番荔枝種子化學成分的研究

李 月， 盧佳慧， 李 祥， 陳建偉， 苗筠杰

（南京中醫藥大學， 江蘇 南京210023）

番荔枝種子為番荔枝科番荔枝屬植物番荔枝Annona squamosa Linn. 的干燥成熟種子［1］， 原產于美洲， 目前在我國廣東、 廣西、 云南、 海南、 福建等地都有栽培， 其性味苦、 寒， 歸心、 肺、 肝、腎、 脾經， 功效消積殺蟲、 清熱解毒、 解郁、 止血［2-3］， 常用于惡瘡腫痛、 驅蟲等［2-4］， 亦用于治療痢疾、 癲癇、 發燒、 出血和潰瘍， 也有抗腫瘤、抗生育等作用［5-7］。 本實驗對番荔枝種子超臨界CO2萃取物的化學成分進行研究， 從中分離鑒定出7 個化合物， 其中1～3 為新化合物， 4～5 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

HA2215006 超臨界CO2萃取儀（江蘇南通華安超臨界設備有限公司）； EZ Purifer 中壓制備液相［利穗科技（蘇州） 有限公司］； Shimadzu LC-20A 高壓制備液相（日本島津公司）； RE-201B 恒溫水浴鍋（南京金正教學儀器有限公司）； SHB-Ⅲ循環水式多用真空泵 （鄭州長城科工貿有限公司）； UV-2401PC 光譜儀（日本Shimadzu 公司）；SMP10 顯微熔點儀 （英國Stuart 公司）； Brucker ACF-400 核磁共振儀（德國Brucker 公司）； HRESI-Q-TOF 質譜儀（美國Waters 公司）； 柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）。 所有試劑均為分析純或色譜純（江蘇漢邦公司）； 水為超純水。

番荔枝種子購自廣東澄海， 經南京中醫藥大學藥學院陳建偉教授鑒定為正品。

2 提取分離

取番荔枝種子15 kg， 粉碎后超臨界CO2萃取3 h， 萃取條件為35 ℃、 23 MPa、 20%夾帶劑。 將萃取液濃縮至無醇味， 靜置后離心， 取上清（2.3 kg）， 過硅膠柱色譜（200 ～300 目）， 用石油醚、 乙酸乙酯和甲醇依次洗脫， 得到20 個不同餾份Fr.1～20。 使用Kedde 顯色反應選取內酯含有量較高的Fr.9 （53.8 g）， 稱取80 g 硅膠（100 ～200目） 拌樣， 再稱取665 g 硅膠（200～300 目） 干法裝柱， 石油醚-乙酸乙酯（1 ∶0、 100 ∶1、 50 ∶1、30 ∶1、 20 ∶1、 15 ∶1、 10 ∶1、 5 ∶1、 4 ∶1、 3 ∶1、 2 ∶1、 1 ∶1） 梯度洗脫， 得到組分Fr.9-1 ～Fr.9-40。 Fr.9-2 ～Fr.9-6、 Fr.9-26 ～Fr.9-29 合并，再反復經中壓、 高壓制備液相純化， 甲醇-水（80 ∶20 ～100 ∶ 0） 梯 度 洗 脫， 得 化 合 物 1（25 mg）、 2 （15 mg）、 3 （10 mg）、 4 （25 mg）、 5（10 mg）、 6 （5 mg）、 7 （8 mg）。

