慢性HIV感染者外周血T細(xì)胞CD28、CD160表達(dá)水平的研究*

肖江峰,陳永宏,黃 倩,鄒燕瓊,鄧建寧

(1.重慶三峽中心醫(yī)院御安分院感染科,重慶，404000；2.重慶三峽醫(yī)藥高等專科學(xué)校附屬醫(yī)院康復(fù)科，重慶，404000；3.廣西省南寧市第四人民醫(yī)院艾滋病外科，廣西南寧 530023)

人類免疫缺陷病毒(HIV)，即艾滋病(獲得性免疫缺陷綜合征)病毒，是造成人類免疫系統(tǒng)缺陷的一種病毒[1-2]。自1981年發(fā)現(xiàn)以來，關(guān)于HIV的研究不斷增加，已知免疫缺陷是HIV入侵人體后造成的最大的威脅，HIV感染患者存在不同程度的免疫紊亂。研究發(fā)現(xiàn)HIV感染的T細(xì)胞上抑制性共刺激分子表達(dá)有所升高，而T細(xì)胞功能存在不同程度的降低[3-4]，這可能與HIV引起的免疫缺陷有關(guān)[5]。CD160是常見的抑制性共刺激分子，主要表達(dá)于T細(xì)胞、天然殺傷性T細(xì)胞和天然殺傷細(xì)胞。CD160是HVEM的配體，并考慮與抗PD-1抗體一起提供具有抗HIV的免疫檢查點抑制劑。CD160也被認(rèn)為是人類HIV病毒作用的重要調(diào)控靶點。與CD160不同，T細(xì)胞上CD28的表達(dá)主要在體內(nèi)發(fā)揮免疫作用[6]。CD28分子不僅可以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖，還可誘導(dǎo)多種免疫應(yīng)答相關(guān)細(xì)胞因子分泌。研究發(fā)現(xiàn)，CD28及CD160作為共刺激分子中的重要成員，在互相制約及調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能中具有重要的作用[6]。因此，筆者對100例受試者進(jìn)行研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年12月至2016年12月收治的50例HIV患者，作為觀察組，并征集50例本院體檢的健康志愿者，作為對照組。以上觀察組患者均確診為慢性HIV感染者，并且各組性別、年齡等差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。本研究經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)，患者以及家屬知情并同意本研究。

1.2納入以及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn) 患者年齡在20～60歲之間；均未經(jīng)抗病毒治療，均無機(jī)會性感染或腫瘤，排除丙肝、乙肝等嗜肝病毒感染，無失代償期肝病，無自身免疫性、遺傳代謝性肝病；符合第八版內(nèi)科學(xué)中HIV感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn) 本身有嚴(yán)重呼吸或者循環(huán)系統(tǒng)疾病(如先天性心力衰竭及肺功能障礙)；藥品濫用或依賴者；對本研究所用藥物過敏者；各種原因引起的急性呼吸道感染者。

1.3方法 所有患者入院后抽取抗凝全血10 mL，離心分離血漿放置于-80 ℃低溫冰箱待測。采用FACS流式細(xì)胞儀(購自美國BD公司)，進(jìn)行外周血白細(xì)胞計數(shù)和T淋巴細(xì)胞亞群分類，包括CD4+、CD8+及CD28等，并計算百分比。采用RT-PCR熒光探針法進(jìn)行外周血HIV病毒載量測定(試劑盒購自上海嵐派生物技術(shù)有限公司)。取新鮮外周血，分離單個核細(xì)胞，分別加入CD160-APC抗體，室溫避光孵育20 min，加1 mL的PBS(轉(zhuǎn)速1 500 r/min、離心半徑12.5 cm)離心5 min，棄上清，然后加入10 g/L多聚甲醛固定后上流式細(xì)胞儀檢測，F(xiàn)lowjo軟件分析檢測結(jié)果。觀察并記錄所有研究參與者一般資料(包括性別、年齡、外周血CD4+T計數(shù)、CD4+/CD8+等)、CD4+、CD8+T細(xì)胞上CD160及CD28的表達(dá)及初始T細(xì)胞(TN)、中央記憶T細(xì)胞(TCM)、效應(yīng)記憶T細(xì)胞(TEM)、終末效應(yīng)記憶T細(xì)胞(TEMRA)亞群上CD160表達(dá)的百分比及平均熒光強(qiáng)度(MFI)、2種細(xì)胞里病毒載量，并分析CD28及CD160的表達(dá)水平與患者CD4+和CD8+T細(xì)胞計數(shù)和病毒載量的相關(guān)性。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者基本資料比較 兩組患者性別、年齡等一般資料無明顯差異(P>0.05)，觀察組患者外周血CD4+、CD4+/CD8+明顯低于對照組(P<0.05)，具有統(tǒng)計學(xué)意義。詳見表1。

