TP-光激化學發光、TPPA、TRUST試驗的臨床應用評價

陶春妃

摘要：目的? 通過對TP-光激化學發光、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）、甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）的臨床應用進行評價，為臨床醫生在不同情況下選擇梅毒螺旋體抗體檢測方法提供依據。方法? 選取2019年4月1日～7月31日我院11619例住院患者、2458例門診患者及2983例健康體檢者進行TP-光激化學發光和TRUST檢測，將TP-光激化學發光檢測陽性或TRUST檢測陽性的標本進行TPPA法檢測，比較TP-光激化學發光及TRUST檢測結果，TP-光激化學發光、TRUST檢測及TPPA法檢測結果及檢測梅毒螺旋體抗體的診斷價值，TP-光激化學發光、TRUST檢測梅毒螺旋體抗體的診斷價值及TP-光激化學發光法S/CO值與TPPA結果。結果? TP-光激化學發光檢測門診陽性率為6.18%，住院陽性率為3.46%，體檢陽性率為0.67%;TRUST檢測門診陽性率為3.42%，住院陽性率為1.11%，體檢陽性率0.27%。對557例TP-光激化學發光陽性和222例TRUST檢測陽性的標本同時進行TPPA法檢測，TPPA法陽性率為79.73%，TP-光激化學發光陽性率為98.30%，TRUST陽性率為37.82%，三種方法檢測結果兩兩比較，差異有統計學意義（P<0.05）。TRUST檢測梅毒螺旋體抗體的敏感度低于TP-光激化學發光，差異有統計學意義（P<0.05）。以TPPA結果為標準，通過對TP-光激化學發光結果的S/CO值分段分析，結果顯示S/CO值越高，與TPPA的陽性符合率越高。結論? TP-光激化學發光靈敏度高，適用于梅毒的感染篩查及輔助診斷;TPPA法檢測適用于梅毒感染的確診，能有效排除TP-光激化學發光和TRUST假陽性的問題;TRUST檢測靈敏度較低，對梅毒螺旋體的篩查結果準確性不及TP-光激化學發光和TPPA法檢測，不適合用于梅毒感染的篩查，可聯和使用TP-光激化學發光以提高診斷梅毒的準確率。

關鍵詞：梅毒;梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗;TP-光激化學發光;甲苯胺紅不加熱血清試驗

中圖分類號：R446.1? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.23.052

文章編號：1006-1959（2019）23-0164-03

Clinical Application Evaluation of TP-photoexcited Chemiluminescence，TPPA and TRUST Test

TAO Chun-fei

（Department of Clinical Laboratory，the Third People's Hospital of Chengdu，Chengdu 610031，Sichuan，China）

Abstract：Objective? To evaluate the clinical application of TP-photochemiluminescence， treponema pallidum gelatin aggregation test （TPPA） and toluidine red non-heated serum test （TRUST）， and provide a basis for clinicians to choose the detection method of Treponema pallidum under different conditions. Methods? From April 1st to July 31st， 2019， 11619 inpatients， 2458 outpatients and 2983 physical examination patients in our hospital underwent TP-photochemiluminescence and TRUST test， and TP-photochemiluminescence detection was positive or TRUST Detecting positive samples by TPPA method， comparing TP-photoexcited chemiluminescence and TRUST detection results， TP-photoexcited chemiluminescence， TRUST detection and TPPA detection results and detection of syphilis antibody diagnostic value， TP-photochemical chemiluminescence ， TRUST test the diagnostic value of Treponema pallidum antibody and TP-photochemiluminescence S/CO value and TPPA results.Results The positive rate of TP-photochemiluminescence detection was 6.18%， the hospitalization positive rate was 3.46%， the positive rate of physical examination was 0.67%; the positive rate of TRUST test was 3.42%， the hospitalization positive rate was 1.11%， and the positive rate of physical examination was 0.27%. 557 cases of TP-photoexcited chemiluminescence and 222 positive samples were tested by TPPA. The positive rate of TPPA was 79.73%， the positive rate of TP-photochemiluminescence was 98.30%， and the positive rate of TRUST was 37.82%. The results of the three methods were compared，the difference was statistically significant （P<0.05）. The sensitivity of the TRUST test for Treponema pallidum was lower than that of TP-photochemiluminescence，the difference was statistically significant （P<0.05）. Based on the TPPA results， the S/CO value of the TP-photoexcited chemiluminescence results was analyzed by segmentation. The results showed that the higher the S/CO value， the higher the positive coincidence rate with TPPA.Conclusion? TP-photosensitive chemiluminescence sensitivity is high， suitable for syphilis infection screening and auxiliary diagnosis; TPPA method is suitable for syphilis infection confirmation， can effectively eliminate TP-photoexcited chemiluminescence and TRUST false positive problem; TRUST detection sensitivity low， the screening results of Treponema pallidum are less accurate than TP-photochemiluminescence and TPPA detection， not suitable for screening for syphilis infection， and can be combined with TP-photochemiluminescence to improve the accuracy of diagnosis of syphilis.

