TIM-3對(duì)食管癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制及周期分布生物學(xué)分析

金 昊 沈兆坤 許大偉

食管癌是一種我國(guó)較常見(jiàn)的惡性腫瘤，發(fā)病率居各種惡性腫瘤第7位，死亡率居各種惡性腫瘤第5位[1-3]。TIM-3，全稱為：T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白3，不僅能表達(dá)免疫細(xì)胞，同時(shí)對(duì)惡性腫瘤也有較強(qiáng)表達(dá)作用[4-6]。研究發(fā)現(xiàn)，TIM-3能有效的在前列腺癌癥、肺癌、肝癌等腫瘤中表達(dá)，但在食管癌中表達(dá)如何，國(guó)內(nèi)外尚未有明確的研究成果。為更深入地分析了解TIM-3對(duì)食管癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移作用機(jī)制及周期分布生物學(xué)特性影響，本次采取控制單一變量方法進(jìn)行研究分析，為診斷治療食管癌提供新的依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取自2014年6月至2016年6月入本院的76例食管癌患者為研究對(duì)象，其中男性患者57例，女性患者19例，平均年齡59.5歲，患者的身高、體重等臨床資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 樣本納入排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：確診住院治療的食管癌患者；未患有影響本次研究的其他疾病；手術(shù)之前未進(jìn)行其他治療；患者家屬及本人同意參與研究，并簽署知情同意書(shū)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：患者診斷、治療等病歷資料不全者；哺乳、妊娠等處于特殊時(shí)期的患者；無(wú)法參與研究的；不接受回訪的。

1.3 研究方法

1.3.1 標(biāo)本采集 采集每位患者新鮮食管癌組織和距病變位置5 cm的正常機(jī)體組織，經(jīng)過(guò)醫(yī)學(xué)處理后制成組織切片。

1.3.2 檢測(cè)方法 采用免疫組織化學(xué)法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)食管癌患者病變組織及對(duì)應(yīng)的正常的癌旁組織中TIM-3水平。

1.4 觀察指標(biāo)

及時(shí)觀察患者心電圖、肝腎等功能，監(jiān)測(cè)患者生命體征等指標(biāo)。觀察食管癌患者病變組織中TIM-3水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、腫瘤浸潤(rùn)深度及癌癥分期的關(guān)系。采取上門調(diào)查、電話等方式對(duì)患者1個(gè)月回訪1次，記錄患者病情情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 20.0軟件對(duì)采集到的數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料間均數(shù)的差異比較用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，多組間對(duì)比采用方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者病變組織中TIM-3 mRNA水平

TIM-3 mRNA在患者正常組織和病變組織中均有表達(dá)，但在病變組織中的相對(duì)表達(dá)量(0.003±0.0008)明顯高于正常組織(0.001±0.0003)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.351,P=0.002)。

2.2 患者病變組織中TIM-3陽(yáng)性表達(dá)情況

患者腫瘤組織中TIM-3陽(yáng)性表達(dá)率85.5%(65/76)，顯著高于對(duì)應(yīng)的正常組織陽(yáng)性表達(dá)率10.5%(8/76)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.367,P<0.001)。

2.3 患者腫瘤組織中TIM-3水平與CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)深度的關(guān)系

患者腫瘤組織中CD8+T細(xì)胞輕微滲透30例，高度滲透46例，且TIM-3水平與CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)深度呈負(fù)相關(guān)(γ=-0.417,P=0.007)，見(jiàn)表1。

表1 患者腫瘤組織中TIM-3水平與CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)深度的關(guān)系(例，%)

2.4 患者腫瘤組織中TIM-3水平與患者臨床癥狀的關(guān)系

患者腫瘤組織中TIM-3水平與患者性別、年齡和腫瘤直徑均無(wú)關(guān)(P>0.05)，與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤浸潤(rùn)深度均有關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 患者腫瘤組織中TIM-3水平與患者臨床癥狀的關(guān)系/例

2.5 患者腫瘤組織中TIM-3水平與患者預(yù)后的關(guān)系

患者腫瘤組織中TIM-3高水平患者死亡率明顯高于低水平患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 患者腫瘤組織中TIM-3水平與患者預(yù)后的關(guān)系(例，%)

3 討論

腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移是嚴(yán)重制約惡性腫瘤患者疾病治療效果的主要因素，同時(shí)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制極其復(fù)雜，所以也是國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界研究的重難點(diǎn)[7]。TIM是T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白基因族，其中TIM-3分為跨膜糖蛋白和可溶型糖蛋。TIM-3在多種惡性腫瘤中均有表達(dá)，在前列腺腫瘤中表達(dá)高于癌旁組織，癌旁組織幾乎不表達(dá)[8]。最近研究[9]發(fā)現(xiàn)，TIM-3極有可能是小細(xì)胞肺癌的獨(dú)立預(yù)后因素。TIM-3與腎組織惡化腫瘤患者預(yù)后呈負(fù)相關(guān)，其表達(dá)明顯高于正常的癌旁組織[10]。與以上幾種腫瘤不同，TIM-3在胃癌組織呈現(xiàn)為低表達(dá)，在胃癌的診斷治療過(guò)程中將發(fā)揮重大作用。TIM-3在腫瘤組織中選擇性的表達(dá)，并積極參與腫瘤免疫抑制，更進(jìn)一步體現(xiàn)其在腫瘤診斷治療過(guò)程中的獨(dú)特作用和研究?jī)r(jià)值[11]。但是，目前的研究還存在著許多的問(wèn)題，TIM-3在眾多惡性腫瘤中的表達(dá)效果不同，部分表達(dá)受到其他外在因素影響較大，或者表達(dá)效果不明顯，需進(jìn)一步加大研究力度。

TIM-3 mRNA在患者病變組織中的相對(duì)表達(dá)量明顯高于正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。76例患者中，腫瘤組織陽(yáng)性，表達(dá)率為85.5%；對(duì)應(yīng)的正常組織陽(yáng)性，表達(dá)率為10.5%，且其表達(dá)均為低表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。癌癥患者腫瘤組織中CD8+T細(xì)胞輕微滲透30例，高度滲透46例，且TIM-3高水平輕微滲透11例，滲透率為36.7%，TIM-3高水平高度滲透31例，滲透率為67.4%，且與CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)深度呈負(fù)相關(guān)(γ=-0.417)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。患者腫瘤組織中TIM-3水平與患者性別、年齡和腫瘤直徑差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤浸潤(rùn)深度差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具體表現(xiàn)為：隨著惡性腫瘤浸潤(rùn)深度的增加，TIM-3表達(dá)水平明顯增高；TIM-3表達(dá)水平隨著淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移深度加深，表達(dá)水平逐步上升；腫瘤分期越晚，TIM-3表達(dá)水平上升的越明顯。患者腫瘤組織中TIM-3高水平患者死亡率明顯高于低水平患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，TIM-3表達(dá)水平與患者腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分期密切相關(guān)，在一定程度上能準(zhǔn)確反映患者腫瘤狀態(tài)及預(yù)后，可為食管癌患者提供準(zhǔn)確的治療時(shí)機(jī)。