深圳市3～7歲健康兒童EV71疫苗接種及免疫狀況研究

倫瓊瓊，劉渠，劉鳳仁，王德全

(1. 廣東藥科大學公共衛生學院，廣東 廣州 510310； 2.深圳市龍崗區疾病預防控制中心，廣東 深圳 518172)

腸道病毒71型(enterovirus71,EV71)是引起手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的常見病毒之一，主要侵犯學齡前兒童，可引起手掌、足部、口腔、臀部等部位的皰疹，具有嗜神經毒性，可引發神經系統并發癥，嚴重可致命，是引起手足口病重癥和死亡病例的主要病毒類型[1-2]，而且在以往的手足口病流行中，EV71占據著優勢地位，是我國嚴重的公共衛生問題，也是衛生部門關注的重點。我國自主研發的腸道病毒71型滅活疫苗(EV71疫苗)于2015年底獲食品藥品監督管理局批準上市，2016年下半年在全國范圍內投入使用，但學齡前兒童EV71抗體陽性情況報告較少。為了解深圳市學齡前健康兒童EV71抗體產生狀況及接種EV71疫苗的情況，為規劃EV71疫苗接種方案和防制手足口病提供依據開展了此次研究工作。

1 材料與方法

1.1 調查對象

采用橫斷面調查方法，利用方便抽樣方法對參加2018年春季龍崗區中心城幼兒園體檢的健康兒童采集靜脈血。本研究已獲得廣東藥科大學倫理委員會的批準。根據2012年深圳市龍崗區腸道病毒71型抗體水平調查所得兒童EV71 IgG抗體陽性率為50%為基礎，按照樣本量計算公式n=400×q/p，計算得到樣本量為400人，另外增加10%樣本量，樣本總量為440人。

1.2 血清標本

來源于龍崗區婦幼保健院在龍崗中心城幼兒園開展春季體檢所采的血樣標本，于2018年4月采集兒童靜脈血，每管3～5 mL，4 ℃條件下保存盡快送實驗室，實驗室離心后取上清液，存放于-20 ℃低溫條件下待檢。

1.3 實驗方法

采用北京萬泰生物藥業股份有限公司的腸道病毒71型IgM抗體檢測試劑盒(產品批號：EI20180502A、EI20180201A )、北京貝爾生物工程有限公司的腸道病毒71型抗體(IgG)檢測試劑盒(產品批號：20180301)，使用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測方法分別檢測EV71-IgM抗體、EV71-IgG抗體。在試劑盒有效期之內嚴格按照試劑盒說明書指導規范操作。按要求進行配液，稀釋樣品，設立陰性、陽性和空白對照，溫浴，洗板，加酶，顯色，測定。

1.4 判斷標準

設定酶標儀波長于450 nm處，用空白孔凋零后測定各孔吸光度值A450,標本吸光度值≥臨界值為陽性,標本吸光度值<臨界值為陰性。EV71-IgM抗體臨界值=0.10+陰性對照孔A450,均值(當陰性對照孔低于0.05者按0.05計算)；EV71-IgG抗體臨界值=0.10+陰性對照孔A450,均值(當陰性對照孔低于0.07者按0.07計算)。

1.5 統計方法

用Excel 軟件錄入實驗數據，用SPSS 21.0軟件進行數據分析，采用描述性方法進行數據的統計分析，采用χ2檢驗、多因素Logistic回歸分析方法進行統計學檢驗，檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 一般情況

2018年4月，龍崗區婦幼保健院對龍崗區中心城多家幼兒園的兒童進行年度體檢，共采集445人的靜脈血，研究對象年齡3～7歲，男童238名，女童207名。經檢測，438份血清的EV71-IgM抗體陽性率為7.31%(32/438)，445份血清的EV71-IgG抗體陽性率為80.90%(360/445)。

2.2 不同性別抗體陽性率情況

實驗結果顯示，男童EV71-IgM抗體陽性率為8.94%，EV71-IgG抗體陽性率為79.83%；女童EV71-IgM抗體陽性率為5.42%，EV71-IgG抗體陽性率為82.13%。男女童之間EV71-IgM抗體(χ2=4.29，P=0.830)和EV71-IgG抗體(χ2=0.71，P=0.951)差異均無統計學意義，見表1。

2.3 不同年齡抗體陽性率情況

實驗結果顯示，<5歲和≥6歲的兒童EV71-IgM抗體陽性率均比5～6歲的兒童高，隨著年齡增長，各年齡層兒童體內EV71-IgG抗體陽性率逐漸升高，其中5～6歲年齡段的兒童增幅最大。χ2檢驗結果顯示，3～7歲各年齡段兒童EV71-IgM抗體(χ2=24.68，P=0.002)差異有統計學意義，而EV71-IgG抗體(χ2=3.37，P=0.498)差異無統計學意義，見表1。

2.4 不同學校抗體陽性率情況

本實驗血樣標本來自14所幼兒園，實驗結果顯示，EV71-IgM陽性率排列前3位是家和盛世、城市立方、深中二幼3所幼兒園；EV71-IgG陽性率排列前3位是喜福匯、黃閣翠苑、里茲3所幼兒園。不同學校之間EV71-IgM陽性率(χ2=13.90，P=0.381)和EV71-IgG陽性率(χ2=10.69，P=0.637)差異均無統計學意義，見表2。

