羅氏Cobas e602電化學發光分析儀分析性能驗證

張興宗，施雄飛，鄒映東，張清文，林 云

(云南省中醫醫院檢驗科,云南昆明 650021)

根據ISO15189 CNAS-CL02:2012《醫學實驗室質量和能力認可準則》的規定，對開展新的檢測項目，更換檢測系統或改變檢測試劑盒廠商時，實驗室需對其相關方法學分析性能進行驗證，對廠商提供的評價資料主要性能進行確認,并每年定期對儀器進行性能驗證[1]。本文根據NCCLS(EP5-A2、EP15-A2、EP6-A2)文件及中華人民共和國衛生行業標準《WS/T 402-2012 臨床實驗室檢驗項目參考區間的制定》的相關文件[2-5]，對羅氏Cobas e602電化學發光分析儀進行性能驗證，現報道如下。

1 材料與方法

1.1標本來源 血清樣品來自于本院臨床科室送達檢驗科的送檢標本及健康體檢中心體檢標本。

1.2標本采集及保存 采集空腹靜脈血3～5 mL于一次性真空干燥管中，室溫放置30 min，以3 000 r/min離心5 min，分離血清后于2～8 ℃冷藏保存，5 d內完成各項指標的驗證工作。

1.3儀器與試劑 儀器:羅氏Cobas e602電化學發光分析儀；試劑：羅氏公司糖類抗原19-9(CA19-9))批號 23161201、糖類抗原15-3(CA15-3)批號20990001、促絨毛膜性腺激素(hCG)批號24044401、促甲狀腺激素(TSH)批號24169301，同時期羅氏配套校準品及質控品。

1.4方法 依據NCCLS各項文件，對羅氏Cobas e602電化學發光分析儀精密度、正確度、線性范圍、參考區間指標進行性能驗證。

1.4.1精密度驗證 依據NCCLS EP5-A2對精密度進行驗證。選取2個濃度水平接近試劑說明書所聲明濃度相似的樣本(日常檢測樣本血清)，連續檢測5 d，每日2個濃度水平分析1批，每一水平同一樣本做4次重復測定且于2 h內完成。計算批內(重復性)不精密度和總(中間/室內)不精密度。批內不精密度：<1/4生產廠商試劑說明書中聲明的不精密度?？偛痪芏?中間/室內)：<1/3生產廠商試劑說明書中聲明的不精密度為驗證通過。

1.4.2正確度驗證 依據NCCLS EP15-A2及衛生部EQA室間質評計劃質評結果回執。以最近2次參加衛生部臨床檢驗中心EQA室間質評回報的10個檢測結果數據為依據，對回饋的報告進行相應的數據統計分析。計算本室上報數據與回報結果設定的靶值的回收率,回收率計算公式：回收率=(本室上報值/回報靶值)×100%，回收率控制在90%～110%之間且偏移(Bias)<1/2TEa,偏移計算公式：偏倚=(本室上報值-回報靶值)/回報靶值×100%，則該項目正確度符合要求，驗證通過。

1.4.3線性范圍驗證 依據NCCLS EP6-A2對線性范圍進行驗證。選擇患者新鮮血清，使用單獨或混合的方式獲取高值和低值樣品濃度(嚴格按照試劑說明書進行選擇)，使其與廠家聲明的線性范圍上限接近(高于上限約20%～30%濃度更好)。使用低值(L)、高值(H)血清按一定比例關系配制形成系列濃度的混合血清，各取份數按照5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的比例配置混合，形成系列驗證樣品。計算出以上6個樣品的理論濃度，并對配制的6個樣品進行重復測定，每份樣品重復測定2次，所有測定在1個分析批2 h內完成，將實測值與理論值作比較。采用平均斜率法計算回歸方程:Y=bX+a,斜率b在0.97～1.03且r2≥0.95,a與0做t檢驗判斷是否有差異性,所有數據在范圍內則線性范圍通過驗證。

