鼻咽癌患者的MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白表達水平及其臨床意義研究

李茉莉

(開封市中心醫院檢驗科，河南 開封 475000)

流行病學研究證實，我國2010-2017年部分地區鼻咽癌的發病率可達273~593/10萬人左右[1]。臨床上鼻咽癌的發生，能夠導致患者高腫瘤臨床負荷的出現，導致患者總體生存時間和無瘤生存時間的下降[2]。

在揭示鼻咽癌的病情進展機制的過程中發現，腫瘤調控相關蛋白的表達異常，能夠通過調控信號通路的活性，影響到癌細胞內的調控因子的濃度，進而影響到惡性腫瘤的病情進展速度。結腸癌轉移相關基因 （Metastasis Associated In Colon Cancer 1，MACC1）的表達，能夠通過提高細胞的遷移和轉移能力，進而促進癌細胞的浸潤和擴散[3]；絲裂原活化蛋白激酶的激酶4（Mitogen-activated protein kinase kinase，MKK4）的表達，能夠通過對于絲裂原蛋白激酶的磷酸化修飾作用，進而調控ras信號通路的激活，降低癌細胞的增殖擴增速度[4]；磷酸化的需醇激酶 （phosphorylated inisotol requiling kinase，p-IRE1）的表達能夠通過對于內質網的損傷，增加內質網的折疊障礙，進而促進癌細胞的病變過程[5]。 為了揭示 MKK4、MACC1、p-IRE1的表達與鼻咽癌的關系，本次研究選取2016年2月-2018年2月在我院接受治療的鼻咽癌患者為研究對象，探討了MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白的表達情況及與鼻咽癌患者臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 患者一般資料 選取2016年2月-2018年2月在我院接受治療的鼻咽癌患者為研究對象。納入標準：⑴成年者；⑵經手術病理確診為鼻咽癌者；⑶無其他系統嚴重疾病者；排除標準：⑴合并其他部位原發腫瘤者；⑵臨床資料不全者。根據納入排除標準共納入病例數100例，男75例，女25例，年齡 40～75 歲，平均 56.13±6.18 歲；鼻息肉組納入排除標準：年齡≥18周歲，平素體健，無其他系統嚴重疾病者，共納入100例，男60例，女40例，年齡42～72歲，平均56.18±5.97歲。兩組患者的年齡和性別等一般資料比較無差別。

1.2 方法 所有組織標本經石蠟包埋后作連續切片，厚度約為4mm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復合體法 (strep avidin-biotin complex，SABC法)染色，二氨基聯苯胺(diamionben zidene，DAB)顯色。MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術開發公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對照，高倍顯微鏡下觀察MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白的表達情況，具體染色步驟嚴格按照SP試劑盒說明書進行操作。

1.3 評價指標 觀察兩組患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達情況，比較不同特征鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達的差異，分析影響鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達的因素。

1.4 統計學處理 數據錄入后，采用SPSS 11.5軟件進行分析。計數和計量資料分別采用例和均數±標準差表示。鼻咽癌和鼻息肉患者、不同特征鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達的比較采用卡方檢驗進行分析，采用Logistic回歸分析法分析影響鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達的因素。P＜0.05：差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達情況的比較 鼻咽癌組患者的MACC1、p-IRE1蛋白陽性表達率高于鼻息肉組患者，MKK4蛋白陽性表達率低于鼻息肉組患者。見表1。

表1 兩組患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達情況的比較

2.2 不同特征鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達的比較 臨床分期為Ⅲ期、分化程度為中、低分化、有淋巴結轉移的鼻咽癌患者的MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白陽性表達率較高，不同年齡、性別患者的MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白陽性表達率無差別。見表2。

2.3 影響鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達的因素分析 將單因素分析有意義的因素作為自變量，以患者MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白表達情況作為因變量，進行回歸分析。結果臨床分期和淋巴結轉移進入回歸方程。見表3。

