滇丹參中丹酚酸B提取及純化工藝研究

姜玉玉

摘 要：目的：以滇丹參為研究對象，探索提取與純化其丹酚酸B成分的最佳工藝。方法：將丹酚酸B成分在滇丹參的具體含量當做評價指標，通過展開正交試驗來確定純化與提取工作的最優條件。結果：通過正交試驗，可以明確，如果需要保障丹酚酸B物質的含量，應當將8倍量的水設置為提取條件，煎煮兩次，每次花費1h，選用的絮凝沉降劑為ZTC11+1，藥液的基本濃度應當為1g/5mL，絮凝劑的實際用量為B：A=4：2，攪拌速度應當控制在100r/min。結論：在對丹酚酸B這一重要成分進行提取以及后續純化處理工作時，應當先完成精制水提掖的工作，使用絮凝澄清的方法，可以減少雜質的含量。

關鍵詞：滇丹參；丹酚酸B；提取工藝；純化工藝

技術人員對鼠尾草的根莖以及根展開干燥處理工作之后，可以獲取滇丹參，其味道微苦，性屬微寒，該中藥藥材具有散瘀、活血以及調經等常用功效，同時還能發揮出止痛鎮靜的作用，在治療患者出現的子宮出血、風濕痹痛以及月經不調等癥狀時可使用滇丹參藥材，該藥材中的丹酚酸B揮主要作用，其丹酚酸B成分具有相對較強的活性，直接關系滇丹參的藥效，檢測該藥材的質量與藥用價值時，也應當重點關注丹酚酸B，確定純化與提取工藝技術的使用情況。

1 材料與方法

1.1 一般材料

儀器：Waters e2695型高效液相色譜儀；FB124型電子分析天平；SK250HP型超聲提取器。

試藥：丹酚酸B對照品；滇丹參；ZTC1+1天然澄清劑；乙腈、甲醇為色譜純；水為去離子水；其它試劑均為分析純。

1.2 方法

制備對照品溶液時，需要采用精密稱取的方法來參考技術應用標準，稱取適量的對照品，添加75%的甲醇，制備出所需的溶液，做好色譜條件的控制工作，設置流動相、流速與檢測波長與柱溫等參數，在提純過程中應當始終做好參數控制工作，而后需要繼續考察相應的線性關系，完成測定樣品含量的工作。

精密稱取丹酚酸B對照品適量，加75%甲醇制成每1 mL含0.192 mg的溶液，即得。色譜條件：Agilent-C18色譜柱（Φ4.6 mm×250 mm，5 μm）；甲醇-乙腈-甲酸-水體積比（26∶9∶1∶64）為流動相；柱溫：35 ℃；檢測波長：286 nm；流速：0.8 mL/min；理論塔板數按丹酚酸B計不低于2000。

分別精密吸取丹酚酸B對照品溶液4、6、8、10、12、14μL，在上述色譜條件下依次進樣測定。以峰面積積分值為縱坐標，對照品的進樣量為橫坐標進行線性回歸，得到回歸方程為Y=895054x-68669，相關系數r=0.9999。結果表明丹酚酸B進樣量在0.768～2.688 μg范圍內與峰面積呈現良好線性關系。

設計方案：以加水量、提取時間、提取次數為考察因素，以丹酚酸B含量為評價指標，每個因素選取3個水平，采用正交表L9（34）安排試驗，

稱取藥材9份，每份20 g，按照正交實驗表進行試驗，濾液濃縮并定容到500 mL，用微孔濾膜（0.45 μm）過濾，精密吸取溶液10 μL，注入液相色譜儀，測定。

ZTC1+1澄清劑溶液的配制：A組分溶液的配制 稱取ZTC1+1Ⅲ澄清劑A組分1 g，先用少量蒸餾水攪成糊狀，然后加蒸餾水至100mL，溶脹24 h，攪勻，雙層紗布濾過，即得1 %A 組分黏膠液； B組分溶液的配制 稱取ZTC1+1Ⅲ澄清劑B組分1 g，用少量1 %醋酸溶液溶解并攪成糊狀，然后加1 %醋酸至100 mL，溶脹24 h，攪勻，雙層紗布濾過，即得1 %B 組分黏膠液。經過預實驗，發現丹酚酸B在60 ℃時絮凝效果較好，故以60 ℃為絮凝溫度，采用正交試驗對絮凝澄清工藝的主要工藝參數進行優化。

