急性氧化應激初期人晶狀體上皮細胞株SRA01/04中衰老標記蛋白30抗氧化作用的研究△

韓子豪 李松蔓 李艷瑋 陳曦 張鴻侃 蔣林志 梁皓

研究表明，人晶狀體上皮細胞(human lens epithelial cell，HLEC)凋亡是所有非先天性白內障形成的共同細胞學基礎[1-2]，而氧化應激被認為是使細胞發生凋亡的重要因素之一[3-4]。衰老標記蛋白30(senescence marker protein 30，SMP30)作為近年來的研究熱點，國內外研究多聚集于其在肝腎方面的抗氧化和抗凋亡能力，而本課題組在前期研究中已證實，HLEC中SMP30表達量減少，是引起白內障的原因之一[5-6]，同時發現急性氧化應激使HLEC株SRA01/04中SMP30表達上調，提示SMP30參與晶狀體上皮細胞的氧化應激損傷過程[7]，故我們猜想，如果增加了SMP30的表達，是否在氧化應激反應的早期即可發揮并加強其抗氧化能力呢？因此，本研究擬通過改變HLEC株SRA01/04細胞內SMP30含量，觀察各組細胞在急性氧化應激初期時細胞內超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活力及氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)/總谷胱甘肽(total glutathione,T-GSH)比值的變化，初步探討當SRA01/04處于急性氧化應激初期時，SMP30對SRA01/04的保護作用。

1 材料與方法

1.1主要試劑及儀器HLEC株SRA01/04(廣州吉妮歐生物科技公司)；1640 L-Glutamine培養基、2.5 g·L-1Trypsin胰蛋白酶、胎牛血清(10099-141)(美國Gibco公司)；CCK-8(日本 Dojindo)；青霉素、鏈霉素(美國Amresco公司)；RGN慢病毒載體(上海吉凱基因公司)；Trizol試劑盒(上海普飛公司)；實時定量PCR儀器(Roche，瑞士)；GSSG/T-GSH測定試劑盒、SOD測定試劑盒(WST-1 法)(南京建成生物公司)。細胞培養超凈工作臺(蘇凈安泰公司)、CO2培養箱(美國Thermo公司)、光學顯微鏡(日本Olympus公司)、高速離心機(德國Eppendorf公司)、酶標儀(瑞士Tecan公司)。

1.2方法

1.2.1細胞培養使用含體積分數10%胎牛血清、100×103U·L-1青霉素及100 mg·L-1鏈霉素(pH 7.4)的1640培養基培養SRA01/04細胞，置于37 ℃、含體積分數5%CO2的細胞培養箱內培養，作為正常對照(control，CON)組細胞。……