2.2CD160的表達(dá)情況比較 隨著CD4+T細(xì)胞上CD160的表達(dá)增加，CD4+T細(xì)胞呈下降趨勢，兩者呈負(fù)相關(guān)(r=-0.561，P<0.05)；隨著CD8+T細(xì)胞上CD160的表達(dá)增加，CD8+T細(xì)胞數(shù)量呈上升趨勢，兩者呈正相關(guān)(r=0.619，P<0.05)；而HIV-RNA拷貝數(shù)量隨著CD4+、CD8+T細(xì)胞上CD160表達(dá)的增加而增加，兩者呈正相關(guān)(r=0.684，P<0.05、r=0.459，P<0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。見圖1。

表1 兩組患者基本資料比較

圖1 兩組患者CD4+和CD8+T細(xì)胞上CD160的表達(dá)與CD4+和CD8+T細(xì)胞計數(shù)以及外周血HIV RNA載量的相關(guān)性比較

2.3CD28的表達(dá)情況比較 隨著CD4+/CD8+T細(xì)胞上CD28的表達(dá)增加，CD4+/CD8+T細(xì)胞計數(shù)呈上升趨勢，兩者呈正相關(guān)(r=0.621，P<0.05、r=0.527，P<0.05)，而HIV-RNA拷貝數(shù)量隨著CD4+、CD8+T細(xì)胞上CD28表達(dá)的增加而降低，兩者呈負(fù)相關(guān)(r=-0.634，P<0.05、r=-0.582，P<0.05)，具有統(tǒng)計學(xué)意義。詳見圖2。

圖2 兩組患者CD28的表達(dá)與CD4+和CD8+T細(xì)胞計數(shù)以及HIV RNA載量的相關(guān)性比較

2.4兩組患者各亞群CD8+T細(xì)胞CD160表達(dá)情況 兩組患者CD8+T細(xì)胞CD160在TEMRA亞群表達(dá)陽性率及MFI差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，觀察組患者CD8+T細(xì)胞CD160在TN、TCM、TEM亞群表達(dá)陽性率及MFI均明顯高于對照組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。詳見表2。

表2 各組患者各亞群CD8+T細(xì)胞CD160表達(dá)比較

3 討 論

艾滋病是一種危害性極大的傳染病，由感染HIV引起。HIV是一種能攻擊人體免疫系統(tǒng)的病毒[8]。它把人體免疫系統(tǒng)中最重要的CD4+T淋巴細(xì)胞作為主要攻擊目標(biāo)，大量破壞該細(xì)胞，使人體喪失免疫功能。隨著病程進(jìn)展艾滋病患者可合并各種機(jī)會性感染及惡性腫瘤，病死率較高。艾滋病危害較大，不僅嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，而且具有較高的傳染性。艾滋病目前尚未有理想的根治方案，并且HIV導(dǎo)致機(jī)體免疫缺陷的途徑尚未研究清楚。為此，探究HIV引起免疫缺陷的作用方式顯得尤為重要。研究發(fā)現(xiàn)，HIV感染者細(xì)胞免疫及體液免疫均受到明顯影響，但以T細(xì)胞免疫受損為主[9]。CD4+、CD8+是T細(xì)胞中最主要的免疫細(xì)胞，正常情況下，CD4+細(xì)胞在整個T淋巴細(xì)胞中占65%，CD8+占35%，其比值為1.75～2.10之間。慢性HIV感染者由于免疫系統(tǒng)受到損傷，表現(xiàn)為CD4+數(shù)量減少，CD8+數(shù)量相對增多，出現(xiàn)比例失調(diào)。表明免疫力已經(jīng)損傷到非常嚴(yán)重程度。研究發(fā)現(xiàn)，HIV感染者正負(fù)性共刺激分子表達(dá)受到影響，可能與CD4+、CD8+功能紊亂有關(guān)[10]。CD28及CD160分別作為共刺激分子中的正性和負(fù)性共刺激分子，在調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能中具有重要的作用。HIV感染患者病毒難以清除的重要原因就是正負(fù)性共刺激分子的表達(dá)紊亂，而CD160的增殖可以抑制HIV患者CD4+T細(xì)胞的增殖以及細(xì)胞因子的分泌。鄭海清等[11]和DUVERGER等[12]在對HIV患者T細(xì)胞進(jìn)行基因檢測后發(fā)現(xiàn)CD28在基因水平上就存在表達(dá)降低的現(xiàn)象。

