金石利咽口崩片的制備及藥效學研究△

張欣榮，邱仁杰，李越，許蕊蕊，齊梵琨，王秀麗*

(1.河北省中醫院，河北 石家莊 050011；2.北京中醫藥大學，北京 102488；3.南方醫科大學，廣東 佛山 528300)

金石利咽顆粒是河北省中醫院院內制劑，臨床上主要用于治療慢性咽炎，每年成功病例近兩百例。其功能為宣透肺胃、清咽利膈、解毒散結、生津潤燥，用于肺胃蘊熱、熱毒內結、津液損傷所致的咽喉干燥、腫痛、梗塞感、聲音嘶啞等，慢性咽喉炎、扁桃體炎見以上述證候者。方中生石膏、金銀花、孩兒茶均入肺胃二經，清泄肺胃、宣肺利膈、透邪外出、生津利咽，為主藥；板藍根、玄參、天花粉、珍珠母、冰片利咽消腫，滋陰潤燥，解毒散結，為輔藥；白芷、威靈仙、赤芍、蟬蛻、烏梅活血涼血，生津止渴，開淤散結，另外，白芷、威靈仙辛溫，可消除寒熱相拒，起到反佐之功能；甘草緩和藥性，調和諸藥，為使藥。

但顆粒劑沖服體積較大，且患者大都咽喉腫痛，吞咽不便，這不利于金石利咽顆粒的臨床應用推廣。口崩片[1]是近年新出現的一種新型速釋制劑，是指在口腔內能夠迅速崩解或溶解的片劑。目前國外應用較多，但國內，尤其是中藥領域尚處于起步階段。口崩片在口腔中無需用水也無需咀嚼，遇唾液迅速崩解即能形成混懸液或溶液，有助于藥物通過黏膜吸收，經頸內靜脈向全身分布起效，尤其適合老年人、兒童、吞咽有困難的患者或外出缺水條件下服用[2]。口崩片具有服用方便、適合吞咽困難人群、起效快、生物利用度高等[3]特點。因此其對于急性病癥亦有天然優勢，將金石利咽顆粒制成口崩片，也有利于金石利咽方劑在急性咽炎方面的應用推廣。

鑒于此，本文將金石利咽顆粒經過劑型改變，制備得到口崩片，以克服現有困難，從而使金石利咽復方更好地發揮臨床藥效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ZP10旋轉式壓片機(上海信源制藥機械有限公司)；FA1204B分析天平(上海精密儀器儀表有限公司)；FT-104B休止角測定儀(寧波海曙瑞柯儀器有限公司)；YD-1片劑硬度測試儀(天津市國銘醫藥設備有限公司)；101-1AB電熱鼓風干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司)；喉頭噴霧器(山東歐諾醫療器械有限公司)；ZB-ID智能崩解儀(天津市精拓儀器科技有限公司)；CS-1片劑脆碎度測試儀(天津市國銘醫藥設備有限公司)；G16 型醫用高速離心機(白洋離心機廠)；電熱恒溫水浴鍋(林茂科技有限公司)；TU-1810紫外-可見分光光度儀(北京普析通用儀器有限責任公司)；Waters UPLC，包括二元溶劑管理系統、在線脫氣機、自動進樣器、二極管陣列檢測器。

1.2 試藥

羧甲基淀粉鈉(DST，上海昌為醫藥輔料技術有限公司，批號：SSGCO2291)；交聯聚維酮XL(PVPP-XL，安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號：141006)；微晶纖維素(上海昌為醫藥輔料技術有限公司，批號：P0101F1510)；甘露醇、山梨醇(天津市福晨化學試劑廠，批號分別為20150912、20150912)；綠原酸(成都普菲德生物技術有限公司，批號：131201，純度≥98%)。

金石利咽顆粒劑河北省中醫院藥劑科自制(批號分別為20160406、20160922、20161225，規格：16 g×9袋/盒)；草珊瑚含片(批號：20170412，江西江中制藥廠)；Wistar大鼠60只[雌雄各半，體重(200±20)g，斯貝福(北京)實驗動物科技有限公司]；氨水(批號：161220，北京博奧拓達科技有限公司)；甲醇(分析純，北京化工廠)；肝素鈉(Heparin sodium，Sigma)；氫氧化鉀(北京化工廠，批號：20130723)；0.9%氯化鈉溶液；乙腈(色譜純，Fisher Scientific)；甲酸(HPLC級，上海安譜實驗科技有限責任公司)；復方干浸膏粉藥材來源于北京同仁堂，由北京中醫藥大學王晶娟副教授鑒定確認，由8倍水提取1.5 h，提取兩次，真空干燥粉碎過100目篩。

