可樂定及賽庚啶的檢測技術研究進展

張瑩雪

（鄭州市獸藥飼料監察所，河南 鄭州 450000）

在飼糧中添加可樂定（Clonidine），可降低脂肪比率，提高瘦肉率，改善肉類品質，并能促進動物生長發育。賽庚啶（Cyproheptadine）能夠刺激食欲，增加體重?；诳蓸范ê唾惛さ倪@些特性，一些養殖企業將其作為非法飼料添加劑用于促進畜禽生長。2010年我國發布的《禁止在飼料和動物飲水中使用的物質》將可樂定和賽庚啶列入其中。

1 可樂定與賽庚啶的理化特性

樂定（Clonidine）分子式C9H9C12N3，分子量230，屬于咪唑啉衍生物，具有激發與促進垂體增加分泌生長激素(GH)的作用，因此可促進動物生長，改善畜產品品質。其缺點是副作用大、易積累，消費者一旦食用含有可樂定殘留的動物源性食品，將會危及自身健康。

賽庚啶（Cyproheptadine）分子式為C21H21N，分子量為287。賽庚啶與動物下丘腦食欲中樞的5-羥色胺起到拮抗作用，從而抑制刺激動物食欲，使其體重增加，在動物飼料中的違法使用，與“瘦肉精”鹽酸克侖特羅的效果類似，被稱為新型“瘦肉精”。

2 可樂定和賽庚啶的檢測方法

2.1 可樂定測定方法

無論是飼料樣品還是動物組織、血液、尿液等，均可使用液相色譜-串聯質譜法測定可樂定的含量，該檢測方法的優點為靈敏度較高、選擇性好、檢出和定量限低、準確度高。相色譜-串聯質譜法測定的缺點為前處理繁瑣、試驗耗時長、儀器價格昂貴、檢測成本高等，不適用于普通養殖廠及現場快篩。因此，根據免疫競爭原理，采用抗原抗體特異性反應，建立了適合基層推廣普及，同時也適合快篩的酶聯免疫檢測試劑盒，避免了上述液相色譜-串聯質譜法測定的缺點。

2.2 賽庚啶測定方法

已有的賽庚啶殘留量的測定方法主要是利用超高效液相色譜-串聯質譜法，待測樣品主要是飼料、豬肉和豬毛。該方法準確度和靈敏度較高，具有較強的可行性和實用性。尤其是采用豬毛作為樣品，具有易采集，能夠實時監控等優點，彌補了常規豬肉、豬血等檢測技術的不足，是完善賽庚啶檢測技術的一大進步。

3 同時檢測可樂定和賽庚啶的方法

目前，已有的可樂定及賽庚啶含量檢測方法主要涉及的待測樣品有飼料、飲水、動物尿液、動物血液、畜產品及動物組織等。

3.1 飼料中可樂定及賽庚啶的測定

3.1.1 高效液相色譜法 吳建平等建立了適用于同時檢測飼料（包括預混飼料、濃縮飼料和配合飼料）中可樂定及賽庚啶違法添加的高效液相色譜法，該方法具有較高的精密度、準確度和特異性，并可初步定性。[1]

3.1.2 超高效液相色譜-串聯質譜法 李丹妮等利用超高效液相色譜-串聯質譜來檢測飼料中鹽酸可樂定和鹽酸賽庚啶的非法添加量。樣品經酸性甲醇提取，濃縮后用乙腈-0.2%甲酸溶解，經超高效液相色譜-串聯質譜在多反應檢測(MRM)模式下測定。結果顯示鹽酸可樂定和鹽酸賽庚啶在0.02～1.0 mg/kg添加水平下，加標回收率為70%～110%，相對標準偏差(RSD)均小于10%(n=6)；該方法對動物飼料中鹽酸可樂定和鹽酸賽庚啶的定量限為0.02 mg/kg(S/N＞10)，檢出限為0.01 mg/kg(S/N＞3)。

3.1.3 國家標準 農業部1486號公告-2-2010規定了采用液相色譜-串聯質譜的方法測定飼料中可樂定和賽庚啶，將飼料試樣經鹽酸甲醇混合溶液提取后，用混合型陽離子交換柱凈化，洗脫液蒸干后用含0.2%甲酸的乙腈水溶液溶解，采用液相色譜-串聯質譜儀進行檢測。該標準的檢測限為0.01 mg/kg，定量限為0.02 mg/kg。