本研究中，兩組患者性別、年齡等一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，觀察組患者外周血CD4+/CD8+明顯低于對照組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。隨著CD4+T細(xì)胞上CD160的表達(dá)增加，CD4+T細(xì)胞呈下降趨勢，兩者呈負(fù)相關(guān)(r=-0.561，P<0.05)，而HIV-RNA拷貝數(shù)量隨著CD4+T細(xì)胞上CD160表達(dá)的增加而增加，兩者呈正相關(guān)(r=0.684，P<0.05)；隨著CD8+T細(xì)胞上CD160的表達(dá)增加，CD8+T細(xì)胞數(shù)量呈上升趨勢，兩者呈正相關(guān)(r=0.619，P<0.05)，HIV-RNA拷貝數(shù)量隨著CD8+T細(xì)胞上CD160數(shù)量的增加而增加，兩者呈正相關(guān)(r=0.459，P<0.05)。此結(jié)果表明，HIV對CD4+、CD8+T細(xì)胞上CD160表達(dá)的影響不同，隨著HIV-RNA拷貝數(shù)量增加，CD160表達(dá)增加，而此時CD4+T細(xì)胞計數(shù)有所下降，導(dǎo)致CD4+/CD8+T比值失調(diào)。考慮抑制性共刺激分子CD160過度表達(dá)引起CD4+T細(xì)胞的功能紊亂。肖晗等[13]也在研究中發(fā)現(xiàn)，CD160的過度表達(dá)對HIV感染者免疫功能有一定的抑制作用。隨著CD4+T細(xì)胞上CD28的表達(dá)增加，CD4+T細(xì)胞計數(shù)呈上升趨勢，兩者呈正相關(guān)(r=0.621，P<0.05)，而HIV RNA拷貝數(shù)量隨著CD4+T細(xì)胞上CD28表達(dá)的增加而降低，兩者呈負(fù)相關(guān)(r=-0.634，P<0.05)；隨著CD8+T細(xì)胞上CD28的表達(dá)增加，CD8+T細(xì)胞數(shù)量呈上升趨勢，兩者呈正相關(guān)(r=0.527，P<0.05)，HIV-RNA拷貝數(shù)量隨著CD8+T細(xì)胞上CD28數(shù)量的增加而增加,兩者呈正相關(guān)(r=-0.582，P<0.05)。此結(jié)果表明，與CD160不同，CD28在HIV感染患者體內(nèi)可以發(fā)揮一定的免疫作用，其與HIV-RNA拷貝數(shù)呈負(fù)相關(guān)，而與CD4+、CD8+T細(xì)胞計數(shù)呈正相關(guān)。王利偉等[14]也在研究中發(fā)現(xiàn)，CD28與HIV患者免疫功能有關(guān)，隨著HIV的進(jìn)一步感染，CD28逐漸受到破壞。兩組患者CD8+T細(xì)胞CD160在TEMRA亞群表達(dá)陽性率及MFI差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，觀察組患者CD8+T細(xì)胞CD160在TN、TCM、TEM亞群表達(dá)陽性率及MFI均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。此結(jié)果表明，CD160升高對記性性T細(xì)胞和初始T細(xì)胞可能都有影響，但其主要通過影響記憶性T細(xì)胞表達(dá)發(fā)揮作用。王陸軍等[15]也在研究中得出相似的結(jié)論。

4 結(jié) 論

慢性HIV感染患者中CD28表達(dá)有所減少，而CD160表達(dá)有所增加，可能與HIV患者CD4+、CD8+T細(xì)胞減少有關(guān)，其中CD160主要影響記憶性CD8+T細(xì)胞。