當歸醇提物阿魏酸含量和體外抗氧化性檢測

孫曉春，李 鉑，黃文靜，王 楠，宋忠興，唐志書

(陜西中醫藥大學 陜西省中藥資源產業化協同創新中心，陜西 咸陽 712083)

當歸為傘形科植物當歸Angelicasinensis( Oliv. ) Diels的干燥根，其性溫，味甘、辛。歸肝、心、脾經；具有補血活血、調經止痛等功效[1～2]。主要包括揮發油[3]、多糖[4]、有機酸[5]等成分。研究顯示，阿魏酸具有抗氧化和清除自由基的作用，同時還具有抗腫瘤、降血脂、抗病毒等重要作用[2,6]?！吨袊幍洹?015年版將阿魏酸規定為當歸藥材的檢測指標。王婕等[7]建立了HPLC法測定當歸藥材中阿魏酸和藁本內酯含量的方法。李琰等[8]以HPLC法測定21個產地當歸的阿魏酸含量，阿魏酸的含量在0.243%～1.026%之間，結果表明不同產地的當歸阿魏酸含量相差較大。目前關于當歸多糖[9～10]、揮發油[11]的抗氧化活性研究均有報道。筆者對甘肅省隴南市宕昌縣采收的12批當歸藥材中阿魏酸含量進行了測定，并對其中4批藥材醇提物的體外抗氧化活性進行了檢測，為天然抗氧化劑的開發提供數據。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

當歸采收于甘肅省隴南市宕昌縣。經陜西中醫藥大學中藥鑒定教研室王繼濤高級實驗師鑒定為為傘形科植物當歸Angelica sinensis ( Oliv. ) Diels的干燥根。

阿魏酸對照品(批號wkq17022303，四川省維克奇生物科技有限公司出品)，甲醇(成都市科隆化學品有限公司)，DPPH (笛醫生物科技有限公司)，Vc(成都科龍化工試劑廠)，總抗氧化能力試劑盒 (批號20180306，南京建成生物工程研究所)，超氧陰離子清除能力試劑盒(批號201702，蘇州科銘生物技術有限公司)。

KQ3200超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)，FA2004B電子天平(上海佑科儀器儀表有限公司)，UV-2600紫外分光光度計(日本島津)，1510全波長酶標儀(賽默飛世爾科技公司)，e2695高效液相色譜儀(沃特世科技有限公司)。

1.2 當歸醇提物制備

參照《中國藥典》2015年版進行制備。

1.3 阿魏酸含量檢測

參照《中國藥典》2015年版，色譜條件：色譜柱Agilent TC-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.085%磷酸溶液(17∶83)為流動相；流速1.0 mL·min-1檢測波長為316 nm；柱溫35 ℃。

1.4 清除DPPH·活性測定方法

參照吳小燕等[12]的清除DPPH·活性測定方法。

1.5 清除·OH活性測定方法

參照汪荔等[13]的清除·OH活性測定方法，以水楊酸法測·OH清除率。

1.6 總抗氧化能力測定

按照試劑盒說明書操作。

1.7 清除超氧陰離子自由基活性

按照試劑盒說明書操作。

1.8 統計分析

試驗所得數據利用Excel 2013進行分析和制圖。

2 結果與分析

2.1 阿魏酸含量檢測結果

阿魏酸對照品色譜圖如圖1A所示，當歸樣品色譜圖如圖1B所示，其中保留時間17.1 min色譜峰為阿魏酸。12批當歸樣品中阿魏酸含量檢測結果如表1所示。阿魏酸含量在0.1393%～0.2335%之間，均高于中國藥典規定的0.05%。

圖1 對照品(A)和供試品(B)高效液相色譜

編號s1s2s3s4s5s6s7s8s9s10s11s12阿魏酸含量/%0.23350.22310.18580.13930.18630.20640.18340.17650.21420.15970.15940.1955

2.2 體外抗氧化性檢測結果

2.2.1 清除DPPH·活性測定結果 隨機選取4批當歸醇提物(s2、s7、s10和s12)進行體外抗氧化活性檢測，以Vc作為對照。對DPPH·清除結果如圖2所示。4批當歸醇提物對DPPH·均具有清除作用，并且隨濃度增加，清除作用增加，呈量效關系。濃度為8 μg·mL-1時，s2、s7、s10和s12對DPPH·的清除率分別為77.98%、81.44%、81.97%和85.16%，相同濃度下Vc對DPPH·的清除率為53.65%。結果表明當歸醇提物對DPPH·的清除作用高于Vc對DPPH·的清除作用。

2.2.2 清除·OH活性測定結果 對·OH的清除結果如圖3所示。4批當歸醇提物對·OH的清除作用良好。濃度為0.5 μg·mL-1時，s2、s7、s10和s12對·OH的清除率分別為53.06%、47.15%、67.45%和62.42%，相同濃度下Vc對·OH的清除率為6.56%。結果表明當歸醇提物對·OH的清除作用高于Vc對·OH的清除作用。

圖2 當歸醇提物和Vc對DPPH·清除結果

圖3 當歸醇提物和Vc對·OH清除結果

圖4 當歸醇提物和Vc對清除結果

2.2.4 總抗氧化能力測定結果 按照試劑盒方法操作，樣品抗氧化活性以達到同樣A 值所需的FeSO4 的濃度(mmol·L-1)表示，所需FeSO4的量越大，表明總抗氧化能力越高。結果如圖5所示，在相同濃度下，當歸醇提物的總抗氧化能力均高于Vc的總抗氧化能力。

圖5 歸醇提物和Vc的總抗氧化能力檢測結果

3 結論

所采樣品中阿魏酸含量在0.1393%～0.2335%之間，均高于中國藥典規定的0.05%。采用四種體系(·OH、DPPH·、O2-·和總抗氧化能力)檢測了當歸醇提物的體外抗氧化能力，均高于同濃度下Vc的抗氧化能力。結果表明，宕昌當歸醇提物具有良好的體外抗氧化能力，可為天然抗氧化劑的開發提供理論數據。