2 方法

2.1 口崩片性質測定

2.1.1 硬度測定 按照《中華人民共和國藥典》2015版相關要求進行檢測。

2.1.2 崩解度測定 參考相關文獻方法[4-5]，將滴定管中裝滿37 ℃水至0刻度，控制好水滴體積流量(以2 mL·min-1為宜)，水滴距片劑垂直距離不大于2 cm。將片劑置于10目篩網上，使滴定管中的水恰能滴到片劑上，開始計時，當片劑崩裂并從篩網中全部漏下這段時間記為崩解時間，求取6片平均值。

2.1.3 脆碎度測定 按照《中華人民共和國藥典》2015版0923相關要求進行檢測。

2.1.4 口感判斷 五位味覺正常的志愿者雙盲嘗味，從味道、沙礫感、爽口度等方面對口感好壞進行評分[5]。味道、沙礫感、爽口度從好到壞各分為五個級別(5到1分)，3個分數相加得到最終結果，分數越高口感越好。

2.1.5 休止角測定 將粉末或顆粒從休止角測定儀漏斗上方慢慢加入，從漏斗底部漏出的物料在水平面上形成圓錐狀堆積體，測定其傾斜角即為休止角。

2.2 口崩片制備工藝的優化

以片劑外觀、硬度、脆碎度、崩解度和口感作為評價指標，篩選口崩片處方工藝。

2.2.1 制片工藝的選擇 濕法制粒壓片法：精確稱取20片處方量的復方干浸膏粉5.6 g，與適量輔料，過20目篩后以等量遞加法混勻，加95%乙醇溶液為黏合劑，過20目篩制粒，60 ℃烘干1 h，過16目篩整粒，再與適量微粉硅膠及硬脂酸鎂混勻，壓片。

粉末直接壓片法：精確稱取20片處方量的復方干浸膏粉5.6 g，與適量輔料直接混勻，壓片。

2.2.2 輔料篩選

2.2.2.1 崩解劑的選擇 固定原料藥添加量0.56 g/片、片重1.4 g、片劑硬度5 kg，潤滑劑為0.5%滑石粉和0.5%硬脂酸鎂，助流劑為5%微粉硅膠，填充劑為甘露醇，考察崩解劑PVPP-XL或DST或兩者混合物對崩解時間的影響。

2.2.2.2 潤滑劑和助流劑的選擇 固定原料藥添加量0.56 g/片、片重1.4 g、片劑硬度5 kg，崩解劑為45%的DST，填充劑為甘露醇，考察滑石粉、硬脂酸鎂和微粉硅膠對粉末流動性、外觀及崩解時間的影響。

2.2.2.3 填充劑的選擇 固定原料藥添加量0.56 g/片、片重1.4 g、片劑硬度5 kg，潤滑劑為0.5%滑石粉和0.5%硬脂酸鎂，助流劑為5%微粉硅膠，崩解劑為DST，考察填充劑蔗糖粉、甘露醇、山梨醇、NaCl對粉末流動性、崩解時間、口感的影響。

2.3 含量測定

2.3.1 供試品溶液的制備 取20片口崩片及20袋顆粒劑，分別精密稱重，研碎，混勻，過四號篩，取約2.8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，稱重，超聲30 min(功率為100 W，頻率為60 kHz)，放冷至室溫，精密稱定并用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，過0.45 μm微孔濾膜，取續濾液備用，UPLC檢測。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品0.000 66 g，置10 mL量瓶中，以適量50%甲醇溶解，搖勻并定容，制成質量濃度為66 μg·mL-1的綠原酸對照品溶液，經0.45 μm微孔濾膜濾過，UPLC檢測。

2.3.3 色譜條件 色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH C18柱(50 mm×2.1 mm，1.7 μm)；流動相：乙腈(A)-0.5%甲酸溶液(B)(梯度洗脫：0～2 min，5%～11%A；2～2.5 min，11%～20%A；2.5～3.5 min，20%～100%A；3.5～5.1 min，100%～5%A)；檢測波長為327 nm；體積流量為0.4 mL·min-1；柱溫為30 ℃；進樣量2 μL；樣品管理器溫度為4 ℃[6-8]。

2.4 藥效學評價

2.4.1 急性咽炎動物模型的建立 采用氨水咽部噴霧的方法建立Wistar大鼠的急性咽炎動物模型[9]：固定大鼠，壓舌板壓住大鼠舌頭以暴露咽部，將濃度為15%的氨水用喉頭噴霧器向大鼠咽部噴霧，每次噴3撳(約0.6 mL)，每天上下午各噴一次，連續噴3 d。

2.4.2 實驗方案 將大鼠隨機分為6組，每組10只，分別為造模組、空白對照組、造模不給藥組、陽性藥物組(草珊瑚含片)、金石利咽顆粒組、金石利咽口崩片組。按臨床用藥以60 kg人為標準，參照體表面積劑量換算法計算大鼠給藥劑量，陽性藥物組(草珊瑚含片)、金石利咽顆粒組和金石利咽口崩片組給藥量均為420 mg·kg-1·d-1，取適量藥物粉末用蒸餾水配成溶液。造模成功后噴霧給藥約0.6 mL，造模不給藥組給予等量0.9%氯化鈉溶液，每天上下午各一次，連續噴霧給藥4 d[10-13]。

