不同斑點果型青翹的質量研究

趙艷 雷振宏 王棟 王玉龍 郭巖軍 李軍

【摘 ? 要】 為給連翹種質資源評價及其有效成分的開發利用提供參考依據。對3種不同果實表面斑點占比果型連翹植株（共40株）果實形態參數，青翹內連翹苷、連翹酯苷A檢測和分析。測定結果表明，斑點占比居中的有效成分含量高于其他兩類。育種可以優先考慮斑點居中種源。

【關鍵詞】 青翹;斑點;連翹苷;連翹酯苷

Study on the quality of different spots Green Fructus forsythiae

Zhao Yan ? Lei Zhenhong ? Wang Dong ? Wang Yulong ? Guo Yanjun ? Li Jun

（Shanxi Zhendong Daodi Druges Development Co.，Ltd. ? 047100 ）

[Abstract] To provide reference for the germplasm resources evaluation of forsythia forsythia and the development and utilization of its effective components.The fruit morphology parameters of three different fruit types of forsythia plants （A total of 40） were tested and analyzed，Detection and analysis of forsythin and Forsythiasid A.The results showed that the content of effective components in the speckle fraction was higher than the other two types.The spot centered provenance can be given priority in breeding.

[Keywords] Green Fructus forsythiae; spots; forsythin; Forsythiasid A

連翹來源于木犀科植物連翹Forsythia suspense （Thunb.）Vahl的干燥果實，常用大宗藥材，有“瘡家圣藥”之稱的美譽，最 早記載于《神農本草經》，列為下品。連翹味苦，性微寒。具有清熱解毒，消腫散結，疏散風熱之功效[1]。主治溫熱、瘡瘍、瘰疬、丹毒、斑疹、流感等。連翹還有抗菌、強心、利尿、鎮吐等藥理作用，有抗微生物、抗肝損傷、抗炎、保護心血管系統等作用，臨床上常用連翹治療急性風熱感冒、癰腫瘡毒、淋巴結結核、尿路感染等證。

晉東南地區地形與氣候均交獨特，是中藥材連翹的重要產區之一，但存在的品種資源卻是十分混雜。其中有大、中、小果型之分，也存在長葉、邊緣有齒、邊緣光滑等葉型，外觀斑點有無、多少也有差異。根據植物體內活性成分的積累受遺傳因素及環境的雙重影響，形態變異滯后于生理生化變異的一般規律，可以推測，連翹植株變異在次生代謝產物上有所反應映[2]。為給連翹種質資源評價及其有效成分的開發利用提供依據，測定了該地區同一栽培群體下果實斑點不同連翹植株的形態參數，并對其果實中的連翹苷、連翹酯苷A的含量及相關性進行了初步分析，現將研究結果分析報道如下。

1 ?材料與方法

1.1 ?儀器與試劑

Aglient1260高效液相色譜儀（四元泵、紫外檢測器、在線脫氣機、柱溫箱）;BSA124S電子天平（賽多利斯科學儀器）;KQ-500DB型數控超聲波清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）;HY-3A多功能調速振蕩器（江蘇金壇市金城國勝實驗儀器廠）;FW80高速萬能粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）。

試驗用水為雙蒸水，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純;連翹苷對照品（批號：含量為96.8%），連翹酯苷A對照品（批號：含量為92.9%），供含量測定用，均購自中國藥品生物品檢定所。

1.2 ?材料

材料來源于山西振東集團綠化園區定植的40株連翹植株，連翹植株經山西省長治學院植物學金山教授、鐵軍教授鑒定為木犀科連翹Forsythia suspense （Thunb.）Vahl。采摘時間為2018年8月25日，每株隨機采果100個，將果實混勻按斑點面積比例不同分成三個組：Y≥60%、60%>Y>30%、Y≦30%，Y=斑點面積：果實表面積×100%。分別水煮8min，85℃烘箱干燥，待檢[3]。

1.3 ?方法

1.3.1條件 ? 色譜柱為Luna5uC18（2）100A（250mm×4.6mm，5μm），連翹苷測定流動相為乙腈-水（25：75，V：V），檢測波長為277nm，柱溫為室溫，流速為1.0mL/min;連翹酯苷A測定流動相為乙腈-0.4%冰醋酸溶液（15：85，V：V），檢測波長為330nm，柱溫為室溫，流速為1.0mL/min。HY-3A多功能調速振蕩器，頻率為125Hz。

1.3.2 ?對照品溶液的制備 ? ?精密稱取連翹苷對照品11.47mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得;精密稱取連翹酯苷A對照14.97mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（臨用配置）。