Key words：Syphilis;Syphilis spirogel gel particle agglutination test;TP-photoexcited chemiluminescence;Toluidine red unheated serum test

梅毒（syphilis）是由蒼白螺旋體引起的慢性、系統性性傳播疾病。由于梅毒螺旋體無法進行實驗室培養，且針對其病原體的檢測較為困難（兔接種試驗要求時間過長，而暗視野顯微鏡檢測螺旋體方式需在實驗室中進行）[1，2]。但由于多數梅毒感染者為無癥狀或皮損癥狀為一過性，因此梅毒的血清學檢測應用更加迫切。我院梅毒血清學檢測流程，特異性梅毒螺旋體血清試驗選用TP-光激化學發光，血清非特異性梅毒螺旋體血清試驗選用甲苯胺紅不加熱血清試（TRUST）。所有標本選用TP-光激化學發光和TRUST進行初篩，對于TP-光激化學發光和TRUST陽性的標本加做TPPA試驗。TPPA是目前公認的梅毒抗原血清學試驗的“金標準”[3]，常用于新方法、新試劑的參照標準。本研究通過對不同試驗方法的敏感度、特異度及準確度進行分析，探討其臨床應用價值，為臨床醫生在不同情況下合理選擇梅毒螺旋體抗體檢測方法及結果的判讀提供依據。

1資料與方法

1.1一般資料? 收集2019年4月1日～7月31日成都市第三人民醫院共17132例患者，其中住院患者11691例、門診患者2458例、健康體檢者2983例;男性8863例，女性8269例。均行梅毒螺旋體抗體相關檢測。

1.2試劑? TP-光激化學發光檢測試劑盒購自博陽生物科技（上海）有限公司;TRUST試劑盒購自上海榮盛生物藥業有限公司;TPPA試劑盒購自富士瑞必歐株式會社。所有試劑均在有效期內嚴格按標準操作規程文件操作。

1.3檢測方法? 所有患者均進行TP-光激化學發光和TRUST檢測，對TP-光激化學發光方法檢測陽性和TRUST檢測陽性的標本同時再進行TPPA法檢測。

1.3.1 TP-光激化學發光? 基礎原理是一種均相免疫反應，主要由TP15-1抗原、TP17-1抗原、TP47-1抗原包被的發光微粒、生物素標記TP15-2抗原、TP17-2抗原、TP47-2抗原組成。TP-光激化學發光法試劑試用前平衡至環境溫度，在反應孔中分別加入25 μl樣本及陰性對照、陽性對照及參考樣品。接下來在反應孔中依次加入25 μl試劑1和25 μl試劑2。把反應孔放入儀器，由儀器自動操作。最后經軟件計算出S/CO值，并判斷陰陽性。