3 討論

EB病毒感染能夠顯著促鼻粘膜上皮細胞的病變，增加鼻咽癌的發生風險，特別是在合并有放射性射線接觸的患者中，鼻咽癌的發生風險可進一步的上升[6，7]。現階段臨床上主要通過手術及放療治療鼻咽癌，但包括手術及術后放療治療后，鼻咽癌患者的臨床病情緩解率仍然較低，治療后的患者無進展生存期仍然無明顯的改善[8，9]。而免疫靶向性治療，能夠在惡性腫瘤患者的輔助治療過程中發揮重要作用，本次研究對于鼻咽癌患者體內的MKK4、MACC1、p-IRE1的表達分析研究，不僅能夠深入揭示鼻咽癌的發生機理，同時還能夠為鼻咽癌患者的免疫靶向性治療提高參考靶點。

MACC1能夠通過對于癌細胞生物學特征的影響，提高癌細胞的變形能力，促進癌細胞對于臨近正常鼻粘膜組織的浸潤。MACC1的上升還能夠提高細胞間質成分的分解，為癌細胞的轉移提供條件[10]；MKK4主要存在于細胞質和細胞核周邊，其表達濃度的上升，能夠通過抑制癌細胞上游轉錄活性，進而降低癌細胞紡錘體的復制和分裂速度，抑制癌細胞的持續性自我擴增。MKK4還能夠通過對于誘導凋亡因子的調控，提高癌細胞的分化成熟能力，提高高分化細胞的比例[11]；p-IRE1是磷酸化的需醇激酶，其能夠通過對于內質網折疊錯誤的影響，導致癌細胞內核轉錄基因NF-KB的激活，促進癌細胞DNA的持續性自我增殖過程[12]。

表2 不同特征鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達的比較

表3 影響鼻咽癌患者MKK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達的因素分析

免疫組化的結果提示，在鼻咽癌患者中，MACC1及p-IRE1的表達陽性率明顯的上升，高于良性鼻粘膜病變組織，差異較為明顯，而MKK4蛋白的表達陽性率明顯的下降，提示MKK4、MACC1、p-IRE1的異常表達均能夠影響到鼻咽癌的病情進展過程。通過匯集不同的相關文獻，筆者認為這主要與MKK4、MACC1、p-IRE1的下列幾個方面的機理作用有關[13，14]：⑴MACC1的表達上升能夠提高癌細胞的轉移能力，促進癌細胞的擴散，而p-IRE1的上升能夠提高NF-KB的激活程度，促進下游核轉錄因子的顯著激活，從而促進了腫瘤細胞的增殖；⑵MKK4的表達缺失，導致癌細胞有分裂原蛋白激酶穩定性下降，導致癌細胞周期紊亂的發生。樊建雨等[15]研究者也通過免疫組化方式探討了MACC1蛋白的表達情況，發現在鼻咽癌患者中，MACC1蛋白的表達陽性率可平均上升30%以上，特別是在合并有明顯的高腫瘤負荷或者遠期病死率較高的患者中，MACC1蛋白的表達陽性率可進一步的上升。在探討相關指標與鼻咽癌患者臨床病理特征的關系過程中發現，在發生了淋巴結轉移、臨床分期較晚或者癌細胞分化程度較差的患者中，MKK4的表達陽性率較低，而MACC1、p-IRE1的表達陽性率較高，提示了MKK4、MACC1、p-IRE1的表達與鼻咽癌患者的臨床病理特征密切相關，這主要由于MKK4的表達缺失能夠提高細胞的分化成熟障礙，導致低分化和中低分化的形成，并提高了癌細胞的粘附能力；而MACC1、p-IRE1的上升，能夠提高癌細胞的侵襲能力，促進癌細胞的轉移，增加了臨床分期，同時二者的表達還能夠提高癌細胞對于鎖骨部位淋巴結組織的粘附能力，促進了癌細胞的淋巴結轉移。最后，危險因素分析也可見，臨床分期和淋巴結轉移是影響到MKK4、MACC1、p-IRE1的表達的重要風險性因素，進一步提示了相關指標與鼻咽癌患者臨床病情的密切關系。

綜上所述，在鼻咽癌患者中，MKK4、MACC1、p-IRE1的表達與鼻咽癌患者的病情密切相關。后續臨床相關研究可以繼續探討MKK4、MACC1、p-IRE1的表達與鼻咽癌患者臨床預后的關系。