3 結構鑒定

化合物1： 白色粉末， 易溶于乙酸乙酯、 氯仿等有機溶劑， mp 48～51 ℃。 HR-ESI-MS m／z： ［M＋Na］＋601.444 3， 推測分子式為C36H66O5， 化合物UV λmax210 nm， Raymond 試劑反應呈紫紅色， 表明有五元不飽和內酯環的存在。 其1H-NMR 中δ 6.99， 5.00， 1.40 和13C-NMR 中δ 173.9， 134.4，148.8， 78.0， 19.2， 這些是甲基五元不飽和內酯環的特征信號［8］；1H-NMR 中δ 2.26 處的三重峰和δ 6.99 表明C-4 位沒有含氧基團取代［9］；1H-NMR中δ 3.40 （m， 2H）， 3.85 （m， 2H） 和13C-NMR 中δ 83.2， 81.8， 74.1， 74.1 的峰表明其為單THF環型番荔枝內酯類化合物兩側各有1 個羥基相鄰［10］；13C-NMR 中δ 83.2， 81.8 為THF 環上2 個連氧碳原子的信號， δ 74.1， 74.1 為THF 環相鄰羥基碳原子的信號；1H-NMR 中δ 3.40 （m， 2H），3.85 （m， 2H） 范圍內共有4 個氫信號， 其中2 個為THF 環上的氫， 2 個為與THF 環相鄰羥基碳上的氫， 表明該化合物相對構型為th／t／th［11］， 根據ESI-MS／MS 數 據 （ m／z： 241， 337， 319， 341，323， 305， 367， 331） 推斷THF 的取代位置在C-13 與C-18 之間。 綜合13C-NMR、1H-NMR、 ESI-MS及理化數據， 鑒定化合物1 為1 個新的單四氫呋喃環型番荔枝內酯類化合物， 命名為C36-solamin-A。

化合物2： 白色粉末， 易溶于乙酸乙酯、 氯仿等有 機 溶 劑， mp 44 ～46 ℃。 HR-ESI-MS m／z：［M＋K］＋629.474 8， 推測分子式為C37H66O5， 化合物UV λmax210 nm， Raymond 試劑反應呈紫紅色， 表明有五元不飽和內酯環的存在。 其1H-NMR中δ 6.99， 5.00， 1.40 和13C-NMR 中δ 174.0，134.4， 148.9， 77.4， 19.2， 這些是甲基五元不飽和內酯環的特征信號［8］；1H-NMR 中δ 2.26 處的三重峰和 δ 6.99 表明C-4 位沒有含氧基團取代［9］；1H-NMR 中δ 3.40 （m， 2H）， 3.83 （m，2H），13C-NMR 中δ 82.7， 82.6， 74.4， 73.9 的峰表明其為單THF 環型番荔枝內酯類化合物兩側各有1 個羥基相鄰［10］；13C-NMR 中δ 82.7， 82.6 為THF 環上二個連氧碳原子的信號， δ 74.4， 73.9 為THF 環相鄰羥基碳原子的信號；1H-NMR 中δ 3.40（m， 2H）， 3.83 （m， 2H） 范圍內共有4 個氫信號， 其中2 個為THF 環上的氫， 2 個為與THF 環相鄰羥基碳上的氫， 表明該化合物相對構型為th／c／th［11］， 根據ESI-MS／MS 數據（m／z： 113， 139，261， 181， 375， 387， 423， 391） 推斷THF 的取代位置在C-17 與C-22 之間及雙鍵在C25 位上。 綜合13C-NMR、1H-NMR、 ESI-MS 及理化數據， 鑒定化合物2 為1 個新的單四氫呋喃環型番荔枝內酯類化合物， 命名為cis-D25-uvariamicin-II。