1.3.2 TRUST檢測? 在23～29℃條件下進行，紙卡圈中加入50 μl血清，用生理鹽水將血清進行2、4、8倍的稀釋，用專用滴管及針頭垂直分別加TRUST試劑1滴于上述血清中，按1000 r/min轉8 min進行測定，反應完成后立即用肉眼進行結果觀察，陽性標準根據說明書來界定，以確定陽性樣本的最高稀釋倍數。

1.3.3 TPPA法? 采用的抗原是超聲裂解梅毒螺旋體，用樣品稀釋液將血清進行5、10、20、40倍的稀釋，依次向20倍孔和40倍孔滴加未致敏明膠粒子和致敏明膠粒子各25 μl，將反應板置于濕盒中2 h后觀察反應結果。如果致敏粒子形成不規則的雜亂聚集則為陽性，相反致敏粒子形成圓形且光滑的聚集則為陰性。

1.4評價方法? 比較TP-光激化學發光及TRUST檢測結果、三種方法檢測結果及檢測梅毒螺旋體抗體的診斷價值，TP-光激化學發光、TRUST檢測梅毒螺旋體抗體的診斷價值及TP-光激化學發光法S/CO值與TPPA結果。

1.5統計學處理? 采用Excel 2007軟件進行統計分析，計數資料以（%）表示，采用？字2檢驗。以P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1 TP-光激化學發光與TRUST檢測結果? 共17132例患者，TP-光激化學發光檢測門診陽性率為6.18%，住院陽性率為3.46%，體檢陽性率為0.67%;TRUST檢測門診陽性率為3.42%，住院陽性率為1.11%，體檢陽性率0.27%，見表1。

2.2 TP-光激化學發光、TRUST檢測及TPPA法檢測結果比較? 共557例TP-光激化學發光陽性和222例TRUST檢測陽性的標本同時進行TPPA法檢測，TPPA法陽性率為79.73%，TP-光激化學發光陽性率為98.30%，TRUST陽性率為37.82%，三種方法檢測結果兩兩比較，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.3 TP-光激化學發光法的S/CO值與TPPA結果比較? 以TPPA結果為標準，通過對TP-光激化學發光結果的S/CO值分段分析，結果顯示TP-光激化學發光法的S/CO值越高，與TPPA的陽性符合率越高，見表3。

2.4 TP-光激化學發光、TRUST檢測梅毒螺旋體抗體的診斷價值比較? TRUST檢測梅毒螺旋體抗體的敏感度低于TP-光激化學發光，差異有統計學意義（P<0.05），見表4。

3討論

梅毒的傳播途徑主要是性傳播、母嬰傳播等。此病可使孕婦流產，或致胎兒死亡，嚴重威脅人們的生命健康[4]。由于梅毒螺旋體無法在實驗室培養，因此針對病原體的檢測較為困難。雖然免疫熒光抗體定量檢測結果較可靠，但由于其對實驗室條件與人員技術水平的要求較高且所用試劑比較昂貴，并不適合梅毒的初篩，并且有類風濕因子等因素的干擾，其特異度并不高。因此尋找檢測快速，準確度高的梅毒血清學試驗意義重大。