2.5 不同學生接種EV71疫苗情況的比較

χ2檢驗結果顯示，不同年齡學生EV71疫苗接種率的差異有統計學意義(P<0.001)；而不同性別(P>0.954)及不同學校(P>0.584)的學生EV71疫苗接種率的差異均無統計學意義。對學生接種EV71疫苗的影響因素，經多因素Logistic回歸分析結果顯示，與年齡不滿5歲的兒童相比，對年齡滿5歲的兒童來說，年齡增長是其EV71疫苗接種率低的影響因素，見表3。

表1 龍崗區不同年齡健康兒童血清學EV71抗體情況Table 1 Serum antibody against EV71 of healthy children in different ages in longgang district

表2 各體檢幼兒園EV71-IgM/EV71-IgG陽性率情況Table 2 Positive rate of EV71-IgM/EV71-IgG in various kindergartens

表3 不同學童EV71疫苗接種率的多因素Logistic回歸分析Table 3 Multiple logistic regression analysis of the EV71 vaccination rate in preschool children

3 討論

本研究顯示，深圳市3～7歲健康幼托兒童EV71-IgM抗體陽性率為7.31%，比張東曉[3]的結果(15.9%)低，比劉鳳仁[4]的結果(1.51%)高，該差異可能與在不同年份與月份采血有關，因為每年的優勢腸道病毒類型不同，且每個月手足口病的流行強度也有較大差異。EV71-IgG抗體陽性率為80.90%，與張東曉(79.7%)的結果相近，比周世力[5](50%)、李靜媚[6](45.64%)、劉鳳仁[4](46.12%)等的研究結果均高，這可能是經過最近幾年手足口病的流行，人群中EV71-IgG抗體得到累積；再者，近兩年來EV71疫苗的使用，使得部分兒童體內產生了EV71-IgG抗體。

性別和不同學校學生之間的抗體陽性率差異無統計學意義，可能與樣本量不夠大有關，研究對象都是幼托兒童，同在一個密集的環境里，面臨的易感因素幾乎一樣，從而感染的幾率也相近。隨年齡增長，兒童EV71-IgG抗體陽性率逐漸上升，與李佳萌[7]、陳建華[8]的研究結果一致。EV71-IgM抗體陽性率<5歲組和≥6歲組相近(8.76%、8.82%)，5～6歲組則較低(3.82%)，可能由于<5歲的兒童體質較弱，衛生意識較差，不良衛生習慣較多，導致感染EV71的幾率更大。由于人體接觸EV71會發生重復感染，這與實驗結果一致，體內有EV71-IgG抗體的≥6歲組兒童，其血清也檢出EV71-IgM抗體。

本研究對象EV71疫苗接種率較低，為10.56%(47/445)，與龍遺芳[9]的研究提到深圳市EV71疫苗接種率(21.26%)位居廣東省首位不一致。按年齡分層后統計顯示各年齡組EV71疫苗接種率為<5歲組22.56%(30/133)、5～6歲組10.45%(14/134)、≥6歲組1.69%(3/178)，EV71疫苗接種率隨著年齡的增長呈現明顯的下降趨勢，與Logistic多元回歸分析結果一致，年齡增長是EV71疫苗接種率降低的影響因素。這可能與EV71疫苗有接種年齡要求有關，2016年9月深圳開始使用EV71疫苗，適用于6月齡～5歲的兒童，在2018年滿6歲的兒童，2016年已大于4歲，臨近接種適齡期上限可能會影響到家長的接種意愿。<5歲的兒童與≥6歲的兒童相比，前者EV71疫苗接種率較后者高，體內產生了一定的EV71-IgG抗體；后者經歷過較多的手足口病流行期，體質也比前者強，體內累積了一定的EV71-IgG抗體，雖然EV71疫苗接種率較低，也對由EV71引起的手足口病有一定的預防作用，這可能是前者EV71-IgM抗體陽性率與后者相近的原因，說明EV71疫苗在一定程度上對預防手足口病感染發揮了積極的作用。

手足口病報告發病數連續多年居丙類傳染病之首，目前沒有特效治療藥，接種EV71疫苗是最有效的防控方法。面對影響因素復雜[10-11]的手足口病，要想更好地防制手足口病，除了落實常規防護措施，更要增強家長的EV71疫苗接種意愿，提高EV71疫苗接種率。高志英[12]、姜瓔慈[13]、孫景異[14]等的研究中提到，大部分的家長聽說過手足口病，仍有少數家長沒聽過，而很多家長還不知道EV71疫苗，家長即便知道該苗，也因為擔心疫苗的安全性而不想接種。顧偉[15]、張量智[16]、白云驊[17]等研究表明，EV71疫苗安全性和保護效果良好。衛生部門及時公布該苗相關安全和效果數據，可以提高大眾對EV71疫苗的信心，提高EV71疫苗的接種率，爭取早日形成人群免疫屏障，改善我國手足口病高發的局面。

綜上所述，深圳市健康幼托兒童對手足口病的易感性較高，使用EV71疫苗后，兒童群體中產生了EV71-IgG抗體，對由EV71引起的手足口病有積極的預防作用，但目前EV71疫苗接種率普遍偏低。防制手足口病需要雙管齊下，除做好常規防護措施外還要提高EV71疫苗接種率，從而降低手足口病的發病率。