化合物3： 白色粉末， 易溶于乙酸乙酯、 氯仿等有 機 溶 劑， mp 42 ～44 ℃。 HR-ESI-MS m／z：［M＋Na］＋647.459 2， 推測分子式為C37H68O7， 化合物UV λmax210 nm， Raymond 試劑反應呈紫紅色， 表明有五元不飽和內酯環的存在。 其1H-NMR中δ 7.18， 5.05， 1.41 和13C-NMR 中δ 174.6，131.2， 151.8， 78.0， 19.1， 這些是甲基五元不飽和內酯環的特征信號［8］；1H-NMR 中H-3 兩個質子不等價， 分別出現在δ 2.40 和δ 2.51 處， 結合δ 7.18， 表 明C-4 位 有 羥 基 取 代［9］；1H-NMR 中δ 3.40 （m， 2H） 和3.82～3.88 （m， 2H） 和13C-NMR中δ 83.1， 82.2， 74.6， 71.7 的 峰 表 明 其 為 單THF 環型番荔枝內酯類化合物兩側各有1 個羥基相鄰［10］；13C-NMR 中δ 83.1， 82.2 為THF 環上2 個連氧碳原子的信號， δ 74.6， 71.7 為THF 環相鄰羥基碳原子的信號；1H-NMR 中δ 3.40 （m， 2H） 和3.82～3.88 （m， 2H） 的4 個氫信號， 2 個為THF環上的氫， 2 個為與THF 環相鄰羥基碳上的氫， 表明該化合物相對構型為th／t／er［11］， 根據ESI-MS／MS 數據（m／z： 141， 233， 311， 293， 275， 293，313， 277， 385， 367， 441， 423， 405） 推斷THF的取代位置在C-16 與C-21 之間， C-4、 C-12 各有1 個羥基取代。 綜合13C-NMR、1H-NMR、 ESI-MS 及理化數據， 鑒定化合物3 為1 個新的單四氫呋喃環型番荔枝內酯類化合物， 命名為glacin-C。

化合物4： 白色蠟狀固體， mp 62～64 ℃。 HRESI-MS m／z： ［M＋Na］＋587.463 4， 推測分子式為C35H64O5。1H-NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 6.98（1H， d， J ＝1.5 Hz， H-33）， 5.00 （1H， qd， J ＝7.0， 1.5 Hz， H-34）， 3.77 ～3.82 （2H， m， H-14，17）， 3.41 （2H， m， H-13， 18）， 2.26 （2H， t， J ＝6.2 Hz， H-3）， 1.41 ～1.56 （6H， m， H-12， 19，31）， 1.30～1.70 （42H， m， H-4～11， 15 ～16， 20 ～30）， 1.41 （3H， d， J ＝7.0 Hz， H-35）， 0.88 （3H，t， J ＝7.0 Hz， H-32）；13C-NMR （100 MHz， CDCl3）δ： 173.9 （C-1）， 148.9 （C-33）， 134.3 （C-2），82.7 （C-14， 17）， 77.4 （C-34）， 74.1 （C-13， 18），33.4 （C-12， 19）， 31.9 （C-30）， 29.3 （C-16），28.8 （C-15）， 25.6 （C-3）， 25.2 ～29.7 （C-4 ～11，20 ～29）， 22.7 （C-31）， 19.2 （C-35）， 14.1 （C-32）， 根據ESI-MS 數 據 （m／z： 281， 327， 209，227， 331， 367） 推斷四氫呋喃環的取代位置在C-13 與C-18 之間。 以上數據與文獻［12］ 基本一致， 故鑒定為cis-panatellin。

化合物5： 白色蠟狀固體， mp 63～66 ℃。 HRESI-MS m／z： ［M＋Na］＋587.465 9， 推測分子式為C35H64O5。1H-NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 6.99（1H， d， J ＝1.5 Hz， H-33）， 5.00 （1H， qd， J ＝7.0， 1.5 Hz， H-34）， 3.77 ～3.83 （2H， m， H-16，19）， 3.41 （2H， m， H-15， 20）， 2.26 （2H， t， J ＝6.2 Hz， H-3）， 1.41 ～1.59 （6H， m， H-14， 21，31）， 1.30～1.69 （42H， m， H-4～13， 17 ～18， 22 ～30）， 1.41 （3H， d， J ＝7.0 Hz， H-35）， 0.88 （3H，t， J ＝7.0 Hz， H-32）；13C-NMR （100 MHz， CDCl3）δ： 173.9 （C-1）， 148.9 （C-33）， 134.3 （C-2），82.6 （C-16， 19）， 77.4 （C-34）， 74.0 （C-15， 20），33.5 （C-14， 21）， 31.9 （C-30）， 29.2 （C-18），28.8 （C-17）， 25.6 （C-3）， 25.1-29.7 （C-4 ～13，22～29）， 22.7 （C-31）， 19.2 （C-35）， 14.1 （C-32）， 根據ESI-MS 數 據 （m／z： 263， 281， 299，359， 377， 395， 269， 277） 推斷四氫呋喃環的取代位置在C-15 與C-20 之間。 以上數據與文獻［12］ 基本一致， 故鑒定為cis-solamin。