2.4.3 檢測指標

2.4.3.1 動物生存狀態觀察 實驗期間，每日詳細觀察各組動物活動狀態、飲水、口腔分泌物以及呼吸等情況并記錄。

2.4.3.2 血常規、PGE2造模結束后第1天，空白組和模型組自眼內眥取血1 mL，置于抗凝管中，由河北省中醫院檢測血常規指標，用于評價模型；造模成功后，其余四組開始給藥，給藥結束后第1天，依上述方式采血，測定血常規，用于藥效評價。處死各組大鼠，取咽喉黏膜及其下組織，剪碎稱重后用0.9%氯化鈉溶液3 mL浸泡1 h后取出；3000 r·min-1離心浸泡液5 min；吸取上清液0.5 mL，加入0.5 mol·L-1氫氧化鉀-甲醇溶液1 mL；再將試管置于50 ℃恒溫水浴中異構化20 min；在278 nm出測其光密度值，PGE2含量以每克炎性組織的吸收光密度值(A值)表示[13]。數據結果通過SAS8.2進行成組資料的獨立t檢驗處理，P<0.05為有統計學意義。

3 結果

3.1 制片工藝的選擇

結果表明，兩者平均硬度均符合要求，平均崩解時間接近，且粉末直壓法較優，濕法制粒流動性更優。綜上，結合濕法制粒工序復雜、效率低下、容易形成麻面，最終采用粉末直接壓片工藝。

表1 粉末直接壓片法和濕法制粒壓片法比較

3.2 輔料選擇

3.2.1 崩解劑的選擇 見表2。

表2 不同崩解劑對崩解時間的影響

注：“—”代表含量為“0”。

結果表明，DST崩解效果稍好且價格低，故選擇DST單用作為崩解劑。

3.2.2 潤滑劑和助流劑的選擇 見表3。

表3 不同潤滑劑對崩解時間和片劑外觀的影響

注：“—”代表含量為“0”。

結果表明，助流劑為微粉硅膠9%，潤滑劑為滑石粉0.5%、硬脂酸鎂0.5%時效果最優。

3.2.3 填充劑的選擇 見表4。

表4 不同填充劑對崩解時間和片劑口感的影響

注：“—”代表含量為“0”。

結果表明，填充劑明顯延長崩解時間，而對口感改善作用不明顯，故最終選擇不添加填充劑。

3.3 正交試驗優化處方

以崩解劑DST的用量(A)、潤滑劑微粉硅膠的用量(B)、硬脂酸鎂的用量(C)、滑石粉的用量(D)為考察因素(見表5)，選用L9(34)表進行正交試驗，結果見表6。

SAS8.2計算可知，F=14.35，p<0.01。各因素對片劑影響大小為A>C>B>D，最佳處方條件為A3B2C1D1，即崩解劑羧甲基淀粉55%、潤滑劑微粉硅膠9%、硬脂酸鎂0.5%、滑石粉0.5%，則藥粉為35%，載藥量符合要求。

表5 因素和水平 %

表6 正交試驗設計方案及結果

3.4 含量測定

3.4.1 系統適用性試驗 綠原酸對照品、金石利咽口崩片和金石利咽口顆粒供試品色譜見圖1～3。

圖1 綠原酸對照品UPLC圖

注：1.綠原酸。圖2 金石利咽口崩片供試品UPLC圖

圖3 金石利咽顆粒供試品UPLC圖

3.4.2 線性關系考察 分別配制綠原酸對照品溶液0.066 0、0.079 2，0.099 0、0.118 8、0.132 0、0.198 0 g·L-1，注入UPLC，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積(Y)為縱坐標，濃度(X)為橫坐標，繪制標準曲線，得綠原酸回歸方程：Y=2.150×107X-1.604×106，相關系數r=0.999 5(n=6)。結果表明，綠原酸在0.066～0.198 g·L-1呈良好的線性關系。

3.4.3 樣品含量測定 分別取3批制備的金石利咽口崩片及3批制備的金石利咽顆粒劑，按2.3項下方法制備樣品溶液，按3.4.1項下方法進行測定，每個樣品皆平行測定3次，以外標一點法計算含量，其平均值和RSD結果見表7。

表7 樣品中綠原酸含量測定結果

3.5 藥效學評價

3.5.1 日常狀態觀察結果 造模1 d后，除空白對照組外，其余組大鼠逐漸出現搔抓口部、呼吸困難伴有“齁齁”聲、口腔分泌物增多、飲水量增多等癥狀，到第3天癥狀明顯，這與《中藥新藥治療急性咽炎的臨床研究指導原則》中本病的診斷標準相近似，這些結果初步說明造模成功。

