T細胞亞群在乙肝病毒相關性肝癌患者中的變化及其臨床意義

廖鈺霖,何淑婭,宋曉玉

(四川省腫瘤醫院檢驗科,四川成都 610041)

原發性肝癌(PLC)是全世界最常見第5位癌癥，慢性乙型肝炎病毒(HBV)是肝硬化和肝細胞癌的最常見危險因素，在國內所引起的PLC病例占80%，此外，國內有7%的人群感染了HBV[1-2]。

HBV相關的PLC(HBV-PLC)被認為是一種炎癥性癌癥。在HBV感染的情況下，病毒特異性的T細胞可能具有保護效應。有研究在HBV感染的黑猩猩以及受HBV感染的患者中敲除HBV特異性CD8+T細胞可阻滯HBV的清除[3]，HBV的控制與具有多功能性的CD4+T細胞和CD8+T細胞存在有關。然而在HBV感染長期存在的情況下，患者機體的細胞免疫功能會出現耐受，其中T細胞的功能改變尤為明顯[4]。我國學者在HBV-PLC患者中發現其血清中IL-10呈現高表達狀態，而且細胞毒性T細胞出現了功能抑制[5]，與非HBV-PLC患者相比，前者血清中調節性T細胞比例出現了顯著升高[6]，從而導致患者不良臨床預后。可以推測T細胞亞群對HBV-PLC患者的進展及預后有著一定的聯系，但是目前鮮有這方面的詳盡報道。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究為前瞻性研究，選取2015年5月至2017年6月本院收治的所有原發性肝癌患者136例，依據是否存在HBV感染分為HBV-PLC組(78例)和非HBV-PLC組(58例)，其中HBV-PLC組中男性患者42例，女性患者36例，年齡31～68歲平均(52.54±12.26)歲，HBV的感染經血清學及HBV DNA定量檢測后確診；非HBV-PLC組中男性患者34例，女性患者24例，年齡29～65歲，平均(51.82±13.06)歲，經統計學分析后發現，兩組患者在年齡及性別構成總體分布上差異無統計學意義(P>0.05)，表明兩組患者基線水平一致，所有PLC患者的診斷均經影像學及病理學得到確診。本次研究經過了醫院倫理委員會審查及患者書面知情同意。此外，符合以下情況的病例需排除：(1)血清學證實合并有其他肝炎病毒感染；(2)合并有細菌感染；(3)免疫缺陷的患者；(4)服用了影響免疫系統功能的藥物；(5)合并有嚴重臟器功能不全的患者。

1.2方法 T細胞亞群及免疫炎性因子檢測所有患者血清中CD4+T細胞、CD8+T細胞和Treg細胞百分比采用德國BD公司生產的流式細胞儀。免疫炎性因子包括IL(白細胞介素)-10、IL-6、IL-1β和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，其檢測采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法。

2 結 果

2.1兩組患者T細胞亞群及免疫炎癥因子比較 同非HBV-PLC患者相比，HBV-PLC患者T細胞亞群出現了顯著失調，見表1。如表2所示，HBV-PLC患者免疫炎癥因子也出現了顯著失調，其IL-1β和TNF-a表達水平明顯高于非HBV-PLC患者，差異有統計學意義(P<0.05)，而IL-10水平明顯低于非HBV-PLC患者，差異有統計學意義(P<0.05)。

表1 兩組患者T細胞亞群比較

表2 兩組患者免疫炎癥因子比較

表3 不同臨床預后的HBV-PLC患者T細胞亞群比較

2.2不同臨床預后的HBV-PLC患者T細胞亞群及免疫炎癥因子比較 對HBV-PLC患者進行出院后隨訪6個月，記錄患者死亡事件發生數，并依據是否死亡結局將78例HBV-PLC患者分為死亡組(31例)和存活組(47例)，兩組患者在年齡及性別構成比上差異無統計學意義。表3所示，死亡組患者CD4+T細胞和Treg細胞百分比明顯高于存活組(P<0.05)，而CD8+T細胞百分比明顯低于存活組(P<0.05)。而且死亡組患者促炎因子水平也要明顯高于存活組(P<0.05)，而抗炎因子IL-10也要明顯低于存活組(P<0.05)。見表4。

2.3T細胞亞群及免疫炎癥因子對HBV-PLC患者不良臨床結局的影響大小分析 由以上結果可知，不同臨床結局患者T細胞亞群和免疫炎癥因子存在明顯差別，意味著這些因素可能對HBV-PLC患者的臨床結局有不同程度的影響，為了明確這些因素影響大小，筆者將這些指標進行了二分類多因素的Logistic回歸模型分析，其結果如下表5所示。由結果可知，T細胞亞群(CD4+T和Treg細胞)均是HBV-PLC患者不良臨床結局的強風險因素，其OR值分別為3.765和2.238(P<0.05)，而CD8+T細胞可能是一個保護性因子，其OR值為-3.537(P<0.05)，而炎癥因子(IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-a)對HBV-PLC患者臨床結局的影響均不如T細胞亞群。

