2種血液分析儀檢測1例嗜酸性粒細胞顆粒減少標本結果分析

張 馳

（華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院檢驗科，湖北 武漢 430030）

現有的五分類血液分析儀大多采用射頻/直流電檢測方法，配合熒光染色技術，通過激光照射，在鞘流液的作用下，收集不同角度的吸收光和發散光，從而對細胞進行分類。然而，嗜酸性粒細胞（eosinophil，EO）顆粒減少會改變吸收光和發散光的強度，使細胞坐標落在非預期區域內，從而導致檢測結果錯誤。本研究對1例EO顆粒減少患者2種血液分析儀的檢測結果進行了分析、比較。

1 材料和方法

1.1 研究對象

患者，男，49歲，因皮膚瘙癢伴紅疹至華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院門診就診，并診斷為特發性EO增多癥，該患者EO胞質內嗜酸性顆粒減少，總免疫球蛋白E（immunoglobulin E，IgE）水平為1 345 IU/mL。

1.2 儀器與試劑

XE-5000全自動血液分析儀（簡稱XE-5000）（日本Sysmex公司）及配套試劑，該儀器通過核酸熒光染色及半導體激光流式細胞術對白細胞（white blood cell，WBC）進行檢測和分類[1]；CELL-DYN Sapphire血液分析儀（簡稱Sapphire）（美國Abbott公司）及配套試劑，該儀器采用多角度偏振光散射法，通過0°/7°散射光來獲得散點圖，從而對WBC進行檢測和分類[2]；DM1000顯微鏡（德國Leica公司）。

1.3 方法

采集研究對象血液標本，并采用乙二胺四乙酸二鉀進行抗凝處理，所有檢測在2 h內完成。XE-5000和Sapphire均采用普通閉合模式完成檢測。按《全國臨床檢驗操作規程》（第3版）[3]要求制作血涂片，并進行染色。采用人工鏡檢連續分類200個WBC，并計算中性粒細胞（neutrophil，NEUT）百分比（NEUT%）、淋巴細胞（lymphocyte，LYM）百分比（LYM%）、單核細胞（monocyte，MO）百分比（MO%）、EO百分比（EO%）、嗜堿性粒細胞（basophil，BA）百分比（BA%）。

2 結果

2.1 WBC分類結果

XE-5000和Sapphire均未檢出EO，而人工鏡檢EO%檢測結果為47.5%；XE-5000和Sapphire LYM%、MO%檢測結果與人工鏡檢結果基本一致，而NEUT%與人工鏡檢NEUT%+EO%結果基本吻合。見表1。

2.2 WBC散點圖

XE-5000 WBC散點圖顯示，有1個細胞群（天藍色部分）與NEUT細胞群部分重合，而預期EO區域卻無散點分布，說明儀器將EO顆粒減少的細胞群錯認為NEUT細胞群，見圖1。Sapphire WBC散點圖顯示，有1個細胞群（白色部分）與NEUT細胞群（黃色部分）大部分重合，而預期EO區域卻無散點分布，見圖2。人工鏡檢發現EO的嗜酸性顆粒明顯減少，見圖3。

表1 XE-5000和Sapphire檢測結果與人工鏡檢結果的比較 （%）

圖1 XE-5000研究對象與正常人群WBC散點圖

圖2 Sapphire研究對象與正常人群WBC散點圖

圖3 人工鏡檢研究對象與正常人群EO形態比較

3 討論

EO增多常見于寄生蟲病、過敏性疾病（支氣管哮喘、壞死性血管炎及藥物過敏反應）及某些血液病[4]。該患者人工鏡檢結果提示EO%明顯增高（47.5%），總IgE水平也高達1 345 IU/mL，皮膚出現瘙癢伴紅疹情況，提示機體可能出現嚴重過敏反應。雖然該患者EO胞質內嗜酸性顆粒減少明顯（圖1），看似NEUT顆粒相對增多，但是仍可通過人工鏡檢根據顆粒形態對二者進行仔細辨別（NEUT顆粒細小、均勻，EO顆粒粗大、折光性強）。這雖不影響人工辨識，但對儀器檢測卻有致命的干擾。程翔等[5]的研究結果表明，亞硝酸鹽中毒可使檢測對象NEUT呈弱堿性，NEUT顆粒呈嗜酸性，導致XN-3000全自動血液分析儀（日本Sysmex公司）將其誤認為EO。當NEUT和EO胞質內顆粒發生改變時，儀器無法對二者進行辨別，須從檢測原理上進行分析。

前向散射光可用來反映WBC體積大小；側向散射光可反映胞質內顆粒數量；側向熒光可反映DNA和RNA的含量。嗜酸性顆粒因其大而圓，比其他細胞內顆粒更有折光性，故在5類WBC中側向散射光最大，而核酸物質卻與NEUT相當，所以有著類似的側向熒光。嗜酸性顆粒減少EO的側向散射光小于正常EO，卻與NEUT的側向散射光較為接近，使得該類細胞散點坐標與NEUT散點坐標重合，故儀器無法清楚地區分這2群細胞（圖1）。Sapphire通過多角度偏振光散射法對WBC進行分類，在鞘流液作用下單個血細胞通過激光束照射，在各個方向產生散射光，儀器對多個角度散射光信號進行收集，其中0度為前向散射光，可反映細胞大小，7度為狹角散射光，可反映細胞內結構和復雜性。EO因體積略小于NEUT，細胞內結構較LYM稍復雜，而位于LYM群與NEUT群中間。該患者EO胞質內嗜酸性顆粒減少，同時中性顆粒相對增多，細胞內復雜性增強（7度狹角散射光更強），且細胞體積比正常EO更大（0度前向散射光更強），故該細胞群在WBC散點圖中的所在區域與NEUT細胞群區域基本重合，導致儀器無法對二者進行區分（圖2）。

綜上所述，為了避免EO顆粒減少或缺失而產生的血液分析儀EO假性減少的情況，需對NEUT%異常增高的標本結合WBC散點圖進行分析。當NEUT散點群疑似與另一細胞群部分重疊而導致散點群形態不規則（非橢圓形）時，須手工推片復檢，以得到準確、可靠的檢測結果。