液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定沙丁胺醇的不確定度評(píng)定

摘 要：目的：全面地分析液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定沙丁胺醇的不確定度來(lái)源與影響不確定度的因素。在測(cè)量結(jié)果處于臨界狀態(tài)時(shí)，對(duì)測(cè)量結(jié)果作出正確判定。方法：通過(guò)建立數(shù)學(xué)模型，依據(jù)JJF 1059.1-2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》、JJG 196-2006《常用玻璃量器檢定規(guī)程》和GB/T 22286-2008《動(dòng)物源性食品中多種β-受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》的規(guī)定，逐層對(duì)測(cè)量過(guò)程中的不確定度來(lái)源進(jìn)行分析，最后給出合成不確定度和擴(kuò)展不確定度。結(jié)果：按照GB/T 22286-2008《動(dòng)物源性食品中多種β-受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》測(cè)定沙丁胺醇的不確定度為1.54 μg/kg。

關(guān)鍵詞：瘦肉精;沙丁胺醇;液質(zhì)聯(lián)用

測(cè)量不確定度是表征合理的賦予被測(cè)量值的分散性、與測(cè)量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)，測(cè)量不確定度的大小反映了測(cè)量結(jié)果的質(zhì)量高低，完整的測(cè)量結(jié)果應(yīng)該包括測(cè)量不確定度。從實(shí)驗(yàn)過(guò)程的數(shù)學(xué)模型，分析實(shí)驗(yàn)過(guò)程的不確定度主要來(lái)源，對(duì)不確定度分量進(jìn)行計(jì)算并評(píng)定，使該不確定度為今后改善β-受體激動(dòng)劑殘留量檢測(cè)的測(cè)量程序，提高實(shí)驗(yàn)測(cè)量精密度和準(zhǔn)確性提供理論依據(jù)[1]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料

市售豬肉;PCX固相萃取柱（60 mg，3 mL）。

1.1.2 試劑

β-葡萄糖醛苷酸酶、乙酸銨（分析純）、氨水（分析純，含量：25%～28%）、乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）、甲酸（分析純）與沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液（編號(hào)：SB05-201-2008;產(chǎn)品批號(hào)：201901;北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司;濃度：100 μg/mL）。

1.2 儀器設(shè)備與條件

1.2.1 儀器

島津制作所（日本.京都）串聯(lián)四級(jí)桿液質(zhì)聯(lián)用儀LCMS-8045;JJ500電子天平（常熟市雙杰測(cè)試儀器廠）;V6旋渦混合器（廣州科橋?qū)嶒?yàn)技術(shù)設(shè)備有限公司）;SB-5200DTD型超聲儀（寧波新藝超聲設(shè)備有限公司）;DK-S24恒溫水浴鍋（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）;E3115臺(tái)式微量高速離心機(jī)（美國(guó)安勝科技有限公司）;Fotector-02HT固相萃取裝置（睿科儀器有限公司）;GM-0.5A真空泵（天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）;N150-氮吹儀（廣州安勝儀器有限公司）。

1.2.2 色譜條件

色譜柱為Shim-pack GIST C18（50 mm×2.1 mm，2 μm）;進(jìn)樣量：10 μL;流速為0.4 mL/min;柱溫為30 ℃;流動(dòng)相為A-0.1%甲酸/水：B-0.1%甲酸/乙腈，梯度洗脫，具體比例見(jiàn)表1。

1.2.3 質(zhì)譜條件

干燥氣為氮?dú)猓魉?5 L/min，溫度350 ℃;霧化氣：氮?dú)猓?.0 L/min;碰撞氣：氬氣;DL溫度：250 ℃;加熱模塊溫度：400 ℃;電噴霧電離正離子模式ESI（+）;離子噴霧電壓4 500 V;質(zhì)譜掃描方式：多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)（MRM）;駐留時(shí)間：20 ms;延遲時(shí)間：3 ms[2]。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

