阻斷ELISA 法檢測非洲豬瘟抗體

鄧　飛，李　麗，裴超信，周麗媛，張　睿，邵　靚（四川省動物疫病預防控制中心，四川 成都 610041）

阻斷ELISA 法檢測非洲豬瘟抗體

鄧飛，李麗，裴超信，周麗媛，張睿，邵靚
（四川省動物疫病預防控制中心，四川 成都 610041）

摘要：非洲豬瘟（ASF）是我國重點防范的外來動物疫病，目前我國尚無疫情發生，為防患于未然，仍需加強病原監測。本試驗采用西班牙Ingenasa非洲豬瘟阻斷ELISA抗體檢測試劑盒對來源于四川省內的92份豬血清進行檢測，結果表明92份血清樣本均為ASFV抗體陰性。

關鍵詞：非洲豬瘟；阻斷ELISA；抗體檢測

非洲豬瘟（ASF）是由非洲豬瘟病毒（ASFV）引起的豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。其臨床癥狀和病理變化與豬瘟相似，表現為發熱、皮膚發紺和淋巴結、腎、胃腸黏膜充血、出血，急性型死亡率高達100%［1］。國際獸醫局（OIE）將該病列為必須報告的動物疫病，我國將其列為一類動物疫病，是重點防范的外來動物疫病。近年來，俄羅斯等國家的非洲豬瘟疫情頻發，并呈繼續擴散蔓延的態勢。由于與俄羅斯毗鄰，我國面臨著巨大的跨境傳播防控壓力，一旦傳入，將給我國養豬業帶來災難性危害［2］。因此我們應防患于未然，必須防止ASFV傳入。除了加強對引進商品豬和豬肉制品的檢驗檢疫外，還要積極開展非洲豬瘟的實驗室監測工作。本試驗通過阻斷ELISA法對ASF抗體進行了檢測，現報告如下：

1　材料與方法

1.1血清樣本血清樣本來源于四川省阿壩、廣元、巴中、達州、廣安的規模場及散養戶，共計92份。

1.2檢測試劑西班牙Ingenasa（英吉納）非洲豬瘟阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，批號：160316。

1.3檢測方法

1.3.1使用前將所有試劑恢復至室溫。

1.3.2在ELISA反應板上每孔加50μL稀釋液。兩孔加50 μL陽性對照血清（E12和F12孔），兩孔加50μL陰性對照血清（G12和H12孔），其余每孔加入50μL血清樣品，每份樣品重復2孔（如A1、B1為同一份樣品，C1、D1為同一份樣品，以此類推）。共兩個反應板，37℃孵育1h。

表1　ELISA反應板1檢測46份血清的OD值

表2　ELISA反應板2檢測46份血清的OD值

1.3.3將孔中溶液倒入含NaOH溶液的容器中，用洗板機洗滌4次。

1.3.4每孔加100μL酶結合物，37℃孵育30min。

1.3.5按洗滌步驟洗板5次。

1.3.6每孔加100μL底物，室溫避光放置15min。

1.3.7每孔加100 μL終止液，5 min內用酶標儀在450nm處讀取OD值。

2　結果

2.1OD值樣品檢測的OD值見表1、表2。

2.2結果有效性若陰性對照OD值/陽性對照OD值≥4，則兩個反應板的試驗檢測結果均有效。

2.3Cut Off值計算陽性Cut Off值=NC-［（NCPC）×0.5］；陰性Cut Off值=NC-［（NC-PC）×0.4］。

2.4結果判定樣品OD值＜陽性Cut Off值，則ASFV抗體陽性；樣品OD值＞陰性Cut Off值，則ASFV抗體陰性；樣品OD值介于2個Cut Off值之間，則需重新檢測樣品或用另外的方法檢測。經計算，本試驗所測樣品的OD值＞陰性Cut Off值，證明ASFV抗體呈陰性（樣品OD值取其平均值）。

3　討論

非洲豬瘟的檢測主要包括抗原檢測和抗體檢測，檢測抗體對于診斷亞急性、慢性、隱性感染具有重要意義。用阻斷ELISA法檢測ASF抗體是一種無感染性的實驗室檢測方法，對于未發生ASF的國家來說具有現實意義。由于我國目前尚無ASF發生的報道，所以我們采用阻斷ELISA法對樣本進行檢測，試驗所用Ingenasa試劑盒為OIE指定參考的ASF診斷試劑盒。本試驗對來源于四川省北部、東北部邊境地區的部分規模場及散養戶的豬血清樣品進行檢測，結果ASFV抗體均為陰性，表明未發生ASFV感染。

非洲豬瘟是一把令世界各國養豬業聞之色變的“殺豬刀”，目前無有效疫苗防制，所幸我國境內尚無該病發生。然而中國作為養豬業大國，又與俄羅斯接壤，所以我們應保持最高程度的警戒，平時應加強對ASF的監測，建立快速、準確的檢測和診斷系統，以確保清潔無疫，同時提高獸醫人員對ASF的應對能力和實驗室檢測水平。

參考文獻：

［1］殷震，劉景華.動物病毒學［M］.2版.北京：科學出版社，1997：1197-1205.

［2］王君瑋.非洲豬瘟傳入風險與應對策略［J］.現代畜牧獸醫，2011（6）：15-18.

中圖分類號：S854.43

文獻標識碼：B

文章編號：1001-8964（2016）06-0022-02

收稿日期：2016-02-29

作者簡介：鄧飛（1982-），女，四川成都人，碩士研究生，獸醫師。

Detection of African Swine Fever Antibody by Blocking ELISA

DENG Fei，LI Li，PEI Chaoxin，et al.
（Animal Disease Prevention and Control Center of Sichuan Province，Sichuan Chengdu 610041，China）

Abstract：African swine fever is an important exotic animal disease in China，although there is not outbreak of ASF in our country，but the situation of prevention and controlis very severe.In this study，92 serum samples of pigs from Sichuan were detected by ASFV blocking ELISA antibody detection kit of Spain′s Ingenasa.The results showed that theseserum samples were negative for ASFV antibody.

Key words：African swine fever（ASF）；Blocking ELISA；Antibody detection