高效液相色譜法測定化妝品中辛酰羥肟酸的含量

李法錦，李適煒，劉瑞學，冷群英

（廣東芭薇生物科技股份有限公司，廣東 廣州 510440）

在化妝品中防腐劑的使用是不可或缺的[1]，傳統防腐劑在化妝品法津法規日益完善的條件下，防腐劑在化妝品中使用的安全性問題比以往任何時候都更受到社會的關注，但現有替代防腐劑的原料由于成本、相容性和防腐效果等問題得不到較好的推廣和應用，化妝品行業需要新的解決方案來滿足市場對防腐產品的需 求[2]。所以化妝品制造從而產生了無防腐添加概念。

辛酰羥肟酸可以取代傳統防腐劑應用于化妝品中。它在pH值為中性時依舊有效，是抑菌的理想有機酸，而在這個環境中其它大多數防腐劑替代物的功效都不是很理想。辛酰羥肟酸是唯一在酸性到中性全程都保持未電離狀態的有機酸。其性質穩定，具有強烈的抑制真菌效果，與絕大多數化妝品原料的兼容性很好[3]。烷基二元醇在個人護理品工業中已經有廣泛的應用，其保濕性和安全性已得到普遍接受。同時，部分二元醇還顯示出一定抗微生物的效果。辛酰羥肟酸作為防腐劑應用時，應復配細菌和酵母菌抑制劑二元醇類以達到廣譜抗菌效果，相互配合互補，提升防腐優勢[4-6]。目前在化妝品中測試辛酰羥肟酸的高效液相色譜法很少有文獻報道。本文擬建立化妝品中辛酰羥肟酸含量測定的高效液相色譜法，為化妝品中辛酰羥肟酸測定方法的建立提供適用性的參考，進一步規范化妝品中具有防腐作用的原料的合規性使用。

1 實驗部分

1. 1 主要試劑與儀器

辛酰羥肟酸標準物質，純度≥99%，德國Dr. Ehrenstorfer GmbH公司；甲醇、乙腈，色譜純，上海安譜實驗科技股份有限公司。Sartorius BSA224S分析天平（0.1 mg），賽多利斯有限公司；Agilent 1260高效液相色譜儀，配二極管陣列檢測器（DAD），安捷倫科技有限公司；KQ-300DE超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；L-500離心機，湘潭湘儀儀器有限公司；Milli-Q超純水儀，美國密理博有限公司。

1. 2 實驗方法

1. 2. 1 色譜條件

液相色譜柱為ZORBAX Eclipse Plus C18柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流動相A為水，流動相B為乙腈，流動相VA∶VB=55∶45，采用等梯度洗脫程序，柱溫為 25 ℃，流動相使用之前用有機濾膜（0.45 μm）過濾；DAD檢測波長為220 nm，進樣量為10 μL，流速為 1.0 mL/min。流動相需要使用0.45 μm濾膜進行抽濾和超聲脫氣才能上機使用。

1. 2. 2 標準溶液的配制

準確稱取一定質量的辛酰羥肟酸標準物質，用甲醇溶解后轉移至25 mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，溶液質量濃度為1 g/L。精密吸取辛酰羥肟酸標準液0.10，0.25，0.50，1.00和2.00 mL，分別定容至10 mL，配制得到辛酰羥肟酸質量濃度分別為10，25，50，100和200 mg/L的系列標準溶液，上機前均經0.45 μm濾膜過濾。

1. 2. 3 樣品溶液制備

稱取樣品1 g （精確至0.001 g）于10 mL具塞比色管中（必要時，置于水浴中去除乙醇等揮發性有機溶劑），加乙腈-水溶液（體積比45∶55）至刻度，振搖，超聲提取30 min，必要時可高速離心。上機分析前使用0.45 μm濾膜過濾，濾液作為待測樣液備用。