準(zhǔn)確移取沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液

1 mL（濃度：100 μg/mL）于50 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，此溶液濃度為2 μg/mL，于4 ℃冰箱中保存，有效期3個(gè)月。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液

根據(jù)需要，將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，標(biāo)準(zhǔn)工作液在使用前配制。

1.4 數(shù)學(xué)模型

該檢測(cè)過(guò)程中的數(shù)學(xué)模型見(jiàn)式（1）。

（1）

式（1）中：X-樣品中沙丁胺醇含量（μg/kg）;c-標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)后試液中沙丁胺醇的濃度（ng/mL）;v-試液定容體積（mL）;m-試樣質(zhì)量（g）;f-加標(biāo)回收率。

2 各個(gè)分量不確定度的評(píng)定

2.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及其配制過(guò)程引入的不確定度

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)信息，沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度為0.05 μg/mL，按正態(tài)分布考慮，包含因子為K=3，屬于B類(lèi)評(píng)定，故其相對(duì)不確定度為U1rel=0.05/3=1.67×10-2。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程引入的不確定度

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程中玻璃儀器校準(zhǔn)引入的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)溶液在配制過(guò)程中使用了一系列的玻璃器具，按照J(rèn)JG 196-2006《常用玻璃量具檢定規(guī)程》的要求，均有相應(yīng)的最大允差。歐洲分析化學(xué)中心（EU-RACHEM）認(rèn)為其服從三角分布，故K=，計(jì)算不確定度分量。玻璃量具校準(zhǔn)的不確定度見(jiàn)表2。

由表2中的數(shù)據(jù)合成的相對(duì)不確定度為：

2.2.2 溫度產(chǎn)生的不確定度評(píng)定

玻璃量具是在20 ℃下測(cè)量的，而實(shí)驗(yàn)室溫度一般為（20±3）℃，由溫度的波動(dòng)引起的不確定度可以通過(guò)估算溫度范圍和體積膨脹系數(shù)進(jìn)行計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)溶液是用甲醇進(jìn)行配制的，甲醇的膨脹系數(shù)為1.1×10-3/℃，玻璃的膨脹系數(shù)為9.75×10-6/℃，液體的膨脹系數(shù)遠(yuǎn)高于玻璃的膨脹系數(shù)，所以玻璃的膨脹系數(shù)可以忽略不計(jì)，計(jì)算時(shí)假設(shè)溫度的變化是矩形分布，即K=，溫度變化引入的不確定度見(jiàn)表3[3]。

由表3數(shù)據(jù)合成的相對(duì)不確定

度為：

2.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線擬合引入的不確定度

實(shí)驗(yàn)配制質(zhì)量濃度分別為0.3、0.6、1.2 ng/mL與2.4 ng/mL的沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)使用液，每個(gè)質(zhì)量濃度平行測(cè)量6次，用最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度-峰面積曲線，標(biāo)準(zhǔn)溶液的測(cè)量結(jié)果見(jiàn)表4[4]。

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=132 122x

+0，相關(guān)系數(shù)為R=0.999 887 7。

加標(biāo)樣品經(jīng)測(cè)定6次后，由線性方程得到測(cè)試液中沙丁胺醇的平均質(zhì)量濃度（c）為0.786 ng/mL，由擬合曲線求c時(shí)產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)不確定度計(jì)算公式見(jiàn)式（2）。

（2）

式（2）中：SR為從標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的峰面積Y與相應(yīng)測(cè)得的峰面積Yi之差所求出的標(biāo)準(zhǔn)偏差;m為樣品溶液的測(cè)定總次數(shù)，此處m為6;n為標(biāo)準(zhǔn)溶液的測(cè)定總次數(shù)，此處n為6;c為樣品中沙丁胺醇質(zhì)量濃度的平均值;為標(biāo)準(zhǔn)溶液中沙丁胺醇質(zhì)量濃度的平均值;ci為標(biāo)準(zhǔn)溶液中沙丁胺醇的質(zhì)量濃度。將數(shù)據(jù)帶入計(jì)算得：