3.2 畜產品中可樂定及賽庚啶的殘留測定

3.2.1 豬肉中可樂定及賽庚啶的殘留測定 將豬肉樣品用0.1 mol/L HCl酸化的甲醇(VCH3OH/VHCl=80∶20)提取，WCX固相萃取小柱凈化，利用超高效液相色譜-串聯質譜來測定含量。豬肉樣品中鹽酸可樂定和鹽酸賽庚啶的檢出限均為為0.2 μg/L，定量限均為0.6 μg/L，批內和批間的精密度均小于10%，回收率均在85%～100%。該方法的優點為操作簡單、檢出限和定量限低、試驗時間短、內標回收率高，提供了一種豬肉中可樂定和賽庚啶殘留量的檢測方法。

3.2.2 豬可食組織（豬肉、豬肝和豬腎）中可樂定及賽庚啶的殘留測定 應用QuEChERS技術進行前處理，利用超高效液相色譜-串聯質譜確定豬可食組織中可樂定和賽庚啶的殘留量，該方法能較好的凈化基質，試驗操作步驟簡便，檢測效率得到了大大的提升。對豬可食組織中可樂定和賽庚啶在添加濃度范圍為1～50 μg/kg內的回收率均在62%～121%之間，相對偏差小于10%，檢出限為0.5 μg/kg。[2]

3.3 其他部位中可樂定及賽庚啶的殘留測定

可樂定和賽庚啶等藥物進入到動物體內之后，會存在于動物的毛發、血液、尿液中，因此可將方便易取的動物毛發、血液、尿液等作為可樂定和賽庚啶的待檢樣品，從而及時排查食品安全隱患，保障食品安全，并可以用于生豬屠宰前的快速監控。

3.3.1 豬毛中可樂定及賽庚啶的殘留測定 檢測毛發中的藥物濃度可間接反映藥物在動物組織中的積累，且毛發易獲得，能夠作為測定可樂定及賽庚啶藥物殘留濃度的可靠待檢樣本。其中前處理的方法是利用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液溶解樣品，乙腈提取，液質聯用測定。該方法的優點是試驗操作簡便且快捷，檢出限和定量限低，內標回收率高。[3]

3.3.2 豬尿液中可樂定及賽庚啶的殘留測定 陳其煌建立了檢測尿液中可樂定和賽庚啶殘留量的高效液相色譜—串聯質譜法，待測樣品用高氯酸溶液酸解及沉淀蛋白質，用乙酸乙酯—異丙醇提取，經凈化、富集后，利用UPLC-MS/MS進行定性和定量分析。鹽酸可樂定和鹽酸賽庚啶在1.0～1 000 μg/L的范圍內線性關系良好（r≥0.999 5），在0.2 、2.0 、10.0 μg/L添加水平下的回收率為83.5%～95.1%，定量限（以信噪比＞10計）為0.2 μg/L。該方法的優點為樣品前處理步驟簡單，有機溶劑使用量少，檢出限和定量限低，精密度和準確度高，可實現宰前檢測，及時排除食品安全隱患，保障食品質量安全。[4]

3.3.3 豬血液中可樂定及賽庚啶的殘留測定 測定活體動物的血液可有效解決獸藥殘留檢測的時滯性問題。楊挺等采用了高效液相色譜-串聯質譜法測定豬血中的可樂定和賽庚啶的殘留量，二者的檢出限和定量限均分別為0.2 μg/L和0.6 μg/L，批內和批間的精密度均小于10%，回收率均在85%～110%之間。該方法簡便、快捷、檢出限低、回收率高。[5]

4 小結

隨著人們生活水平的提高，人們對食品安全問題越來越重視，其中獸藥的違規使用和非法添加嚴重威脅食品安全和消費者健康?？蓸范ê唾惛さ倪`法使用造成了新的食品安全問題，這就要求相應的監測機構必須要選擇合適的樣品種類及檢測方法，及時、準確、快速的檢測出可樂定和賽庚啶的非法添加，以保障食品安全。