河源地區無償獻血人群乙型肝炎病毒感染標志物檢測結果分析

劉麗華 聶湘輝 程麗娜 黃仕云 劉 靜

廣東省河源市中心血站，廣東河源 517000

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是危害 人們健康的嚴重問題之一，在國家法定傳染病報告系統中，乙肝報告病例居乙類傳染病的首位[1]。輸血是HBV傳播的主要途徑之一，在采供血機構現行檢測的傳染病項目中，HBV經輸血傳播風險最高[2]。為減低輸血傳播病毒風險，2016年1月起我站響應國家號召改變血液樣本檢測策略：在兩遍酶免檢測的基礎上增加HBV、HCV及HIV核酸檢測。為了解開展核酸檢測后河源地區獻血人群HBV感染情況，本研究對2016 ～ 2018年無償獻血者樣本HBV感染標志物檢測情況進行分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用整群抽樣方法選取2016年1月1日～2018年12月31日在本站參加無償獻血的無償獻血者60 351例為研究對象。納入標準：（1）體檢合格；（2）乙肝表面抗原膠體金試紙條快速檢測合格；（3）谷丙轉氨酶（ALT）羅氏干式試紙條初篩合格；（4）血紅蛋白初篩合格。采集無償獻血者全血兩管，分別用于HBsAg ELISA（5mL）和HBV DNA（8mL，帶分離膠）檢測，均用EDTA-K2抗凝。

1.2 主要試劑和設備

HBsAg ELISA檢測采用法國伯樂及珠海麗珠公司試劑；抗-HCV ELISA檢測采用北京萬泰及珠海麗珠公司試劑；HIV-Ag/Ab ELISA檢測采用法國伯樂及珠海麗珠公司試劑；抗-TP ELISA檢測采用北京萬泰及珠海麗珠公司。ALT的檢測采用邁瑞公司試劑。ELISA檢測主要儀器為Xantus44/OH-150全自動加樣儀、BEPIII全自動酶免分析儀、UranusAE 268全自動酶免儀等。HBV DNA檢測采用上海浩源公司的ChiTas BSS1200全自動血液核酸檢測儀及配套試劑。HBV病毒載量測定采用美國羅氏公司High Pure Viral Nucleic Acid Large Volume Kit進行提取。采用大連寶生物公司的Premix Ex Taq（Perfect Real Time）試劑盒和美國Agilent公司的MX3005P實時熒光定量儀測定HBV病毒載量。血源篩查試劑均為國家檢定權威機構批檢合格。

1.3 方法

1.3.1 獻血前初篩 所有無償獻血者經HBsAg膠體金試紙與ALT初篩，初篩合格后進行血液采集。所有無償獻血者都簽署知情同意書，符合醫學倫理學。

1.3.2 血清學檢測 采用兩個不同生產廠家的試劑對所有研究對象樣本進行HBsAg、抗-HCV、HIV-Ag/Ab、抗-TP檢測。如雙試劑或任一試劑陽性，判為不合格；雙試劑均陰性，判為合格。ALT速率法檢測結果＞50U/L判為不合格。

1.3.3 病毒核酸檢測（NAT） HBV DNA檢測排除標準：（1）HBsAg、抗-HCV、HIV-Ag/Ab、抗-TP ELISA檢測不合格；（2）ALT速率法檢測不合格。對ELISA及ALT檢測結果合格的樣本57 594例，采用上海浩源公司的ChiTas BSS1200全自動血液核酸檢測儀以8混樣模式提取血漿樣本病毒核酸，進行熒光PCR HBV/HCV/HIV分項檢測，對混樣檢測陽性的樣本進行單人份拆分檢測，拆分陽性判為不合格。

1.3.4 病毒載量的測定 對HBV DNA檢測不合格樣本128例進行HBV病毒載量測定。引物序列：HBV-1為5'-CAA CCT CCA ATC ACT CAC CAA C-3'、HBV-2為5'-ATA TGA TAA AAC GCC GCA GAC AC-3'，雙標探針BS-1為5'-（Cy5）TCC TCC AAT TTG TCCTGG TTA TCG CT-（BHQ2）-3（引物探針由上海英駿生物技術公司廣州分公司合成）；反應體系為2×Premix Ex Taq 12.5μL，Rox DyeⅡ（50×）0.4μL，引物HBV-1（10μmol/L）終濃度為0.4μmol/L，引物HBV-2（10μmol/L）終濃度為0.4μmol/L，探 針BS-1（5μmol/L）終 濃 度 為0.2μmol/L，補蒸餾水至25μL；反應條件為95℃ 10min，95℃ 30s、56℃ 1min，42個循環；HBV國際標準品（NIBSCcode：97/750，5×105IU per vial）。

1.4 統計學分析

采用SPSS13.0軟件對數據進行統計學分析，計數資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HBsAg及HBsAg-/HBV DNA+總體檢出率

