(shù)分別為0.6～3.0 mg/L，R=0.999 6～0.999 9，方法的精密度和重復(fù)性較好。HPLC可以同時(shí)準(zhǔn)確測(cè)定多組分，但操作要求高、費(fèi)用較高且費(fèi)時(shí)。

1.2.2 柱色譜法

柱色譜法（Column Chromatography，CC）主要基于樣品在兩相中各組分的分配系數(shù)差異，因而在流動(dòng)相中的遷移速度也不同，以實(shí)現(xiàn)組分的分離。袁華等人[31]以粗茶多酚為原料，以硅膠為吸附劑，發(fā)現(xiàn)茶多酚中兒茶素含量大于90%，其中酯型兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯含量超過(guò)60%。羅超華等人[32]優(yōu)化茶多酚中EGCG分離純化工藝路線，發(fā)現(xiàn)純品表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯含量超過(guò)90%。朱宇惠等人[33]利用沉淀法去除茶多酚粗品中的雜質(zhì)，然后采用柱層析法純化精制茶多酚。提出了沉淀-柱層析法新方法，發(fā)現(xiàn)該方法對(duì)茶多酚的分離測(cè)定有一定的實(shí)用性和可行性。

1.2.3 高效薄層色譜法

高效薄層色譜法（High-Performance Thin Layer Chromatographic，HPTLC）則能較好地解決高效液相色譜法每次只能進(jìn)一個(gè)樣，待測(cè)樣品數(shù)量大、耗時(shí)較多，檢測(cè)費(fèi)用也高。王麗麗等人[34]以體積比12.5∶7.5∶2.2的三氯甲烷-丙酮-甲酸為展開(kāi)劑，可較好地分離茶葉中的表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯、沒(méi)食子兒茶素、表兒茶素沒(méi)食子酸酯、兒茶素單體。傅冬和等人[35]用乙醇-丙酮-冰醋酸（5∶5∶3）為層析展開(kāi)劑在聚酞胺薄膜板上進(jìn)行層析分離，可有效地分離兒茶素單體，是一種較好的分離測(cè)定方法。

1.3 電化學(xué)分析法

電化學(xué)分析法（Electrochemical Analysis，EA）是基于茶葉中茶多酚的電化學(xué)性質(zhì)及其變化規(guī)律，通過(guò)電化學(xué)參數(shù)（如電位、電導(dǎo)、電流）與被測(cè)物質(zhì)濃度間的關(guān)系進(jìn)行定性定量的方法。丁亞平等人[36]結(jié)合示位法和電位分析法，根據(jù)KBrO3和KBr的歧化反應(yīng)與茶多酚的溴代反應(yīng)間的速度不同，提出了檢測(cè)分析痕量茶多酚的方法。朱丹等人[37]比較銀電極、碳糊電極和玻碳電極在循環(huán)伏安法的基礎(chǔ)上，測(cè)定茶多酚含量的有效性，發(fā)現(xiàn)玻碳電極具有最佳的重復(fù)性和準(zhǔn)確性，可用于茶多酚的快速檢測(cè)。

1.4 毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳（Electrophoresis，EC）是利用不同粒子的遷移速度，最終以不同的速度到達(dá)檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，產(chǎn)生按時(shí)間分布的電泳圖譜[38]。夏文娟[39]利用250 mmol/LH3BO4，10 mmol/LKH2PO4、0.75 mmol/L SDS和20%乙腈組成的pH值為7.5的電泳介質(zhì)，電壓、柱溫和波長(zhǎng)分別為25 kV，20℃，200 nm，發(fā)現(xiàn)標(biāo)樣中的4種主要茶黃素類單體可在10 min以內(nèi)快速分離，具有較高檢測(cè)靈敏度。馬曉年等人[40]在含有10 mmol/L Na2B4O7、5 mmol/Lβ-環(huán)糊精和8%乙腈的運(yùn)行緩沖溶液中，分離電壓、毛細(xì)管柱溫和波長(zhǎng)分別為20 kV，25℃和200 nm，兒茶素、表兒茶素、槲皮素、山奈酚和楊梅素的含量可在14 min有效分離和檢測(cè)，說(shuō)明可用于分離測(cè)定茶葉中的多種成分。

CE具有高效、快速、簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，在生命科學(xué)、藥物分析和環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用前景。但是也存在一些問(wèn)題，如線性范圍窄、重現(xiàn)性差、分析精確度不高。

2 結(jié)語(yǔ)

茶多酚是茶葉中主要的活性成分，具有抗癌、抗腫瘤、抗氧化、抑菌等功效，對(duì)人體的健康有重要作用，在測(cè)定茶葉中的茶多酚含量時(shí)，可根據(jù)茶多酚的性質(zhì)采用多種方法測(cè)定分析，從而評(píng)價(jià)茶葉品質(zhì)和分級(jí)。色譜分析法精確度較和靈敏性高，可進(jìn)行多組分的檢測(cè)；光譜分析法是近幾十年來(lái)發(fā)展最迅速的分析工具之一，操作相對(duì)簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速、測(cè)定結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確，也是傳統(tǒng)化學(xué)分析方法的替代方法；電化學(xué)分析法重復(fù)性和準(zhǔn)確性好、時(shí)間短，可用于快速檢測(cè)；毛細(xì)管電泳法重復(fù)性相對(duì)較差、分析精度不高、誤差大。選取高效合理準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，可對(duì)茶葉進(jìn)行品質(zhì)鑒定和分級(jí)，促進(jìn)其在食品、醫(yī)療和工業(yè)等領(lǐng)域的應(yīng)用。