牛冷凍精液人工授精技術操作規程

肖 華 尹曉玲 瞿 軼

（建始縣長梁鎮畜牧獸醫服務中心，湖北建始 445302）

1 前言

牛冷凍精液人工授精技術，能最大限度發揮公畜種用價值，避免多種疾病的傳播感染，是當前最為高效的家畜繁殖技術。這些年，本地組織多次人工授精雜交改良工作，文下總結經驗就操作規程做詳細闡述，技術性要點以供參考和借鑒。

2 牛冷凍精液人工授精技術操作規程

2.1 準確鑒定母牛發情

提升輸精成活率，正確鑒定母牛發情，合適時機選擇配種很關鍵。

根據以往生產實踐經驗，不同胎次、年齡、品種的母牛，在發情、外排卵等情況有著顯著的差異。此外，考慮到母牛發情時間短，想要做到適時輸精，單靠外部觀察是不夠的，還需要配合直腸觸摸卵巢、卵泡的發育情況而定，以把控好準確的輸精時間。通常情況下，在發情后期—排卵期這段時間，安排授精受胎率最高。當前，母牛發情的鑒定，需結合外部觀察法、直腸檢查法而定。

2.1.1 外部觀察法

母牛發情初期，食欲不振，興奮不安。檢查外陰部，內粘膜微紅，輕微腫脹，有稀薄液體外流，有母牛或公牛緊隨其后。母牛發情中期，異常興奮，高潮后大叫。檢查外陰部，內粘膜潮紅，粘液呈牽絲狀。該期母牛，接受母牛騎跨。母牛發情后期，靜立不動。檢查外陰部，內粘膜有褶皺，呈粉紅，流透明狀液體，更多粘附在母牛臀部，此時為輸精的最佳時機。

2.1.2 直腸檢查法

手伸進直腸觸摸卵巢，通過發育掌握發情情況。

初期，卵巢小而堅硬，突出表面，沒有彈性。

中期，卵泡增大，體液增多，光滑而有彈性。

后期，體積不再增大，卵泡開始變軟，像成熟的葡萄，有波動感，一觸即破。

此時為輸精最佳時機，首次輸精后，間隔1天，在重復輸精1次，每個輸精期可輸精2次。

2.2 輸精前準備工作

2.2.1 消毒工作

操作室內注意衛生，佩戴工作服，勤剪指甲，減少地面粉塵。防蚊蟲、老鼠入室，器械用紫外線燈消毒，場內用新潔爾滅溶液灑施，避免塵土飛揚。

2.2.2 準備母牛

保定母牛，用衛生紙擦拭母牛臀部，而后用新潔爾滅溶液擦拭，做好消毒工作。

2.2.3 準備輸精槍

消毒輸精槍，整齊擺放在消毒盤，用砂紙蓋好，避免受二次污染。

輸精時，每頭準備一支或用一次性槍套。

2.3 做好牛凍精解凍工作

2.3.1 顆粒凍精解凍

水浴鍋（保溫杯）內的水溫調至42℃，將有解凍液的安瓿放入42℃熱水中預熱30 s，將安瓿拿出，用消毒好的紗布抹去安瓿周圍的水分，再用金屬鑷子將端開口，口徑的大小以能放入一顆凍精為好，然后把安瓿的2/3放在溫水中，并輕微的搖動，使安安瓿中的凍精溫度均勻，使之全部融化，拿出水面，然后在25℃左右的恒溫的顯微鏡下檢查精子的活力，取1小滴精液在載玻片上再壓上蓋玻片，在顯微鏡上檢查精子活力，解凍后的活力必須在0.3以上才能進行輸精。

2.3.2 細管凍精解凍

調溫水浴鍋至42℃，取細管凍精放水浴鍋內，輕微搖晃待溶解后取出，用干凈紗布擦拭細管表面水珠。而后剪掉封口端，將精液及時注入到輸精槍內。恒溫狀態下，取一滴精液加蓋載玻片，檢查精子活力，活力在0.3以上方可使用。

2.4 選擇合理的輸精技術

從輸精技術方法來看，主要有：陰道開張器輸精法、直腸把握輸精法兩種方法，具體的操作規程參照如下：

2.4.1 陰道開張器輸精法

取開膣器經潤滑消毒后，緩慢放進陰道內將其打開。而后，借助手電燈光尋找子宮外口。取吸有精液的輸精管，將尖端緩慢插入子宮頸內1～2cm，而后緩慢徐徐的將精液注射到子宮頸內，待注入后緩慢取出。接著，緩慢取出開膣器。取開膣器期間，注意不要閉合太嚴，以避免損傷陰道內粘膜。該輸精技術，由于使用開膣器加輸精管，操作起來較繁瑣，很容易造成母牛不安，損傷內粘膜。為此，輸精期間，部位要淺些。但是，期間以造成精液倒流，受精率不高，較初學者使用多，現實應用不多。

2.4.2 直腸把握輸精法

母牛輸精前，配種員將左手五指合攏并捏成圓錐形，緩慢地伸入直腸，掏出宿糞后，隔著直腸壁探摸子宮頸位置，并把子宮頸外端半握在左手掌的位置，讓子宮頸緊貼在骨盆腔上，然后左手配合右手將裝有精液的輸精槍以35°～45°傾斜向上從陰門插入陰道，向上斜插入5～12 cm，輸精管再向前水平插入直抵子宮頸外口，呈螺旋形活動向前插入子宮頸內，當輸精槍感覺穿過2～3個子宮頸內橫行皺褶時，即可開始緩慢輸精。

2.5 人工輸精應該注意的幾個問題

使用的所有器械，都要經過嚴格消毒。同時，注意外陰部的消毒，避免人為傳染生殖性疾病。輸精期間，操作要細心、要膽大。此外，輸精牛群多時，現有的輸精器不夠用，切忌不能重復使用，務必徹底消毒后方可再用。

規范輸精流程，掌握準確的輸精方法。期間，注意冷凍精液質量要達標，解凍后的精子及時配種。輸精部位準確，確保進入子宮頸內，避免滯留外口而影響受胎率。每次輸精做好記錄，便于后期加強管理。

第三，做好配種檢查，留意特殊情況。比如：個別妊娠前期假發情，做好直腸檢查，避免誤配而增加流產率。個別屢配不中，應認真檢查，分析誘因，對癥治療，確保康復率。