本研究結果發現，住院患者TP-光激化學發光法檢測陽性率為3.46%，TRUST檢測陽性率為1.11%;門診患者TP-光激化學發光法檢測陽性率為6.18%，TRUST檢測陽性率為3.42%;健康體檢者TP-光激化學發光法檢測陽性率為0.67%，TRUST檢測陽性率為0.27%。分析原因：門診患者是有癥狀及有目的的針對性檢測，因此陽性率較另外兩種方法高;住院患者為手術前或輸血前篩查，陽性率低于門診患者;健康體檢者是正常人群，陽性率最低。另外，本研究通過對587例TP-光激化學發光檢測陽性和222例TRUST檢測陽性的標本同時進行TPPA試驗驗證，結果顯示TPPA試驗陽性率為79.73%，說明TPPA試驗能有效排除TP-光激化學發光試驗和TRUST的假陽性情況。但是，患者在感染梅毒后，特異性抗體幾乎呈終身陽性狀態[5，6]，即使經過規范治療也很少轉陰，是梅毒感染的記憶性抗體標志[7]，且TPPA試驗操作復雜需人工判讀結果，不適合大樣本量檢測，其應用受到一定限制。TRUST試驗陽性率較低，僅37.82%，TP-光激化學發光法檢測陽性率為98.30%。由此可見，與TRUST相比較，TP-光激化學發光具有明顯的優勢。TRUST法是檢測非特異性類脂抗體的重要方法[8]，肉眼可判讀檢測結果，但一些疾病和生理因素易出現梅毒血清學試驗生物學假陽性，如細菌性心內膜炎、軟下疳、病毒性肝炎、傳單增多癥、惡性腫瘤、SLE類多發性骨髓瘤、年老、妊娠、毒品等。本研究結果顯示，TP-光激化學發光法的靈敏度為100.00%，特異度位99.35%，適用于梅毒的感染篩查及輔助診斷;TP-光激化學發光是一種均相免疫反應，檢測時間短，適用于透析、急診患者的梅毒快速檢測。TRUST的靈敏度為44.44%，低于TP-光激化學發光，說明TRUST篩查會漏檢很多梅毒抗體血清陽性的早期梅毒患者。本研究以TPPA為標準，對577例TP-光激化學發光結果的S/CO值分段分析，結果顯示在低值段區間，陽性符合率較低，隨著S/CO值的升高，陽性符合率越高?？赡茉摲`敏度較高，在低值段區間易出現假陽性結果，間接證明TPPA確證試驗能有效排除TP-光激化學發光試驗的假陽性結果。

盡管實驗室檢測梅毒螺旋體感染的方法很多，但其各有優缺點：TP-光激化學發光靈敏度高，適用于梅毒感染的篩查及輔助診斷;TP-光激化學發光檢測時間短，適用于透析、急診患者的梅毒快速檢測;TRUST檢測靈敏度較低，不適合用于梅毒感染的篩查，但可用于監測梅毒的復發與再感染，可聯合TP-光激化學發光提高診斷的準確率。在實際工作中，對于TP-光激化學發光和TRUST陽性的標本要用TPPA法檢測進行確證，臨床醫師需根據具體情況作出判斷，正確解讀結果，有效提高檢出率。

參考文獻：

[1]孫蓉，張玲.梅毒特異性抗體和非特異性抗體同時檢測的臨床意義[J].實驗與檢驗醫學，2015，31（1）：92-94.

[2]但吉元，劉丹.淺析梅毒特異性抗體與非特異性反應素檢測診斷隱性梅毒的準確度[J].中外健康文摘，2013（23）：197-198.

[3]趙娜，劉瑞霞，李魯平，等.捕獲法ELISA檢測TP-IgM抗體在各期梅毒診斷及療效評估中的應用[J].中國病原生物學雜志，2015，10（12）：1104-1107.

[4]夏浩海，錢小蓮.快速血漿反應素試驗及酶聯免疫吸附試驗在梅毒診斷中的應用[J].國際檢驗醫學雜志，2015，36（8）：1141-1142.

[5]孔海芳，閆伯英，楊華，等.三種梅毒血清學檢測方法的臨床評價[J].中國皮膚性病學雜志，2016，30（2）：164-166.

[6]郭熾星，勞麗嫦，蔣敏慧，等.梅毒螺旋體4種血清學檢測方法的臨床評價[J].中華醫院感染學雜志，2016，37（11）：1484-1485.

[7]Lin LR，Tong ML，Fu ZG，et al.Evaluation of a colloidal goldimmunochromatography assay in the detection of treponemapallidum specific IgM antibody in syphilis serofast reaction patients：a serologic marker for the relapse and infection of syphilis[J].Diagn Microbiol Infect Dis，2011，70（1）：10-16.

[8]施俊，李玲，朱精華.不同梅毒血清學檢測方法的臨床價值[J].臨床血液學雜志，2014，27（10）：857-859.

收稿日期：2019-8-29;修回日期：2019-9-16

編輯/錢洪飛