1.4.4參考區間驗證 依據衛生行業標準《WS/T 402-2012 臨床實驗室檢驗項目參考期間的制定》的規定，隨機選擇20例表面健康、體檢合格的健康體檢者，抽取樣本進行檢測。對結果進行統計并與試劑說明書提供的參考區間進行比較?！?0%以上的檢測結果在參考區間范圍內(判定標準R=測定結果在參考范圍的例數/總測定例數×100%，結果≥90%為合格)說明該參考區間符合對健康人群的篩選，即參考區間驗證通過。

2 結 果

2.1精密度驗證結果 精密度驗證通過，見表1。

2.2正確度驗證 以2017年(最近)2次參加衛生部臨床檢驗中心EQA室間質量回報的10個檢測結果數據為依據，對回饋的報告進行相應的數據統計分析。計算本科室上報的數據和設定靶值的回收率及平均偏移(Bias)，4項檢測項目回收率均控制在90%～110%之間且Bias<1/2TEa，所有項目正確度符合要求，驗證通過。

2.3線性范圍驗證 線性范圍驗證通過，見表2。

表1 2個水平血清批內不精密度及總不精密度(中間/室內)結果

表2 線性范圍驗證結果

2.4參考區間 檢測項目CA19-9、CA15-3、hCG、TSH所選20例健康體檢者，檢測結果有19例或20例在參考區間內，即95%以上的檢測結果在參考區間內，R值依次為100%、95%、100%、95%，均符合≥90%的判斷驗證標準，說明該參考區間符合對健康人群的篩選，參考區間驗證通過。

3 討 論

對檢測系統進行主要性能評價，是檢驗質量的重要保證，其分析性能能夠滿足臨床要求是醫學實驗室認可和檢驗結果互認的根本保證[6]。檢驗人員也應對所使用儀器的性能全面了解，才能更好地完成臨床檢驗工作。檢測系統的驗證項目通常包括準確度、精密度、線性范圍、參考區間等性能指標，達到廠家所聲明的范圍即為驗證通過。

回歸方程b值均在1.00±0.03范圍內，相關系數r≥0.975，表明本儀器線性范圍良好，在線性范圍內的檢測結果準確可靠。參考區間是指依據所有參考值的分布特性以及臨床使用要求，選擇合適的統計方法進行歸納分析后確定的限值，包括參考上限和參考下限，90%以上的健康人群檢測結果在參考區間范圍內，說明該參考區間符合對健康人群的篩選[11]。參考區間驗證均通過，說明廠商提供的參考區間適用于健康人群篩查，符合臨床要求。

本實驗研究分別選取2項激素和標志物進行研究，目的是對電化學發光檢測系統制定出切實可行的驗證方案，以此方案對其他激素檢測項目及標志物檢測項目依次進行驗證。根據國家相關要求，醫學實驗室每年必須對所有檢測項目進行1次驗證，以保證檢測結果的準確性。在實際工作中，本實驗室已對目前所開展的35個電化學發光檢測項目進行驗證，以保證檢測結果達到質量目標要求。本次研究表明，根據NCCLS及相關文件要求，對羅氏電化學發光系統主要性能指標精密度、正確度、線性范圍、參考區間與廠家提供的資料比較，均達到廠家聲明的性能標準，各項指標性能均驗證通過，說明該4項檢測項目能為臨床診斷和治療提供準確的檢測結果，滿足臨床需求。在今后的研究中，應對其他性能指標，如：靈敏度、特異度、臨床可報告范圍以及存在性別、年齡，甚至生理周期不同的不同參考區間等性能指標進行驗證。NCCLS及相關文件要求中，對部分指標的驗證方法按不同的驗證等級提供給用戶進行選擇，用戶在實驗室條件允許的情況下，應選擇使用更高級別的方法對相應性能指標進行驗證，以保證驗證方法的權威性及可行性，為臨床提供準確可靠的檢測結果。