凝聚胺法和微柱凝膠法檢測不完全抗體的對比研究

王景順

(漯河醫(yī)學高等?？茖W校一附院(漯河市中心醫(yī)院)輸血科，河南 漯河 462000)

在進行輸血前進行不完全抗體的篩查以及鑒定，能夠有效避免由于輸入含有對應抗原的紅細胞而導致受血者發(fā)生免疫反應，因此輸血前的不完全抗體篩查鑒定是臨床安全輸血的一項重要保障措施[1，2]。不完全抗體為完全抗體的一些片段，與抗原結合后在鹽水介質中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應現(xiàn)象，不完全抗體也是引起機體發(fā)生溶血性輸血反應、免疫性輸血反應、新生兒溶血病以及交叉配血不合的重要原因[3，4]。臨床報道，在我國由于血型抗原抗體免疫因素而引發(fā)的輸血反應高達12.6%，明顯高于西方發(fā)達國家。目前對于不完全抗體的檢測常用方法包括微柱凝膠法、凝聚胺法、抗人球蛋白法、鹽水以及木瓜酶等方法，各種方法各有利弊[5]。微柱凝膠法作為一種新的血清學技術，近年來獲得了較快發(fā)展，為了探索更具有臨床價值的不完全抗體檢測方法，本研究對比分析凝聚胺法以及微柱凝膠法檢測不完全抗體的臨床價值，現(xiàn)報告如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年3月-2017年1月在我院手術備血和治療用血患者8136例，其中男性患者3964例、女性患者4172例，年齡12d～87歲，平均年齡（42.75±15.62）歲。

1.2 儀器與試劑 譜細胞以及不完全抗體篩選紅細胞試劑盒均購于上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司；抗人球白蛋白微柱凝膠卡購于長春博訊生物技術有限公司凝聚胺試劑盒購于珠海貝孛生物科技有限公司。

1.3 檢測方法 抽取受試者靜脈血3ml，使用乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-K2）抗凝處理，檢測前離心，分離血清。

凝聚胺法：在檢測管中加入受試者50μl血漿，將其配成2～3%篩選紅細胞，加入0.65ml混勻的低離子溶液，混勻后將其靜置1min（室溫），滴加1滴凝聚胺，混勻后離心15s（3400r/min），將上清液倒出后可見明顯凝集，再加入1滴枸櫞酸重懸液，輕輕搖動1min，1min內(nèi)散開凝集且在低倍鏡下觀察紅細胞呈游離狀態(tài)為陰性，而1min內(nèi)凝集未散開為陽性。

微柱凝膠法：取抗人球蛋白微柱凝膠卡，操作嚴格按照使用說明書進行，將I～Ⅲ號篩選譜細胞配制成為0.8～1.2%，然后分別在I～Ⅲ號標記好的微柱凝膠中加入50μl篩選紅細胞及50μl血漿，在37℃孵育器內(nèi)孵育15min后進行離心5min（900～1500r/min）。未與抗體相結合的游離紅細胞沉積于凝膠卡的底部為陰性；凝集在一起的紅細胞分散在凝膠中或懸浮于微柱凝膠的上層，而對照組管內(nèi)的紅細胞則沉積于凝膠卡的底部為陽性。

確證實驗：凝聚胺法以及微柱凝膠法篩查出的不完全抗體陽性采用鹽水法和抗人球蛋白法進行不完全抗體鑒定，根據(jù)鑒定結果確定抗體的特異性。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用統(tǒng)計學軟件SPSS 22.0進行數(shù)據(jù)處理分析，計量資料采用（）表示，計數(shù)資料采用百分率表示，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩種檢測方法對不完全抗體檢出陽性率比較凝聚胺法檢出不完全抗體26例，檢出陽性率0.32%，既往輸血史21例、腫瘤術后受血者3例、多次妊娠受血患者2例。微柱凝膠法檢測不完全抗體43例，檢出陽性率0.53%，其中既往輸血史29例、多次妊娠受血患者7例、腫瘤術后受血患者7例。經(jīng)比較，微柱凝膠法檢出不完全抗體陽性率顯著高于凝聚胺法，差異具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05），見表 1。

表1 兩種檢查方法對不完全抗體檢出情況比較

2.2 不完全抗體特異性鑒定 對凝聚胺法檢出的26例不完全抗體以及微柱凝膠法檢出的43例不完全抗體患者均采用譜細胞進行抗體特異性鑒定，其中抗 D患者 14（32.56%）例、抗 E患者 26（60.47%）例、抗 e患者 1（2.33%）例、抗 C 患者 2（4.65%）例，凝聚胺法以及微柱凝膠法均檢出的不完全抗體特異性均與鑒定結果相符合，見表2。

