HPLC法同時測定降脂活血片中的有效成分含量分析

河南省許昌市食品藥品檢驗檢測中心（461000）劉俊波 常曉平

河南省食品藥品檢驗所（450000）徐金玲

現代藥理研究顯示，降脂活血片不僅可擴張血管，降低心肌耗氧量，調節血脂，改善血液循環，還可補益肝腎，扶正固本，標本兼治，適用于脂肪肝、高脂血癥、高粘血癥及冠心病等[1]。本文探討研究了HPLC法同時測定降脂活血片中的有效成分含量的應用價值，現匯報如下。

1 材料與儀器

1.1 材料 降脂活血片，恩施自治州中心醫院制劑室，批號2015090，包含十二味中藥，如葛根、丹參、黃芪、枸杞子及何首烏等。對照品丹酚酸B，中國食品藥品檢定研究院，批號111562-201313。對照品葛根素，成都曼恩特生物科技有限公司，批號MUST-16011207。對照品二苯乙烯苷，成都曼恩特生物科技有限公司，批號MUST-15072915。

1.2 儀器與試劑 儀器：①UItimate3000高效液相色譜儀，UV檢測器、四梯度混合泵以及Chromleon工作站。②德國生產的Eppendorf Centrifuge 5427R低溫高速離心機。③日本島津AUW-120D電子分析天平。④北京普析通用GWA-UN超純水機。⑤廣州科盟KM-36C超聲波清洗機。試劑：①甲醇，色譜純，德國默克公司提供。②乙腈，色譜純，德國默克公司提供。③磷酸，分析純，武漢市中天化工有限責任公司提供。④水，自制超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5um）；柱溫：35℃；流速：1.0ml/min；進樣體積：10ul；檢測波長：286nm。其中，流動相A為0.1%磷酸水，流動相B為乙腈。

2.2 制備對照品溶液 精密稱取適量葛根素、二苯乙烯苷及丹酚酸B對照品，添加甲醇，制作為每1ml含有1.027mg二苯乙烯苷、1.048mg丹酚酸B、1.097mg葛根素的溶液。精密吸取上述3種溶液，添加甲醇稀釋，制作成每1ml含有0.3424mg二苯乙烯苷、0.3657mg葛根素及0.3493mg丹酚酸B的混合溶液。

2.3 制備供試品溶液 取20片降脂活血片，研細，經4號篩，取5g降脂活血片，精密稱定，放置于帶塞錐形瓶內，精密添加50ml 50%甲醇，稱量，持續30min超聲處理（功率設定為250W，頻率為40KHz），放冷，并用50%甲醇補充減失重量，混合均勻，精密吸取2ml供試品，按照15000r/min，予以離心處理，持續10min，取上清液，用有機微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液[2]。

2.4 制備陰性對照溶液 取缺少何首烏、丹參、葛根的三副處方，稀釋40倍，放在燒杯中，添加10倍水，煎煮2h，放冷，吸取2ml，按照15000r/min，離心處理，持續10min，取上清液，用有機微孔濾膜濾過，取續濾液作為陰性對照溶液。

2.5 陰性對照實驗 取陰性對照溶液，在標準色譜條件下，進樣測定。結果顯示，陰性樣品色譜圖中，丹酚酸B、葛根素及二苯乙烯苷相對保留時間處，未見色譜峰干擾，表示該方法專屬性好。

2.6 考察線性關系 分別取200ul二苯乙烯苷、葛根素、丹酚酸B對照品溶液，稀釋成2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍及128倍甲醇溶液，在色譜條件下，進樣測定，根據色譜峰面積，對質量濃度進行線性回歸分析。結果顯示，二苯乙烯苷質量濃度為2.673～342.9ug/ml，丹酚酸B質量濃度為2.784～348.5ug/ml，葛根素質量濃度為2.859～364.1ug/ml。

2.7 考察精密度 取供試品溶液，在色譜條件下，連續6次進樣測定，測定樣品中待測成分峰面積，計算出峰面積的RSD。結果顯示，二苯乙烯苷RSD為3.45%，丹酚酸B RSD為0.58%，葛根素RSD為0.53%，由此表示儀器的精密度高。

2.8 考察重復性 取5g同一批號樣品，共6份，制備供試品溶液，在色譜條件下，測定3種待測成分含量RSD值。結果顯示，葛根素RSD值為4.89%，丹酚酸B RSD為3.00%，二苯乙烯苷RSD為3.41%，由此分析，該方法重復性好，與含量測定要求相符。

2.9 測定樣品含量 取降脂活血片，制備供試品溶液，在色譜條件下，測定3種待測成分含量，計算樣品中有效成分含量。結果顯示，每片降脂活血片包括0.1377mg二苯乙烯苷、0.7820mg丹酚酸B、0.3281mg葛根素。