造模后，造模不給藥組大鼠經過幾天自然恢復，體征表現沒有太大的改善；通過金石利咽顆粒、金石利咽口崩片及草珊瑚含片治療的大鼠呼吸逐漸正常，口腔分泌物減少，咽部組織病變基本糾正。

3.5.2 血常規及PGE2含量檢測 大鼠血液中粒細胞和淋巴細胞數目以及咽喉黏膜組織中PGE2含量檢測結果見表8。

表8 大鼠血液中細胞數目及咽喉黏膜組織中PGE2含量的變化

注：*與空白對照組比較：t=6.86，P<0.01；**與空白對照組比較：t=-36.06，P<0.01；***與空白對照組比較：t=317.38，P<0.01；#與造模不給藥組比較：t=-12.21，P<0.01；##與造模不給藥組比較：t=37.52，P<0.01；###與造模不給藥組比較：t=402.48，P<0.01；△與造模不給藥組比較：t=-9.66，P<0.01；△△與造模不給藥組比較：t=24.85，P<0.01；△△△與造模不給藥組比較：t=410.57，P<0.01；☆與造模不給藥組比較：t=-13.43，P<0.01；☆☆與造模不給藥組比較：t=37.42，P<0.01；☆☆☆與造模不給藥組比較：t=422.35，P<0.01。另金石利咽口崩片組與陽性對照組比較，中性粒細胞：t=-2.96，P<0.05；淋巴細胞：t=-1.81，P>0.05；PGE2含量：t=0.06，P>0.05。金石利咽口崩片組與金石利咽顆粒組比較，中性粒細胞：t=0.78，P>0.05；淋巴細胞：t=-0.41，P>0.05；PGE2含量：t=2.89，P>0.05。

結果顯示，造模成功。金石利咽顆粒、金石利咽口崩片和陽性對照藥草珊瑚含片均對急性咽炎有一定的治療作用。其中金石利咽口崩片與金石利咽顆粒療效相當，均比陽性藥草珊瑚含片療效稍好。

4 討論

由于大多數中藥味道較苦，且中成藥片劑中的藥粉或浸膏粉必須達到一定比例才能保證用藥量，故一般很難做成口崩片，這也是為什么中藥口崩片相關研究比西藥少很多的原因。本次實驗通過對志愿者的雙盲嘗味實驗發現，金石利咽復方雖然口感不佳，但尚在可接受范圍內，而添加大量矯味劑對口感改善不大，所以放棄添加矯味劑，轉而增加含藥量和崩解劑的量，使得此口崩片含藥量和崩解時間均達到要求，這為某些口感不錯且沒有刺激性的中成藥做成口崩片這一新劑型提供了思路。此外，文獻研究可知，片劑制備多采用干法制粒或濕法制粒壓片法[14-15]，而制粒都需要經過干燥操作，會對冰片等易揮發成分造成進一步的損失。而口崩片常采用粉末直接壓片法制備[16]，減少了干燥過程中某些成分的損失，并且相對顆粒劑而言，操作也不繁瑣。同時，鑒于目前國家關于口崩片這一新劑型的法規及標準尚不完善，本次實驗前經多方查閱文獻，將硬度標準暫定為4～6 kg，將脆碎度標準暫定為減失重量不得超過5%[17]。經本次實驗驗證，此暫定標準可行，為《中華人民共和國藥典》盡快完成口崩片的標準制定提供了一個實例。

白細胞滲出是炎癥反應最重要的指征，而PGE2是其中一個很重要的炎癥介質。動物實驗顯示，各組經造模后日常狀態出現異常，尤其是口腔分泌物增多；同時血常規出現異常，PGE2含量升高，說明造模成功。經用金石利咽顆粒、金石利咽口崩片或草珊瑚含片治療后日常狀態漸趨正常，且血常規和PGE2含量恢復明顯。結果表明，金石利咽顆粒、金石利咽口崩片和陽性對照藥草珊瑚含片均對急性咽炎有一定的治療效果。此外，金石利咽口崩片組與金石利咽顆粒組比較，血常規和 PGE2含量雖然在數值稍好，但統計學結果并沒有顯著性差異(p>0.05)，表明兩者對急性咽炎療效良好且接近。同時，金石利咽口崩片真正服用時是在口腔1 min內崩解，起效速度遠超金石利咽顆粒，對于急性咽炎能夠更快地起效，發揮作用，況且口崩片對于咽喉腫痛、吞咽不便這類的咽炎患者，較之顆粒劑具有天然的優勢，含服過程中延長了藥物與咽喉炎癥病灶的接觸時間，所以將金石利咽顆粒制成口崩片是完全可行且有優勢的。