1.3.3 ?供試品溶液的制備 ? ?連翹苷供試品溶液制備：取供試樣品粉末（過三號篩）約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇15mL，稱定重量，浸漬過夜，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）25min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5mL，蒸至近干，加中性氧化鋁0.5g拌勻，轉移至中性氧化鋁柱（100-120目，1g，內徑為1.0-1.5cm）上，用70%乙醇80mL洗脫，搜集洗脫液，濃縮至干，殘渣用50%甲醇溶解 ，轉移至5mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

連翹酯苷A供試品溶液制備：取供試樣品粉末（過三號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇15mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得[1]。

1.3.4 ?線性關系考察 ? ?分別精密量取濃度為1.11030mg/mL的連翹苷、1.39071mg/mL的連翹酯苷A對照品溶液3、5、8、10、12、15μL進樣分析，測定峰面積，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，得連翹苷回歸方程為（y=2219.4x+591.86，R2=0.9997），表明連翹苷進樣量在3.33-13.32μg具有良好的線性關系;連翹酯苷A回歸方程為（y=1771x+599.59，R2=0.9997），進樣量在4.17-6.69μg具有良好的線性關系。

1.3.5 ?精密度試驗 ? ?精密吸取對照品溶液10μL，重復進樣5次，連翹苷峰面積的RSD為0.8%，連翹酯苷A峰面積的RSD為0.1%，表明該方法的精密度良好。

1.3.6 ?重復性試驗 ? ?取供試品（同一批號），按供試品溶液的制備方法制備6份供試液，分別進樣10μL，連翹苷峰面積的RSD為1.6%，連翹酯苷A峰面積的RSD為0.3%。

1.3.7 ?穩定性試驗 ? ?精密吸取同一種供試品溶液在0、4、6、8、10、12h內重復進樣6次，每次10μL，計算連翹苷峰面積的RSD為1.5%，連翹酯苷A峰面積的RSD為0.2%，表明供試品溶液在12h內穩定。

2 ?結果與分析

2.1 ?果實性狀測定

根據分組，測定不同組的果實縱徑、橫徑、百果均重、折干率（100%×干果重/鮮果重）等，評價不同斑點果實的性狀，每項5次重復，去除最高、最低值，取均值。結果見表1。

三種斑點果實的連翹在該地區均有分布，Y≦30%較少，其余兩種分布較為普遍。從表1可以得出，三種斑點類型橫縱徑和百果重差距不大，折干率Y≥60%較小，60%>Y>30%次之，Y≦30%最大。

2.2 ?有效成分含量測定

根據2015版《中國藥典》通則2201項下方法測定，結果見表2：

從表2可以得出，三種果型的連翹苷、連翹酯苷A含量均高于藥典標準，60%>Y>30%的連翹苷、連翹酯苷A的含量均高于其他兩種類型。

三類型的有效成分含量較以往均較低，分析其原因，2018年4月5日，一場大雪突襲，氣溫急降，隨后的冰凍，導致正在開花的連翹受到了嚴重的凍害，花瓣枯萎或者直接掉落，晉東南主產區青翹的產量急劇下降，好多植株顆粒無收，只有背風坡地或溝底有零星果實，質量較以往差距很大，試驗還需后期繼續跟進。

3 ?討論

連翹以果實入藥，青翹以其清熱解毒功效，成為78個中成藥的原料藥，需求量很大，具有很好的藥用價值和經濟價值[1]。表面斑點是連翹的固有性狀，能夠反映連翹的內在質量[5]。連翹果實表面斑點的成因還未有明確報道，多在外因方面有些猜測，比如海拔、坡面、氣候等外因[2]。本研究得出青翹斑點多和少對應的連翹苷、連翹酯苷A含量有相關性，表面斑點過多、多少，含量檢測結果都不高，具體的量化關系還需擴大樣本數量，進一步深入研究。本研究旨在針對連翹的良種繁育，選出優良品種，增加主產區的競爭優勢。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.一部[M].北京：中? ? ?國醫藥科技出版社，2015：170.

[2] 王海莉.不同環境條件對連翹生長發育過程的影響[J].中醫? ? ? 學報，2014，29（11）：1630-1631+1634.

[3] 趙艷，等.青翹炮制工藝研究及其標準化操作規程（SOP）的? ? ? 制定[J].園藝與種苗，2016，（1）：3-5+29.

[4] 夏偉，等.連翹不同果形質量評價[J].中國實驗方劑學雜志，? ? ?2018，23（6）：60-64.

[5] 劉辰，等.連翹表面斑點生長規律及影響因子的影響[J].山? ? ? 東化工，2018，47（10）：95-97.