2 結果

提取溶劑的選擇：分別稱取40 g（準確到0.01 g）藥材4份，分別以水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇為溶劑，加入8倍量溶劑提取1.5 h，過濾，濾渣再用6倍量溶劑提取1 h，合并濾液，濃縮并定容到500 mL，用微孔濾膜（0.45 μm）過濾，精密吸取10 μL溶液，注入液相色譜儀，測定丹酚酸B的含量，結果分別為2.18%、2.45%、2.37%、2.09%。表明30%乙醇提取含量最高，但以水為溶劑時，與30%乙醇提取率相差不大，因考慮實際生產的需要，故以水為提取溶劑。

根據直觀分析結果表明，紫丹參的最佳水提工藝為8倍量水，提取3次，每次1 h，即A2B1C3 。由于提取3次和2次的結果相差不大，為了節約成本，將工藝定為8倍量水，提取2次，每次1 h，即A2B1C2。

直觀分析可知，影響絮凝澄清的因素順序為：藥液濃縮比>絮凝劑組分比>攪拌速度，最佳工藝組合為A1B1C2。方差分析顯示，藥液濃度對精制工藝具有顯著性影響。

驗證試驗：平行取相同量的藥液3份，每份50 mL。按上述確定的最佳工藝條件進行驗證。同時測得丹酚酸B含量分別為35.62、35.85、35.77 mg/g，驗證結果與正交試驗相符。

3 討論

相關人員對滇丹參展開藥理方面的研究工作時，對其具有的主要藥理作用進行了充分地認識，發現其可以對人體的冠狀動脈系統產生影響，使其血流量明顯增加，避免使患者形成血栓的問題，同時還能對血小板的聚集起到抑制作用，將原有的血粘度減低，將自由基消除，使血管內皮的功能被改善，血管在損傷之后，也不會出現過于活躍的血液增生活動，該藥材可以幫助使用者預防冠心病，患者接受血管成形術之后，可使用該藥材來防治血管再狹窄的問題。

滇丹參具有的多重藥理功效都非常重要，其背部含有的丹參酮成分具有突出的脂溶性，同時其內部還含有酚酸類成分，這些成分具有不同程度的水溶性特點，本文研究的丹酚酸B的含量相對比較高，主要有1分子咖啡酸與3分子丹酚素兩種重要成分縮合而成，具有良好的活性，可以發揮出抗氧化以及清除自由基的作用，評測滇丹參的質量時，也可以將丹酚酸B這一成分的具體含量當做評測指標，選用常規的提取工藝技術，以高效的絮凝澄清型純化方法來處理該藥材，盡可能多地提取丹酚酸B成分。

提取丹酚酸B這一成分時，應當注意到其在水提掖中存在的不穩定的問題，如果提取工作消耗的時間過長，或者實際溫度過高，丹酚酸B這一重要成分的含量會因受到影響而降低，因此在提取與純化的活動中，都應當關注丹酚酸B存有的降解問題。

完成純化工藝研究之后確定，控制藥液濃縮比時，應當將其設定在1：5（g/mL），丹酚酸B成分的保留率可以保持在最高水平，如果藥液相對比較稀，丹酚酸B有效成分的含量也會隨之降低。當A組分增加之后，絮凝劑組分比也會隨之增加，丹酚酸B物質的含量因此而降低，如果組分比可以控制為4/2，提取的效果可達到最佳。

本次選用的絮凝澄清劑在被使用時可將其良好的選擇性呈現出來，藥物中的蛋白質、較直等可與該澄清劑選擇性地共沉，同時與其他類型的絮凝劑相比，其不僅使用相對簡便，同時還具有安全無毒的功效，不會給藥材中的其他有效成分造成影響，在水提純工藝技術中，其使用效果優于普通的乙醇，可以幫助縮短藥材加工的周期，控制提純成分，經由該種澄清劑制備出的干膏類藥品具有良好的吸濕性。

因此可知在處理滇丹參藥材時，需要控制精制水提液的工作，陳家勇絮凝澄清的方法相對關鍵，采用絮凝澄清的的技術手段之后，絮凝劑的使用量被縮小，試驗造成的污染也比較少，在純化與提取的環節中也不會出現過多地損失丹酚酸B成分的問題，因此可在制藥過程中推廣該技術手段。

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