河源地區60 351例無償獻血樣本中檢出HBsAg 667例，檢出率為1.11%；57 594例ELISA及ALT檢測結果陰性的樣本中檢出 HBsAg-/HBV DNA+128例，檢出率為0.22%。

2.2 不同年份、年齡及獻血次數的獻血者HBsAg及HBV DNA檢出率

2016～2018 年不同年份間HBsAg、HBsAg-/HBV DNA+檢出率差異均無統計學意義（χ2=3.846，P=0.145；χ2=8.402，P=0.150）。不 同 年 齡、不 同獻血次數間HBsAg檢出率差異均有統計學意義（χ2=51.513，P=0.000；χ2=492.800，P=0.000）。不同年齡、不同獻血次數間HBsAg-/HBV DNA+檢出率差異均有統計學意義（χ2=34.217，P=0.000；χ2=15.617，P=0.000）。見表1。

表1 不同年份、年齡及獻血次數的獻血者樣本HBsAg及HBV DNA檢出情況

2.3 QPCR病毒定量結果

128例HBsAg-/HBV DNA+樣本，其中95例病毒載量范圍為0.210～1383.929IU/mL，中位數26.786 IU/mL，其余33例均不可定量，見表2。

表2 HBsAg-/HBV DNA+樣本QPCR定量結果

3 討論

采供血機構血液檢測項目“乙型肝炎病毒（HBV）感染標志物”指的是乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）。我國屬于HBV感染中等流行區[3]，但廣東省仍然是乙肝高度流行區，廣東省2014～2015年涉及169 211人的乙肝病毒社區流行病學調查數據廣東省的HBsAg陽性率為8.76%，其中在23～59歲的成人群體中HBsAg陽性率高達12.71%[4]。2016 ～ 2018年我站HBsAg每年檢出率分別為1.23%、1.02%、1.08%，三年間檢出率差異無統計學意義（P＞0.05）。河源地區HBsAg檢出率低于廣東潮汕（2.34%）[5]、四川綿陽（1.44%）[6]，高于深圳（0.63%）[7]及江蘇南京（0.34%）[8]，提示HBsAg在不同地區的差異明顯，經過獻血前初篩，獻血人員陽性率顯著低于正常人群，但河源地區高于如深圳、南京等一線城市。自開展核酸檢測以來，共檢測57 594份樣本，檢出128例HBsAg-/HBV DNA+樣本，檢出率為0.22%，高于韶關（0.10%，1：949）[9]及深圳地區（0.056%）[10]核酸檢出率。HBV總檢出率為1.32%（795/60 351）顯著高于未開展核酸檢測前三年的檢出率1.17%（P＜0.05）。說明ELISA聯合NAT檢測有效降低了輸血傳播HBV風險。河源地區HBsAg及HBV DNA陽性率均偏高，推測一方面是人群感染基數偏高，另一方面可能與該地區獻血人群結構相關。從獻血人群結構分析，HBsAg及HBV DNA的檢出率隨著年齡的增加逐漸增高，其中18～25歲獻血者檢出率最低，與葉賢林等[11]研究結論相符。我國1992年把乙肝疫苗納入免疫規劃，18～25歲年齡段人群均接受了乙肝疫苗注射，推測乙肝疫苗的接種可明顯降低獻血人群HBV感染的風險。此外，本研究中重復獻血者HBsAg檢出率明顯低于初次獻血者。建議該地區從固定獻血者，特別是經乙肝疫苗免疫的低年齡段人群采集血液，可有效降低輸血傳播HBV風險。

本研究33例HBsAg-/HBV DNA+樣本不可定量，占總定量樣本數的26%（33/128）；95例病毒可定量的HBsAg-/HBV DNA+樣本中，病毒載量5～50 IU/mL占57%（54/95），1100～1400 IU/mL占5%（5/95）。提示HBsAg-/HBV DNA+獻血者主要為低水平HBV感染，與周怡等[12-14]研究結果相符。本課題組后期將進一步對以上獻血者進行追蹤隨訪，補充乙肝兩對半及巢式PCR數據，對核酸檢測結果進行確認并明確具體感染類型。我站核酸系統單樣本檢測HBV DNA靈敏度為6.3IU/mL，8樣本混合檢測靈敏度為50IU/mL，而目前研究數據顯示隱匿性感染導致的HBV輸血傳播的最低感染劑量為3IU/mL[15]，遠低于我站核酸檢測系統的檢測靈敏度，因此應選用更靈敏的核酸檢測系統以進一步降低HBV經輸血傳播風險，提升血液安全。

綜上所述，河源地區無償獻血者乙肝病毒感染標志物檢出率較高，ELISA聯合NAT檢測有效降低了輸血傳播HBV風險。從固定獻血人群及經乙肝疫苗免疫的低年齡段人群采集血液，可有效降低輸血傳播HBV風險。