蛋黃免疫球蛋白制備和應用研究進展

戴 浪

（貴州大學動物科學學院，貴州貴陽 550025）

免疫球蛋白是指具有抗體（Ab）活性或化學結構，與抗體分子相似的球蛋白，蛋黃免疫球蛋白屬于免疫球蛋白的一種，存在于禽類蛋胚胎內部。此前研究表明，蛋黃免疫球蛋白可應對哺乳動物抗體中的部分不足，實現病毒感染等疾病的治療。本文以自身經驗和文獻為基礎，對蛋黃免疫球蛋白制備和應用做綜述：

1 蛋黃免疫球蛋白的制備

1.1 制備方法

蛋黃免疫球蛋白的制備方法較為多樣，但效率和成本存在差異，早在20世紀末期，已有學者嘗試應用化學方法進行分離提取實現制備。多年來該方法經不斷改進，已經較為成熟。一般分離制備步驟為，取若干蛋黃投入Tris緩沖液中，對混合物進行低溫放置處理，溫度應在4℃上下，使混合物自然反應生成沉淀。提取其上層清液，放入適量硫酸葡聚糖、氯化鈣，與提取物進行反應，將混合溶液放置于30℃環境下，再置入硫酸銨進行處理。該方法可獲取約75%左右的蛋黃免疫球蛋白。

另一種分離方法為，取若干蛋黃，置入蒸餾水中進行稀釋，使混合物的酸堿性趨向7.0，之后做凍融處理，以離心機處理混合物，去除沉淀，提取上層清液，將硫酸銨置入清液中獲取蛋黃免疫球蛋白。該方法可獲取約60～70%左右的蛋黃免疫球蛋白，較第一種方式效率略低，但制作過程較為簡單，成本小。此外，近年來也有學者提升聚乙二醇提取法、親脂溶劑沉淀法，不同方式下的工藝流程存在差異，效率和成本也不盡相同。目前來看，親脂溶劑沉淀法效率最高，但成本和流程也最高、最復雜，因此推廣情況尚不理想。

1.2 現有工藝的不足

當前蛋黃免疫球蛋白制備方法的不足體現在三個方面，一是純度不足、二是成本高、三是無法進行量產。純度不足的問題在各類方法中均所有體現，理論上看，反應顆粒越小、反應行為進行的越徹底，但無論采用提取法、沉淀法，都需要持續進行多種混合溶液的制備、物質提取，在此過程中，化學反應、物理反應均不完全以分子為基本單位進行，反應物一般為分子團，內部分子的活力即便沒有受到影響，也無法完全參與到反應活動中，生成物的純度有限。

成本方面的問題，并非廣泛存在于所有的蛋黃免疫球蛋白制備方法中。采用蒸餾水稀釋法的情況下，成本較小，但制備效率不足，其他方式多面臨成本較高的問題。如親脂溶劑沉淀法，其制備效率是蒸餾水稀釋法的2.7～2.9倍，但制備成本也高出1.7倍以上，由于蛋黃免疫球蛋白的用量相對有限，因此高成本制備方法并不被所有研究部門廣泛應用。量產問題目前主要困擾醫藥行業，一方面蛋黃免疫球蛋白活力無法長期保持，另一方面部分疾病范圍性爆發（如流行疾病）對相關物質的用量要求又相對較大，如何解決用量、成本和制備效率之間的矛盾，也為未來研究的熱點問題。

2 蛋黃免疫球蛋白應用

2.1 感染治療

在較早進行蛋黃免疫球蛋白研究的西方國家。技術人員最初進行的活體實驗以家禽作為對象，對感染了鼠傷寒沙門氏菌的病雞進行治療，在皮下注射和口服藥物的綜合作用下，病雞體內的抗體水平出現變化，但并不顯著。其后研究人員又對患病的哺乳動物（腹瀉的貓）進行治療，貓體內的抗體水平明顯變化，且鼠傷寒沙門氏菌已經基本消失，腹瀉情況在1d后出現緩解，連續治療3d，貓的腹瀉病情消失。為了解蛋黃免疫球蛋白的治療效果，研究人員又尋找到感染了輪狀病毒的貓，并通過注射和服藥的方式進行疾病治療。在病貓的排泄物中，可檢出輪狀病毒，且隨著用藥的深入，輪狀病毒的檢出量明顯減少。這表明蛋黃免疫球蛋白已經發揮治療作用。其后的人體組織體外實驗也證明，蛋黃免疫球蛋白可實現病毒性腹瀉和感染預防、治療。

2.2 實驗分析

蛋黃免疫球蛋白在醫學實驗中的應用由來已久，早在20世紀后期，科學家就應用蛋黃免疫球蛋白進行凝膠擴散實驗，發現該物質可降低凝膠中沉淀物的產生量。在生物實驗中，研究人員發現適量應用蛋黃免疫球蛋白，可以提升部分復方類藥物的藥敏性，很多無法產生治療效果的藥物，加入蛋黃免疫球蛋白后，可以重新起效。此外，也有人員在研究中發現，蛋黃免疫球蛋白能夠改善實驗數據的精確性，如酰胺酶實驗中，應用蛋黃免疫球蛋白使其敏感性下限達到0.2ng/ml，可以有限指導研究和制藥活動。

一些新型病毒、病毒變種的體外實驗中，蛋黃免疫球蛋白同樣應用廣泛。由于不同病原體在經過藥物作用后，往往會改變自身形態，產生耐藥性，導致藥物治療效果下降（藥敏性下降）。新的病毒也在現代醫療工作中不斷被發現，這對醫療工作，尤其是制藥工作提出了更多挑戰。蛋黃免疫球蛋白的作用機理相對明確，雖然無法單獨用于廣譜抗病毒，但研究人員近年來不斷嘗試利用復方藥物治療疾病、殺滅病毒，又使蛋黃免疫球蛋白擁有了更廣闊的作用空間。目前很多研究依然處于實驗階段，無論結果如何，都能為醫藥工作提供更多參考。

綜上所述，蛋黃免疫球蛋白在醫療領域擁有廣泛的應用前景，其制備工藝雖然成熟，但也面臨成本、效率等方面的不足，應在后續工作中謀求改進。