表4 不同臨床預后的HBV-PLC患者免疫炎癥因子水平比較

表5 不同HBV-PLC臨床結局患者危險因素Logistic回歸分析結果

3 討 論

在中國，原發性肝癌主要是通過慢性HBV感染-肝硬化發展而來的[7]。因而PLC的一個主要風險因素則是HBV的感染，因而在HBV-PLC和非HBV-PLC患者中的免疫功能狀態是完全不相同的。在HBV-PLC患者中，存在淋巴細胞百分比增高表明了存在一個比較嚴重的系統性炎性反應過程。T淋巴細胞對于免疫反應過程是至關重要的。T淋巴細胞包括CD4+輔助性T細胞(Th細胞)、CD8+T細胞毒性T細胞(CTL細胞)和調節性T細胞(Treg)等等，Th細胞在增強和推進抗腫瘤免疫反應中起到了重要作用，因為它能夠促進B淋巴細胞中抗體的產生增加和CD8+T細胞向CTL細胞分化的增加[8-9]。CTL細胞能夠識別腫瘤抗原從而直接清除腫瘤細胞，因而扮演了腫瘤細胞“清道夫”的角色而發揮出了抗腫瘤效應[10]。Treg細胞在抗腫瘤免疫反應應答中主要扮演著負性調控因子的角色，其表達升高會使得PLC患者臨床結局惡化，意味著此時的Treg細胞對腫瘤細胞的殺傷作用明顯減退。T細胞亞群數量的失調出現在許多類型的癌癥中，包括非小細胞肺癌、頭頸部癌和卵巢癌中[11-13]。類似的，本研究也顯示出了HBV-PLC患者中出現了T細胞亞群(CD4+T、CD8+T和Treg細胞)的數量與非HBV-PLC患者相比明顯不同，這表明了T細胞功能的紊亂和抑制，這就可能與HBV-PLC患者不良免疫反應有重要關系。同樣，2014年的研究顯示在HBV-PLC患者中出現了Treg細胞水平的顯著上調，并且與患者HBV DNA的病毒載荷量呈正相關[6]。這些結果表明了Treg細胞水平與PLC患者的不良預后也具有正相關性，正如本研究所示，死亡組患者Treg細胞水平要明顯高于存活組，意味著降低Treg細胞水平可能改善患者臨床結局。

免疫系統中的自然殺傷細胞(NK細胞)能分泌細胞因子(如TNF-α、IL-10)和趨化因子來影響宿主免疫反應，還可以通過穿孔素/顆粒酶或受體相關的信號通路(如Fas、腫瘤壞死因子相關的凋亡誘導性配體)殺滅受病毒感染的細胞[14-15]，B淋巴細胞和T淋巴細胞主要分別參與抗體的產生和細胞調控的免疫反應。有研究發現在HBV-PLC患者中所出現的淋巴細胞(包括NK細胞、T和B淋巴細胞)水平的降低反映出了HBV-PLC患者中抗腫瘤和抗病毒免疫反應的受損情況的發生[16]，而且在HBV-PLC的病理發生過程中，研究發現胸腺輸出功能也出現了受損，這些結果表明了HBV-PLC患者中T細胞的減少可能至少部分促進了早期胸腺產生的抑制[16]，從而免疫功能出現了抑制。LIU等[16]的研究表明CD4+T和CD8+T在HBV-PLC患者中呈現高度活化狀態，這種過度激活可引起T淋巴細胞的死亡，這將消耗掉大量的T淋巴細胞并因此減低了HBV-PLC患者中的CD4+T和CD8+T水平，因此在HBV-PLC患者中T細胞的減少可能也是部分由于T淋巴細胞的過度活化所致。本研究結果也表明了HBV-PLC患者和其中的死亡患者中CD8+T數量要更低，而CD4+T升高的原因可能是CD8+T顯著下降所引起的相對升高所致。

由于HBV-PLC是一種免疫炎性疾病，患者體內的TNF-α能夠使白細胞活性增加，分泌IL-1β的量也隨之增加，IL-1β反過來又可刺激免疫細胞分泌TNF-α，使之持續性增加，因而在本研究中筆者發現HBV-PLC患者中的TNF-α和IL-1β水平要明顯高于非HBV-PLC患者。IL-10能夠調控免疫反應進程，其降低意味著免疫反應受到抑制，對于患者機體來說則是非常不利的，其過表達可抑制促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的過度釋放，因而本研究中HBV-PLC患者和死亡患者中IL-10要明顯低于對照患者。CD4+T在抗炎因子IL-10的作用可以分化成Treg細胞，而CD8+T則在促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的作用下可分化為CTL，因而CD4+T的增加和CD8+T的減少意味著HBV-PLC患者的免疫反應應答減退，患者預后較差。這些結果似乎表明了T細胞亞群和免疫炎性因子可能對HBV-PLC患者的臨床結局都有著重要影響，但是筆者通過進一步Logistic回歸模型分析顯示，T細胞亞群(CD4+T和Treg細胞)均是HBV-PLC患者不良臨床結局的強風險因素，而CD8+T細胞可能是一個保護性因子，其降低意味著患者不良結局風險較大，而炎性因子(IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α)對HBV-PLC患者臨床結局的影響均不如T細胞亞群，這表明了T細胞亞群在HBV-PLC患者臨床結局中起到了主導作用。

4 結 論

本研究對PLC是否存在HBV感染的情況進行了T細胞亞群變化檢測，并探討了這些亞群變化與患者臨床結局的關系，結果表明HBV-PLC患者中存在顯著的T細胞免疫功能失調，T細胞亞群可能成為HBV-PLC患者臨床不良結局的預測因子。