淺談《樣品中細菌總數測定》的稀釋計算

羅麗

（連云港師范高等專科學校 海洋港口學院，江蘇連云港 222000）

許多研究和檢測都需要確定所采集樣品中細菌的數量，最常使用的就是細菌平板計數法。而當中最重要的操作環節就是需要對樣品進行逐級稀釋，直到稀釋的程度可以在平板上長出25～250個單菌落。不在此范圍之中，太少則不能滿足統計分析要求，超過則使得菌落密集不利于單個菌落的區分和計數。混菌涂布平板采用的稀釋范圍多數在10-3～10-8范圍，每個稀釋度做兩個重復以保障更高的精度。下面將使用3個例子介紹不同的稀釋操作[1-3]情況下該如何進行正確的計算。

1 實驗

1.1 常規10倍梯度稀釋法的計算

根據圖1展示的稀釋操作，計算最初樣品中的細菌量。

說明：1 mL表示1mL上一管樣品溶液，9 mL表示9mL生理鹽水

圖1 常規10倍梯度稀釋圖例

帶少量溶質（樣品）的溶液常會用一定體積或重量的溶質與稀釋液終濃度的比率來表示。如圖1中取1體積（mL）樣品添加到9體積（mL）溶劑中，得到1/10稀釋比率溶液，經過4次稀釋，最后1管的中樣品的最終稀釋率為：

平板中涂布的是1mL的1/10000稀釋液，生長的單菌落數是138個，則最初的樣品中的細菌數為1.38×106個。計算方法如下：

細菌數/mL=最終平板菌落數/稀釋率=138/10-4=1.38×106

1.2 100倍梯度稀釋法的計算

根據圖2展示的稀釋操作，計算最初樣品中的細菌量。

圖2 100倍梯度稀釋圖例

如圖2中取0.1體積（mL）樣品添加到9.9體積（mL）溶劑中，得到1/100稀釋比率溶液，經過3次稀釋，最后1管的中樣品的最終稀釋率為：

平板中涂布的是0.1 mL的1/10-6稀釋液，生長的單菌落數是58個，則最初的樣品中的細菌數為5.8×108個。計算方法如下：

細菌數/mL=（最終平板菌落數/稀釋率）÷涂布體積=（58/10-6）÷0.1 mL=5.88

1.3 無規律梯度稀釋法的計算

根據圖3展示的稀釋操作，計算最初樣品中的細菌量。

如圖3中取1體積（mL）樣品添加到9體積（mL）溶劑中，得到1/10稀釋比率溶液，第二次取3體積加入到27體積溶劑中，仍然得到1/10稀釋比率溶液。第三次1體積加入9體積溶劑中，得到的還是1/10稀釋比率。第四次取0.5體積加入4.5體積溶劑中；第五次2體積加入到8體積溶劑中，第六次1體積加入到9體積溶劑中，均得到的溶液稀釋比率為1/10。所以雖然操作中采用各種體積取樣稀釋，其實得到的都是相同的稀釋比率。經過6次稀釋，最后1管的中樣品的最終稀釋率為：

圖3 無規律梯度稀釋圖例

平板中涂布的是0.01 mL的1/10-6稀釋液，生長的單菌落數是96個，則最初的樣品中的細菌數為9.6×109個。計算方法如下：

細菌數/mL=（最終平板菌落數/稀釋率）÷涂布體積=（96/10-6）÷0.01mL=9.6×109

2 結論

稀釋問題是微生物課程中必不可少的部分[4]，也是學生易計算錯誤的地方。通過在課堂中展開不同稀釋操作實例計算，可以幫助學生理解樣品的多步稀釋計算問題。教師在開展教學過程中應根據教學內容、教學對象安排稀釋問題的講解并保障學生充足的課堂計算練習，從而切實地幫助學生掌握處理樣品的稀釋問題并能正確計算。