地塞米松對仔豬十二指腸黏膜免疫的影響

謝文婷 福建省將樂縣動物衛生監督所 福建將樂 365500

地塞米松是人工合成的糖皮質激素類藥物，常用在豬病治療中，具有明顯的消炎、抗毒素、抗過敏、抗休克等作用；近年來的研究發現[1]，地塞米松可以誘導(未成熟)胸腺細胞發生凋亡；用小鼠作為試驗動物的研究發現，外源性的地塞米松不僅誘導胸腺細胞的凋亡，而且可以使脾臟細胞凋亡。謝玉生報道[2]，地塞米松可引起機體蛋白質異生和蛋白質合成的抑制，從而影響抗體生成，降低防御效果。何連琪也提到[2]：某些藥物，如糖皮質激素類的潑尼松、氫化可的松和地塞米松，可以使胸腺皮質部萎縮，胸腺細胞明顯消失，淋巴細胞被解體，產生免疫損傷作用。

查找相關資料，地塞米松對仔豬十二指腸黏膜免疫的影響未見詳細的報道，本試驗用不同劑量地塞米松注射仔豬，研究地塞米松對仔豬腸道黏膜免疫的影響，為生產中減少地塞米松對動物生產性能的影響提供理論依據，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 30頭30日齡仔豬購自福州周邊某規模化豬場。

1.1.2 儀器 ZT-12N自動脫水機，YR-21自動染色機，YB-8LF包埋機，DM2500高級顯微鏡，RM2235切片機。

1.1.3 試劑 地塞米松，包裝規格為1 mL：5 mg，購于揭陽市龍陽動物藥業有限公司；蘇木精、伊紅、PAS試劑盒購于北京羅基生物技術有限公司；一抗羊抗SIgA多克隆抗體，二抗即用型快速免疫組化MaxVisionTM試劑盒均購于福州邁新生物技術開發有限公司；3,3-二氨基聯苯二胺鹽酸鹽（DAB）顯色試劑盒和多聚賴氨酸購于北京中杉金橋生物技術公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 動物分組 試驗共6組，分對照組和試驗組，對照組分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三個小組，每組5頭；試驗組分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三個小組，每組5頭；試驗組三個小組分別連續7 d注射地塞米松1 mL（5 mg）、2 mL（10 mg）、3 mL（15 mg），對照組三個小組則注射與試驗組相同劑量的生理鹽水。

1.2.2 組織處理 綁定動物，快速剖開腹腔，取出小腸，于生理鹽水洗掉內容物，多聚甲醛固定24 h，按常規方法固定、脫水、包埋，5μm切片，24 h烘干待用。

1.2.3 HE染色 切片經自動染色機脫蠟，于蒸餾水水洗5 min，入蘇木精染色6 min，自來水洗凈，1%鹽酸酒精分色20 s，水中浸泡20 min返藍，入1%伊紅染1 min，自來水沖洗，脫水、透明、封片。染色后測量每組腸絨毛長度、隱窩深度，并對上皮內淋巴細胞進行計數。

1.2.4 PAS染色 切片脫蠟至蒸餾水洗10 min；滴加1%阿爾辛藍醋酸水溶液染色15 min；蒸餾水洗3次；滴加1%過碘酸氧化5 min；滴加Schiff堿侵染15 min；傾去Schiff堿，流水沖洗10 min；滴加明礬蘇木素核染2 min；水洗3 min，烘干、透明、封片。后進行酸性黏蛋白陽性細胞數量計數。

1.2.5 數據統計分析 試驗數據采用SPSS 16.0軟件進行統計分析，差異顯著后進行LSD多重比較，以P＜0.01（差異極顯著），P＜0.05（差異顯著）作為差異顯著性判斷標準，結果用平均數±標準差（Mean±SD）表示。

2 結果與分析

2.1 不同劑量地塞米松對仔豬腸絨毛的影響 由表1可知，注射1 mL、2 mL和3 mL地塞米松仔豬的腸絨毛明顯變短，腸絨毛高度與對照組相比較差異極顯著（P＜0.01），而且隨著劑量的加大絨毛長度逐漸遞減。說明地塞米松對仔豬的腸絨毛生長具有抑制作用，劑量越大抑制作用越明顯。

表1 不同劑量地塞米松對仔豬腸絨毛長度的影響

2.2 不同劑量地塞米松對仔豬隱窩深度的影響由表2可知，1 mL劑量的試驗組與對照組相比，仔豬腸隱窩深度差異不顯著（P＞0.05），2 mL和3 mL劑量的試驗組與對照組差異極顯著（P＜0.01），試驗組隱窩深度明顯比對照組更深；各劑量試驗組間相比差異顯著（P＜0.05），隨著劑量的增加，隱窩深度依次變深。說明地塞米松使仔豬隱窩深度變深，劑量越大癥狀越明顯。

表2 不同劑量地塞米松對仔豬腸隱窩深度的影響

2.3 不同劑量地塞米松對仔豬腸絨毛長度和隱窩深度比值影響 由表3可知，試驗組仔豬腸絨毛長度和隱窩深度比值與對照組相比差異極顯著（P＜0.01）；1 mL與2 mL劑量的試驗組相比差異顯著（P＜0.05），與3 mL劑量組相比則差異極顯著（P＜0.01）；2 mL與3 mL劑量組間差異顯著（P＜0.05）。說明地塞米松使腸黏膜吸收面積減少，動物營養物質吸收能力減弱。