表2 不完全抗體特異性鑒定情況[n(%)]

3 討論

臨床關于輸血安全的保障日益受到了臨床工作者的重視，隨著臨床試劑以及檢測技術的不斷改進，目前由于血型鑒定靈敏度所導致的嚴重輸血反應已經(jīng)鮮見報道。但是人類紅細胞當中共有29個血型系統(tǒng)，其中不完全抗體指的是血清當中抗A、抗B之外的其他的血型抗體，由于不完全抗體所引起的遲發(fā)型輸血反應較輕的患者可引起發(fā)熱、寒戰(zhàn)，影響臨床治療效果，而對于嚴重輸血反應患者可危及患者的生命安全[6，7]。輸血前進行常規(guī)不完全抗體篩查，一旦出現(xiàn)不完全抗體陽性，則應選擇相應抗原陰性、交叉配血相合的紅細胞進行輸注，從而保障輸血安全[8]。尤其對于需要手術備血的患者，應至少提前1天進行抗體篩查，對于不完全抗體篩選陽性的患者，保證充足的時間進行抗體特異性鑒定，從而安全地選擇相配合的血液制品，避免由于術中患者急需輸血而沒有適合的血源，從而保證手術的安全順利進行[9]。

不完全抗體主要是由于妊娠、輸血等免疫刺激所產(chǎn)生的，大部分的不完全抗體均屬于免疫球蛋白G（IgG）類，而此類抗體在鹽水介質中不會出現(xiàn)凝集，必須經(jīng)過一定的方法（如凝聚胺法、微柱凝膠法）才能使得致敏紅細胞出現(xiàn)凝集反應[10，11]。本研究對比分析凝聚胺法以及微柱凝膠法檢測不完全抗體的臨床價值。凝聚胺法是一種陽離子集團，由4個胺聚合而成的高陽離子聚合體，這種陽離子集團能夠中和紅細胞表面負電荷，從而縮短紅細胞之間的正常距離，可引起紅細胞可逆性的非特異性聚集以及IgG類抗體直接凝集紅細胞；而向上述系統(tǒng)溶液中加入枸櫞酸重懸后，非特異性聚集由于電荷中和而消失，但是由于IgG類抗體所引起紅細胞凝集則不會消失，從而檢測不完全抗體的存在[12，13]。微柱凝膠法是紅細胞抗原在凝膠介質中與相應的抗體相結合，經(jīng)過低速離心后，未結合的紅細胞可沉于凝膠底部為陰性反應，而與抗體相結合的紅細胞則位于凝膠上不為陽性反應[14，15]。本結果顯示，凝聚胺法檢出不完全抗體26例，檢出陽性率0.32%，微柱凝膠法檢測不完全抗體43例，檢出陽性率0.53%，這與相關臨床報道的不完全抗體檢出陽性率0.48%基本接近[16]。同時，有學者提出凝聚胺法其檢測靈敏度低，存在一定漏診，且檢測操作不易標準化，而微柱凝膠法反應靈敏度較高，可提高弱抗體IgG的檢出率，其凝集結果可肉眼直接觀察，易于自動化和標準化操作，從而可減少人為因素對檢測結果的干擾[17，18]。本研究進一步證實了此觀點，采用微柱凝膠法可有效減少不完全抗體的漏檢，從而保證手術患者的輸血安全。凝聚胺法其漏診原因可能與人為操作因素影響有關，如離心機控制、加入試劑以及振蕩觀察等均可能帶來一定的人為誤差，且凝聚胺法對Kell血型系統(tǒng)檢查效果較差，因此容易引起漏診。本研究對不完全抗體檢出患者進行了抗體特異性檢測，結果顯示，不完全抗體主要是Rh系統(tǒng)，且抗E抗體的頻率更高，其主要的原因是由于近些年來，RhD定性試驗已經(jīng)成為了實驗室的一項常規(guī)監(jiān)測項目，從而有效預防和減少了抗D抗體的產(chǎn)生[19]。而對于RhE抗原陰性者，由于妊娠或輸血接受RhE抗原刺激之后容易產(chǎn)生出E抗體，因此近年來陸續(xù)出現(xiàn)RhE抗體引起溶血性輸血反應的發(fā)生報道[20]。

綜上所述，微柱凝膠法檢測不完全抗體靈敏度高于凝聚胺法，且操作簡便、結果穩(wěn)定，從而能夠有效保障輸血的安全，值得臨床推廣。