2 結果與討論

2. 1 流動相的選擇

考察不同有機相與水的混合比例對辛酰羥肟酸出峰情況的影響，分別是乙腈與水（體積比55∶45和45∶55），甲醇與水（體積比60∶40） 3種流動相比例。發現乙腈與水（體積比45∶55）達到很好的分離，峰形良好，乙腈與水（體積比55∶45）目標峰出現拖尾，甲醇與水（體積比60∶40）目標峰峰形良好但響應值偏低。最終選擇乙腈與水（體積比45∶55）作為色譜測試的流動相。辛酰羥肟酸標準物質的色譜圖如圖1所示。

圖 1 辛酰羥肟酸的標準色譜圖Fig. 1 Standard chromatogram of octyl hydroxamic acid

2. 2 檢測波長的選擇

通過檢測器全波長掃描可以得到目標物質在205～230 nm均有吸收峰。在實驗分析中發現同樣濃度的樣品在205 nm處響應值最大，考慮到樣品基質的干擾，選擇220 nm作為檢測波長，可以達到很好的掃描效果。

2. 3 樣品提取方法的選擇

2. 3. 1 樣品提取溶劑的選擇

在相同的色譜條件下，比較了甲醇、乙腈和流動相3種溶劑對不同種類化妝品（膏霜類、乳液類、液體制劑類）的提取效果。結果表明，這3種溶劑對目標物質的提取率沒有明顯的差異，為消除溶劑效應，選擇流動相（乙腈-水溶液體積比45∶55）作為樣品超聲提取的溶劑。

2. 3. 2 超聲提取時間的選擇

超聲提取的時間會影響樣品的提取率，考察了10～60 min不同時間段內超聲波的提取率。發現超聲提取30 min以上提取率沒有明顯的增大，而且隨著超聲時間的延長，也會使超聲波儀器內的水溫上升，導致溶劑的揮發。綜合考慮，選擇30 min為超聲提取 時間。

2. 4 標準曲線的建立

經HPLC分析后得到標準曲線，以峰面積（y）為縱坐標，標準溶液質量濃度（x，mg/L）為橫坐標。結果表明，該方法在10～200 mg/L范圍內呈現良好的線性關系，回歸方程為y=11.195 3x+5.710 2（r2=0.999 9）。按S/N=3計算得出方法檢出限為5 mg/kg。

2. 5 精密度

考察了10，50和100 mg/L低、中、高3個質量濃度的辛酰羥肟酸標準溶液的精密度，日內分析6次，連續測定6 d，結果見表1。測定日內精密度分別為2.20%，0.92%和0.42%，日間精密度分別為1.67%，0.78%和0.28%，實驗證明，該方法精密度高。

2. 6 加標回收

取液體制劑、乳液類和膏霜類3種不同基質的空白樣品進行高、中、低3個濃度水平的加標回收實驗，按前文實驗方法操作，結果見表2。由表2可知，加標回收率為96.28%～101.23%，相對標準偏差（RSD）≤2.43%，結果表明該方法準確可靠，基質無干擾。

2. 7 重現性實驗

平行配制6份供試品溶液，在相同條件下上機測量，RSD為0.37 %。實驗證明，該方法重現性好。

表 1 辛酰羥肟酸標準溶液的日內和日間穩定性Tab. 1 Intra-day and inter-day stabilities of octyl hydroxamic acid standard solution

表 2 辛酰羥肟酸回收率（n=6）Tab. 2 Recovery of octyl hydroxamic acid （n=6）

2. 8 實際樣品測定

應用所建立的測試方法對標識含有辛酰羥肟酸的化妝品樣品進行定性定量分析，結果見表3。

表 3 化妝品樣品中辛酰羥肟酸的檢出情況Tab. 3 De termination of octyl hydroxamic acid in cosmetic samples

2. 9 干擾試驗

在化妝品配方中，辛酰羥肟酸一般與苯氧乙醇、對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯其中一個或者兩個防腐劑復配使用，通過實驗分析，這4種物質在本方法分析當中不存在互相干擾，不影響目標物質的定性與定量。

3 結論

建立了使用高效液相色譜測定化妝品中辛酰羥肟酸的分析方法。該方法精密度良好，不同劑型的樣品回收率高，重現性良好，建立的分析方法操作簡單，可快速準確地對化妝品樣品中辛酰羥肟酸進行定性和定量分析。