中草藥對奶牛臨床型乳腺炎病原菌的體外抑菌試驗研討

摘要：奶牛乳腺炎作為一種比較常見的奶牛疾病，會影響奶牛產奶量，導致奶牛養殖經濟效益不斷降低，會喪失泌乳功能而被迫淘汰奶牛，且會對牛奶品質造成影響，不利于人們的身體健康。根據研究發現，該病的發生率大約控制在25-60%之間，每年所造成的經濟損失高達20億美元。

關鍵詞：中草藥;奶牛;臨床型乳腺炎病原菌;體外抑菌試驗

臨床上關于奶牛乳腺炎的治療，主要是藥物療法，即采用抗生素、激素與化學合成藥，其中抗生素發揮了主要作用，但是也帶來各種問題，如造成內分泌紊亂、增加耐藥菌株、殘留過多的抗生素與獸藥等，進而會對人類身體健康造成嚴重威脅。按照國家相關衛生指標，要求牛奶中不殘留任何抗生素，因此這對于治療奶牛乳腺炎提供了一定挑戰。當下，關于該病的治療，中藥治療已經引起國內外專家的高度重視，其除了具有一系列特點之外還具有藥物、營養的雙重功能，如消炎、抗菌、無毒或低毒、低殘留或無殘留等。我國積極的研究了中藥治療效果，認為該病的產生與濕、痰、氣、血郁結不散，化而為炎造成的，因此本文在分析中草藥的體外抗菌活性時本著清熱解毒、消腫止痛、通經活絡等原則，為疾病的治療提供科學的理論依據。

一、材料與方法

（一）菌種來源與中藥

本次研究選取2個牛場中的6個供試奶牛場臨床型乳腺炎奶羊，在此基礎上積極的開展乳腺病原學鑒定，將7種致病菌保存下來。

麻黃、桔梗、大貝、蒲公英、白花蛇草、甘草、板藍根、半枝蓮等。

（二）方法

（1）中藥制備

水提法：取一定量的單味中草藥，用去離子水進行半個小時的浸泡，然后加熱到沸騰狀態后用文火進行半個小時的煎煮，過濾時使用8層紗布，反復進行2次煎煮，合并濾液，濃度控制為1g/ml，放在100℃的流通蒸汽上進行15分鐘滅菌，然后保存在4℃的冰箱中備用。

（2）培養基制備

①關于固體、液體培養基的配制需要采用常規方法。鋪板時，采用高壓滅菌的方式處理培養基，降低溫度到50-60℃之間，將板趁熱鋪到無菌超凈工作臺內，導入12cm直徑的滅菌培養皿內（21個），將蓋子蓋上并保存在無菌超凈臺內備用。

②鏈球菌的培養，即需要將2%小牛血清加入到部分固體、液體培養基中，普通瓊脂基經過高壓滅菌后進行冷卻，溫度維持在50℃左右，然后將2%的新鮮小牛血清加入后均勻的混合，同樣需要趁熱完成鋪板工作，倒入9cm直徑的滅菌培養平皿（7個），保存在無菌超凈工作臺內待用。

③關于酵母菌的培養，需要通過制作馬鈴薯培養基的方式。即鋪板時，高壓滅菌培養基，降低溫度在50-60攝氏度，趁熱做好鋪板工作，倒入7個直徑12cm的滅菌培養平皿中，蓋蓋保存在無菌超凈臺內。

（3）1.2.3接種物制備

在普通營養瓊脂培養基上取正在生長的試驗菌，使用接種環挑取3-5個形態具有相似性的待檢菌落，在水溶酪蛋白肉湯4-5ml中接種，在35℃的條件下進行2-6小時的孵化，涂菌時使用生理鹽水或MH肉湯校正菌液濃度。

（4）涂菌

取滅菌平皿培養基20個，直徑為12cm，編號分為5組，分別接種0.15ml的金色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌以及綠膿桿菌，領取一個AE平皿不進行涂菌處理，僅作為空白對照。

取平皿培養基5個，直徑9cm，接種0.25ml稀釋的鏈球菌，編寫F1-F5，其中空白對照的為F5、不涂菌;在培養基表面使用涂菌棒均勻的涂抹菌液。

取平皿培養基5個，直徑12cm，接種0.25ml稀釋的酵母菌，編號G1-G5，其中G5不涂菌、為空白對照。

（5）打孔

在涂菌瓊脂培養基上使用3cm打孔器均勻打孔，編號，其中空白對照為AE、F5和G5，保證孔徑大小與深度一致，在酒精燈上略微的加熱打好的孔，熔化局部培養基使其重新凝固并緊密結合平皿底壁，避免底部縫隙中流出加入的藥液而影響試驗結果[3]。