化合物6： 白色蠟狀固體， mp 67～69 ℃。 HRESI-MS m／z： ［M＋Na］＋587.465 2， 推測分子式為C35H64O5。1H-NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 6.99（1H， d， J ＝1.5 Hz， H-33）， 5.00 （1H， qd， J ＝7.0， 1.5 Hz， H-34）， 3.81 ～3.89 （2H， m， H-16，19）， 3.41 （2H， m， H-15， 20）， 2.26 （2H， t， J ＝6.2 Hz， H-3）， 1.41 ～1.59 （6H， m， H-14， 21，31）， 1.30～1.73 （42H， m， H-4～13， 17 ～18， 22 ～30）， 1.40 （3H， d， J ＝7.0 Hz， H-35）， 0.88 （3H，t， J ＝7.0 Hz， H-32）；13C-NMR （100 MHz， CDCl3）δ： 173.9 （C-1）， 148.8 （C-33）， 134.4 （C-2），83.2 （C-16）， 81.8 （C-19）， 77.4 （C-34）， 74.1（C-15， 20）， 33.5 （C-14， 21）， 31.9 （C-30）， 29.0（C-18）， 28.4 （C-17），25.7 （C-3），25.2-29.7 （C-4～13， 22～29）， 22.7 （C-31）， 19.2 （C-35）， 14.1（C-32）， 根 據 ESI-MS 數 據 （m／z： 295， 277，295， 269， 251， 299， 281， 395， 377） 推斷四氫呋喃環的取代位置在C-15 與C-20 之間。 以上數據與文獻［13］ 基本一致， 故鑒定為solamin。

化合物7： 白色蠟狀固體， mp 57～58 ℃。 HRESI-MS m／z： ［M＋Na］＋587.467 5， 推測分子式為C35H64O5。1H-NMR （400 MHz， CDCl3） δ： 6.99（1H， d， J ＝1.5 Hz， H-33）， 5.00 （1H， qd， J ＝7.0， 1.5 Hz， H-34）， 3.81 ～3.91 （2H， m， H-18，21）， 3.41 （2H， m， H-17， 22）， 2.26 （2H， t， J ＝6.2 Hz， H-3）， 1.42 ～1.58 （6H， m， H-16， 23，31）， 1.37～1.68 （42H， m， H-4～15， 19 ～20， 24 ～30）， 1.43 （3H， d， J ＝7.0 Hz， H-35）， 0.88 （3H，t， J ＝7.0 Hz， H-32）；13C-NMR （100 MHz， CDCl3）δ： 173.9 （C-1）， 148.8 （C-33）， 134.4 （C-2），82.8 （C-18）， 81.1 （C-21）， 77.4 （C-34）， 74.1（C-17， 22）， 34.3 （C-16， 23）， 31.9 （C-30）， 29.2（C-20）， 28.3 （C-19），25.8 （C-3），25.1-29.5 （C-4～15， 24～29）， 22.7 （C-31）， 19.2 （C-35）， 14.1（C-32）， 根 據 ESI-MS 數 據 （m／z： 271， 253，423， 405， 241， 323， 305） 推斷四氫呋喃環的取代位置在C-17 與C-22 之間。 以上數據與文獻［14］ 基本一致， 故鑒定為annotemoyin-1。

4 討論

研究表明， 番荔枝內酯具有較強的抗腫瘤活性［15-17］， 而番荔枝種子中含有多種該類成分， 極具開發價值。 因此， 本實驗所得化合物可進一步用于番荔枝內酯抗腫瘤的作用機理及構效關系研究。