表3 仔豬腸絨毛長度和隱窩深度比值

2.4 不同劑量地塞米松對仔豬腸絨毛黏液細胞的影響 AB/PAS染色結果表明，含有AB陽性的酸性黏多糖陽性細胞即Ⅱ型黏液細胞，染色結果細胞質呈藍色。1 mL劑量的試驗組Ⅱ型黏液細胞數量與對照組差異不顯著（P＞0.05），黏液細胞的數量并沒有多大的變化；2 mL和3 mL劑量試驗組腸絨毛上皮Ⅱ型黏液細胞數量與對照組差異極顯著（P＜0.01），黏液細胞的數量隨著劑量的增加而逐漸減少，即酸性黏多糖分泌減少（見表4）。

表4 不同劑量地塞米松對Ⅱ型黏液細胞數量的影響

2.5 不同劑量地塞米松對仔豬腸絨毛上皮內淋巴細胞個數的影響 由表5可得，1 mL和2 mL劑量試驗組與對照組相比差異不顯著（P＞0.05），而3 mL劑量試驗組與對照組差異顯著（P＜0.05），說明試驗組上皮內淋巴細胞數量比對照組顯著減少。結果表明，仔豬在長時間大劑量地塞米松的作用下，使仔豬十二指腸上皮內淋巴細胞減少，降低了腸道黏膜免疫應答能力。

表5 不同劑量地塞米松對仔豬腸絨毛上皮內淋巴細胞數量的影響

3 討 論

1）小腸是動物營養物質吸收和轉運的主要部位，而營養物質在動物體內的吸收受多種因素的影響，其中腸道黏膜形態是影響營養物質吸收的主要因素之一。腸黏膜細胞中存在糖皮質激素及其類似物的受體，糖皮質激素可影響黏膜細胞的發育，進而影響動物營養物質的吸收，使得動物機體營養物質匱乏、飼料中營養物質大量浪費，更甚者導致動物機體免疫機能紊亂。在規模化飼養環境下，應激尤其是長期及急性應激可嚴重影響畜禽產品品質，影響畜禽養殖業的效益[3]。大量研究表明，面對應激，動物主要通過下丘腦-垂體-腎上腺（hypothalamic-pituitaryadrenal axis，HPA axis），以級聯方式分泌相關激素，進而調整機體代謝，使機體產生相應的應激反應，其中糖皮質激素是HPA軸分泌一系列激素中直接作用于靶細胞及靶組織的關鍵激素，并且對HPA軸有反饋抑制作用[4]。利用糖皮質激素構建的應激模型，在家禽應激研究中常見[5]，且研究表明，外源性糖皮質激素及類似物可減少動物內源皮質激素的分泌[5]，李家駒等[6]研究發現皮下注射糖皮質激素能顯著降低肉仔雞血漿內源皮質酮含量，注射后肉仔雞出現腹瀉及羽毛凌亂現象。

2）研究表明，腸絨毛高度和隱窩深度反映了腸道功能狀態，腸絨毛長度增加，吸收表面積增大，消化吸收功能增強，腹瀉率降低，生長發育加快[7]；隱窩深度反映了細胞的生成率，隱窩越深，細胞成熟率下降，分泌能力減弱[8]；Mitchell等[9]研究表明，腸道黏膜形態相關指標中，腸絨毛高度、絨毛高度與隱窩深度的比值，與腸黏膜吸收面積與動物營養物質吸收能力的增強呈正相關[10]；小腸是蛋白質消化和吸收的主要場所，Ⅱ型黏液細胞的酸性分泌物有利于潤滑食物，易與蛋白酶形成復合物，起到穩定酶的作用，所以要求有較高的酸性黏多糖[11-12]；腸黏膜上皮內淋巴細胞位于腸上皮細胞間和絨毛頂端，是一組CD8+抑制性T淋巴細胞，其免疫應答以Th1和IgG為主，在防御腸道病原體入侵方面發揮重要作用[13-14]，IEL的主要功能是細胞殺傷和抑制黏膜部位的過敏反應，在于免疫應答抑制和損傷上皮細胞的消除，是黏膜免疫系統的一個免疫效應部位，參與黏膜免疫應答[15]，因此，IEL的數量可以反映小腸局部黏膜免疫屏障的完整及免疫防御功能的完善程度。

3）本次試驗結果也表明，長時間大劑量注射地塞米松，仔豬腸道絨毛變短，吸收面積減少；隱窩變深，腸黏膜細胞分泌下降，消化吸收能力減弱；隨著劑量加大，分泌的酸性黏多糖越少；上皮內淋巴細胞減少，腸道免疫應答能力降低。皮質激素能促進胃酸分泌和胃蛋白酶的生成，抑制黏液分泌，阻礙組織修復，因而可誘發或加劇胃和十二指腸潰瘍的發生，引起出血甚至穿孔。王芳等[16]報道臨床上短期常規應用Dex引起的不良反應主要以消化系統為主，表現為嘔吐、膈肌痙攣、下腹部絞痛等，而且大部分病例在給藥后數分鐘至24 h出現上述反應；可見本次試驗結果與臨床上報道的地塞米松可引起消化系統的不良反應具有相似性。Taylar和Harrison也曾報道[17]，嚴重性哮喘患者使用氫化可的松磷酸鈉時可發生同樣的副作用。因此，在臨床上和科研中應用地塞米松時應嚴格掌握適應癥和給藥劑量，合理使用，盡可能避免地塞米松不良反應的發生，確保用藥安全有效，減少生產經濟上的損失。

4 結 論

本試驗研究不同劑量地塞米松對仔豬腸絨毛長度、隱窩深度、酸性黏多糖數量及上皮內淋巴細胞數量的影響，結果表明地塞米松可使仔豬腸道的消化吸收能力減弱，腸道免疫應答能力降低。