（6）加藥

將3種藥加入到平皿中，每種藥液加入兩孔為平行樣，每孔加入藥液20ul，為保證結果的準確性需要平放平皿避免溢出藥液，在37℃恒溫箱中放置進行24小時的培養。

（7）觀察與記錄

對抑菌圈直徑大小進行觀察、測量，每孔不同方向進行2次測量，最終取4次結果的平均值。

（8）判定標準

根據《中藥制備經驗錄》中關于“中草藥抑菌作用實驗”中提出的方法。

二、結果

對于不同菌株抑制效果而言，盡管采用同樣的中草藥但是會取得不同效果，詳情如下表1：

三、討論

當下，臨床上關于中草藥對病原菌的體外抑菌試驗研究報道較多，采用多種研究方法，如紙片抑菌法、管碟法、平皿稀釋法等，對于中草藥抑菌活性主要定性分析居多。本次研究在定量分析中草藥體外抗菌活性時采用試管2倍稀釋法，能夠提供一定理論依據來制定科學的中草藥制劑組方。同時，抗生素是治療、預防各種感染性疾病的主要藥物，能夠對病原微生物產生強烈的殺傷作用，且對人體產生的毒副作用較大，甚至會威脅到生命安全。基于此，需要在掌握適應癥的基礎上，對抗生素進行正確、合理的使用呢，在天然藥物中尋找理想的抗菌藥物，即極具抗菌作用和毒副作用小的，在傳統中醫藥藥物中對于新型抗菌藥物的尋找是一種良好的途徑。

縱觀流行病學的調查結果可知，臨床型乳腺炎奶牛的表現以乳房炎癥反應為主，如發病、疼痛、腫脹、觸診腫塊等，嚴重者會出現全身癥狀、乳汁不正常，存在不同程度的凝塊、絮片，重者會出現黃色漿液性物質。同時，疾病的產生受各種因素的影響，如環境衛生、飼養管理、季節、胎數、泌乳月等，其中發生率最高的當屬第三季度、三胎，頭胎發生率低;牛易感性最強的泌乳月當屬3-4月、第9月。根據藥敏試驗結果，對于臨床經常使用的抗菌藥物所分離菌株所產生的耐藥性較強，且抗生素殘留會造成較大的食品安全隱患，為此人們需高度重視抗生素濫用，在免疫預防時積極的接種疫苗。但是，基于乳腺病原比較復雜，不利于有效的研制與選擇疫苗，為此在今后的工作中應該重視消毒、飼養管理共組，對疫苗、抗生素進行正確合理的選擇，制定綜合防治措施積極有效的預防奶牛乳腺炎。

結語：

在奶牛場中作為常見、危害最大的一種疾病為奶牛乳腺炎，由此會導致產乳量不斷降低，還會對乳品質造成嚴重影響，尤其是隱性乳腺炎，因在臨床上變化不明顯而很難被發現。由于長期使用藥物治療，促使致病菌產生的耐藥性很強，如大環內酯類、氨基糖苷類、青霉素類、頭孢類、喹諾酮類藥物，為此本文專門探究了中草藥對奶牛臨床型乳腺炎病原菌的體外抑菌試驗。

參考文獻：

[1]王丹，楊峰，李新圃，羅金印，劉龍海，張哲，張亞茹，李宏勝.江蘇部分奶牛場乳腺炎病原菌的分離鑒定、耐藥性及血清型研究[J].中國預防獸醫學報，2018，40（08）：680-686.

[2]王雪梅，郭紅霞，郭莉娟，林琳，李建龍，代敏，孫豐慧.120株奶牛乳腺炎流行病原菌的分類和耐藥譜分析[J].成都醫學院學報，2017，12（05）：555-560.

[3]尹婷慧，王熙濤，徐永平，王麗麗，陳紅莉，吳妍妍，李曉宇.奶牛乳腺炎病原菌的分離、耐藥性分析及其特異性卵黃抗體的體外抑菌效果[J].飼料與畜牧，2015（08）：31-35.

[4]王桂英.中藥復方制劑對奶牛臨床型乳房炎病原菌的體外抑菌試驗[J].黑龍江畜牧獸醫，2010（05）：132-133.

[5]趙香汝，鄭雪花，李寸欣，徐彤，徐占云，徐明舉，薛擁志，崔紅玉，張瑞華，葛利忠.張家口地區奶牛臨床型乳房炎病原菌的中草藥體外抑菌試驗[J].黑龍江畜牧獸醫，2010（01）：138-139.

[6]伍義行，黃利權.?奶牛乳房炎防治的免疫學和藥理學機制[J].?中國獸醫雜志，2003，39（3）.doi：10.3969/j.issn.0529-6005.2003.03.019.

[7]劉學忠，王捍東.?奶牛乳房炎的病因分析[J].?中國草食動物，2002，22（3）.doi：10.3969/j.issn.2095-3887.2002.03.018.

作者簡介：

吳姣，女，漢族，陜西渭南人，碩士，助教。