由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、玻璃量具校準(zhǔn)和溫度變化的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量及標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合產(chǎn)生的不確定度分量合成標(biāo)準(zhǔn)曲線得出試樣中沙丁胺醇的濃度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.4 樣品的稱(chēng)量引入的不確定度Urel（m）

用JJ500天平（檢定證書(shū)給出最大允許誤差0.5 mg，重復(fù)性誤差

0.3 mg）準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品2.03 g，由稱(chēng)量產(chǎn)生的不確定度按矩形分布考慮，包含因子k=，屬B類(lèi)評(píng)定。其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.5 體積引入的不確定度Urel（V）

（1）樣品定容過(guò)程中使用了一系列的玻璃量具。5 mL分度移液管（A級(jí)）的最大允許誤差是±0.025 mL，

50 mL容量瓶的最大允許誤差是±0.05 mL。評(píng)定方法同2.2.1，則定容體積V5 mL分度移液管（A級(jí)）、V50 mL容量瓶

的相對(duì)不確定度U11、U12分別為2.04×10-3、4.08×10-4。合成的相對(duì)不確定度為：

（2）水的膨脹系數(shù)為2.1×10-4/℃，

樣品處理過(guò)程中因?yàn)闇囟茸兓a(chǎn)生的V5 mL分度移液管（A級(jí)）、V50 mL容量瓶的相對(duì)不確定度U13、U14分別為3.64×10-4、3.64×10-4。合成的相對(duì)不確定度為：

（3）則樣品定容過(guò)程中的總標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成為：

2.6 樣品前處理引入的不確定度Urel（f）

取6次樣品分別添加20 μg/kg標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行處理并分析結(jié)果及回收率。6次檢測(cè)平均值為19.71 μg/kg，回收率測(cè)定結(jié)果為95.6%、97.8%、99.0%、101.0%、99.4%與96.6%，平均回收率為f=98.2%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為Sf=1.96%，標(biāo)準(zhǔn)不確定度采用平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，標(biāo)準(zhǔn)不確定度和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分別為：

2.7 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

將2.1～2.6各分量的不確定度合成得：

2.8 擴(kuò)展不確定度

擴(kuò)展標(biāo)準(zhǔn)不確定度：U=kUrel（X）=2×0.039=0.078。

由2.6中6次檢測(cè)平均值為19.71 μg/kg，則擴(kuò)展不確定度為：U=19.71 μg/kg×0.078=1.54μg/kg。

3 測(cè)量不確定度報(bào)告

按照GB/T 22286-2008 《動(dòng)物源性食品中多種β-受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》測(cè)定豬肉中沙丁胺醇的結(jié)果為：C=（19.71±1.54）μg/kg，k=2。

參考文獻(xiàn)

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[2]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.GB/T 22286-2008 動(dòng)物源性食品中多種β-受體激動(dòng)劑殘留量的測(cè)定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

[3]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.JJG 196-2006 常用玻璃量器檢定規(guī)程[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

[4]陳佳，喬菲，金紅宇，等.ICP—MS法測(cè)定馬錢(qián)子中重金屬及有害元素含量的不確定度評(píng)定[J].藥物分析雜志，2013（12）：2176-2182.

基金項(xiàng)目：潮州市2018年廣東省科技創(chuàng)新戰(zhàn)略專(zhuān)項(xiàng)資金專(zhuān)題10：潮州市食品檢測(cè)公共平臺(tái)建設(shè)（編號(hào)：2018SS21）。

作者簡(jiǎn)介：陳楠瑜（1980—），男，廣東潮州人，本科，食品檢驗(yàn)工程師。研究方向：食品檢驗(yàn)、檢驗(yàn)室管理、食品生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系的建立和生產(chǎn)許可現(xiàn)場(chǎng)核查等。