高效液相色譜法快速檢測雞可食性組織中尼卡巴嗪殘留物

□ 祁 冰 李 梅 郭平葉 劉利霞 郭 丹 廣電計量檢測（沈陽）有限公司

隨著人們生活水平的日益提高，食品安全也成為了人們關注的焦點問題，為此，尼卡巴嗪殘留物4，4’-二硝基均二脲的測定已列為我國動物性食品出口檢驗的重要內容之一。尼卡巴嗪作為一種抗球蟲藥，由于其廣譜、高效和效果顯著，被廣泛應用于畜禽和水產養殖中。但是，尼卡巴嗪殘留物4，4’-二硝基均二脲在畜禽體內不能完全代謝排除體外，而是在畜禽及水產動物肌肉和組織中有不同程度的殘留，人們食用該食物后嚴重危害人們健康。為此，我國農業部也加大力度，進一步完善飼料的質量標準及檢驗方法，以確保動物性食品的安全。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

4，4’-二硝基均二脲標準品（純度99.0%），Dr公司；乙腈（色譜純），Fisher公司；正己烷、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）、超純水（由Mill-Q純水系統制得）

1.2 儀器與設備

高效液相色譜儀（型號1260），美國安捷倫公司；渦旋振蕩器，德國IKA公司；離心機，Thermo公司；氮吹儀，北京同泰聯科技發展有限公司（型號TTL-DCⅡ型）。

1.3 標準工作液的配制

1mg/mL4，4’-二硝基均二脲標準貯備液：精密稱取4，4’-二硝基均二脲對照品10mg于10mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋定容至刻度，搖勻。-20℃以下保存，有效期6個月。

100·g/mL4，4’-二硝基均二脲標準使用液：精密量取1mg/mL4，4’-二硝基均二脲標準貯備液1.0mL，于10mL量瓶中，用甲醇溶解稀釋定容至刻度。2～4℃以下保存，有效期一周。

1.4 色譜條件

色譜柱為TechMate C18-ST（4.6mm×150mm，5·m）； 檢 測器為紫外檢測器；流動相為乙腈-水（60∶40）；流速1.0mL/min；柱溫30℃；波長340nm；進樣量10·L。

1.5 樣品前處理

稱取2g試樣于50mL離心管中，加入乙腈10 mL，超聲5min，8000r/min離心10min，取上清液，于另一離心管中，再用10 mL乙腈重復提取殘渣一次，合并兩次上清液，加入5 mL正己烷，渦旋2min，4000 r/min離心5min，棄去上層正己烷液，乙腈層氮吹吹干，用2.0 mL流動相溶解，過0.45·m濾膜，供液相色譜測定。

2 結果與分析

2.1 提取方法的改進

國家標準方法GB 29691-2013中的樣品提取步驟較為繁瑣，提取步驟中用的旋轉蒸發的提取方法，旋轉蒸發儀提取樣品過程耗時過多，一次只能提取一個樣品，在用溶劑溶解雞心瓶中樣品時，存在溶解不完全的可能，嚴重影響了試驗的重復性和回收率。本方法改用氮吹儀吹干的方法，此方法不用進行樣品的轉移，而且能夠保證樣品完全溶解，重復性和回收率良好，也大大提高了試驗的工作效率。

2.2 凈化條件的選擇

用乙腈進行樣品的提取，再用正己烷對提取液進行凈化脫脂，凈化效果良好，試驗的重現性和回收率較好。因為正己烷和乙腈有些互溶性，導致乙腈的體積不準確，所以采用氮吹儀吹干后再用流動相定容的方法，確保了試樣的準確性。

2.3 色譜條件的優化

采用乙腈-水（60∶40）作為流動相，在此比例下色譜峰的分離度較好，分析物保留時間附近無干擾峰。

2.4 方法學驗證

2.4.1 方法的線性范圍、檢出限和定量限

精密量取 100·g/mL4，4’-二硝基均二脲標準使用液適量，用流動相進行稀釋，配制成濃度為0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00·g/mL的系列標準溶液，以峰面積-質量濃度作圖，得到標準曲線回歸方程為Y=50.5476X-2.1600，相關系數為0.9998。試驗測得的檢出限為0.02mg/kg，定量限為0.05mg/kg。

2.4.2 方法的回收率和精密度

用不含4，4’-二硝基均二脲的雞肉進行添加回收率和精密度實驗，回收率低點平均回收率為100.5%，RSD為1.3%；回收率中點平均回收率為97.4%，RSD為1.7%；回收率高點平均回收率為91.3%，RSD為0.6%。

樣品空白和回收率色譜圖分別見圖1、圖2。

圖1 雞肉空白

圖2 加標樣品

以上可見，樣品的回收率和精密度良好，分析物在出峰時間附近無干擾峰，該法的提取方法和色譜條件能夠滿足實驗需求，方法可行有效。

3 結論

以上結果表明，在加標0.05～0.50 mg/kg的范圍內，回收率在80%～110%，相對標準偏差小于10%。該方法簡便、快速、準確，可滿足雞可食性組織中尼卡巴嗪含量的檢測。