MTSS1在宮頸鱗癌細(xì)胞中的表達(dá)及臨床意義

王冠 王莉莉 邢焱玲 王爽 段麗 張慧晶 高洪菊

宮頸癌是婦科中十分常見的惡性腫瘤，發(fā)病率較高，近年來患病人數(shù)也呈增長趨勢(shì)，且逐漸趨于年輕化發(fā)展。宮頸癌中大多為宮頸鱗癌（squamouscarcinoma cervix，SCC），約占宮頸癌的80%～95%，往往由宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變（CIN）逐漸發(fā)展為浸潤性癌，死亡率較高[1-3]。盡管早期發(fā)現(xiàn)并進(jìn)行根治性手術(shù)具有較好的治療效果，但仍會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)，且由于早期沒有十分明顯的臨床癥狀，因此加強(qiáng)了解宮頸癌發(fā)展的分子機(jī)制，對(duì)于早期診治宮頸癌尤為重要[4]。轉(zhuǎn)移抑制因子1（metastasis suppressor 1，MTSS1）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，國內(nèi)外眾多學(xué)者研究表明，其與多種腫瘤轉(zhuǎn)移與疾病進(jìn)展相關(guān)，在抑制腫瘤轉(zhuǎn)移中起到了十分重要的作用，然而MTSS1在宮頸癌中的表達(dá)情況鮮有研究[5-7]。現(xiàn)探討分析MTSS1在宮頸鱗癌細(xì)胞中的表達(dá)及臨床意義，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月—2018年10月在我院接受治療的60例宮頸鱗癌患者作為研究對(duì)象，均留取手術(shù)切除的蠟塊組織標(biāo)本作為觀察組，選擇同期宮頸正常組織標(biāo)本60例作為對(duì)照組，均取自子宮肌瘤或子宮肌腺癥行全子宮切除術(shù)的石蠟包埋標(biāo)本，于液氮中保存。觀察組年齡為26～72歲，平均年齡為（47.86±8.91）歲；根據(jù)組織學(xué)分級(jí)，高分化16例、中分化27例、低分化17例；有淋巴轉(zhuǎn)移21例、無淋巴轉(zhuǎn)移39例。對(duì)照組年齡為28～70歲，平均年齡為（46.57±9.04）歲；根據(jù)組織學(xué)分級(jí)，高分化17例、中分化28例、低分化15例；有淋巴轉(zhuǎn)移22例、無淋巴轉(zhuǎn)移38例。比較兩組患者的一般資料，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可以進(jìn)行下一步分析比較。

納入標(biāo)準(zhǔn)：本研究已獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有患者均符合宮頸鱗癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)病理學(xué)檢查確診；病例資料完整；排除合并或繼發(fā)有其他癌癥的患者；所有患者術(shù)前均未接受過放療、化療或內(nèi)分泌等其他輔助治療；所有患者與患者家屬均對(duì)本次研究知情，并簽署知情同意書。

1.2 Real-time PCR法檢測(cè)MTSS1表達(dá)

用Trizol（美國Sigma公司）提取總RNA，取1 μL提取的總RNA，加入3 mL RNase-free水稀釋，分別于260 nm、280 nm、320 nm波長處測(cè)定吸光度值。若OD260/OD280比值為1.8～2.2，則表明RNA純度較高。RNA濃度（μg/μL）=（OD260-OD320）×稀釋倍數(shù)×0.04。使用TransStart First-Strand cDNA Synthesis SuperMix試劑盒（全式金生物科技有限公司）將RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，在Applied Biosystems儀上進(jìn)行擴(kuò)增與檢測(cè)。每個(gè)樣品設(shè)三個(gè)平行復(fù)孔，以β-Actin為內(nèi)參基因，用2-ΔΔct的方法求得MTSS1基因的相對(duì)含量。

1.3 免疫組織化學(xué)檢測(cè)MTSS1蛋白表達(dá)

行常規(guī)脫蠟、復(fù)水后，按照免疫組織化學(xué)試劑盒（北京中杉金橋試劑公司）說明書步驟進(jìn)行SP法，抗原修復(fù)后封閉1 h，一抗過夜。二抗37℃ 1 h，DAB顯色5 min，蘇木素復(fù)染，乙醇梯度脫水，晾干，樹膠封片。顯微鏡下觀察陽性MTSS1蛋白表達(dá)量。每張免疫組化切片中隨機(jī)選擇五張不同的高倍鏡視野，用計(jì)算機(jī)圖象分析軟件（IMAGE-PRO PLUS 6.0）進(jìn)行定量分析，陽性染色細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜出現(xiàn)黃色、棕黃色或棕褐色顆粒，以陽性率＜25%為陰性，≥25%為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組間MTSS1 mRNA表達(dá)水平比較

觀察組MTSS1 mRNA表達(dá)的相對(duì)定量值（relative quantification，RQ）為（0.74±0.06），對(duì)照組為（0.25±0.04），觀察組MTSS1的表達(dá)水平高于對(duì)照組， 且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 兩組間MTSS1陽性表達(dá)率比較

觀察組MTSS1陽性表達(dá)率為61.67%（37/60），對(duì)照組為18.33%（11/60），觀察組MTSS1陽性表達(dá)率高于對(duì)照組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年因?qū)m頸癌導(dǎo)致的死亡人數(shù)約為2.8×105人，多發(fā)于40～50歲婦女，嚴(yán)重威脅著女性的身心健康[8]。宮頸癌的分類中大多為宮頸鱗癌，轉(zhuǎn)移是造成宮頸鱗癌患者難以根治甚至死亡的重要因素，因此研究宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展以及轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制尤為重要[9]。MTSS被定義為轉(zhuǎn)移抑制因子，位于人染色體8q24.1，可通過多種途徑參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，與惡性腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)，最初由Lee YG等[10]在研究膀胱腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制中發(fā)現(xiàn)。近年來，較多研究發(fā)現(xiàn)MTSS1基因在前列腺癌、食管鱗癌、胃癌、腎癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、肝細(xì)胞癌等腫瘤中均呈現(xiàn)高表達(dá)，而在正常組織中較少表達(dá)[11]。Zhang J等[12]研究發(fā)現(xiàn)，MTSS1基因在宮頸癌中的表達(dá)較正常高，且隨著病情的發(fā)展，MTSS1基因也呈升高趨勢(shì)，提示我們MTSS1基因在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展起到了重要作用，可能成為診治宮頸疾病的靶點(diǎn)。為進(jìn)一步研究MTSS1在宮頸鱗癌中的作用，現(xiàn)研究采用Real-time PCR法檢測(cè)宮頸鱗癌組織與正常宮頸組織中的MTSS1 mRNA表達(dá)水平，結(jié)果顯示，MTSS1在觀察組中的表達(dá)水平高于對(duì)照組（P＜0.05）。采用免疫組織化學(xué)比較兩組MTSS1陽性蛋白表達(dá)，結(jié)果表明，宮頸癌組織中的MTSS1陽性表達(dá)率高于正常宮頸組織（P＜0.05）。綜上所述，MTSS1基因可能在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，可能為宮頸鱗癌的診治提供理論依據(jù)。