嗜酸乳桿菌IMAU30067增殖培養(yǎng)基的研究

趙燕霞，王元弛，姚國強，趙潔，尤利軍，楊瑞冬，李伯海，孫天松

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品生物技術(shù)與工程教育部重點實驗室,農(nóng)業(yè)部奶制品加工重點實驗室,呼和浩特010018）

0 引 言

嗜酸乳桿菌（Lactobacillusacidophilus）屬革蘭氏陽性細(xì)菌，產(chǎn)生細(xì)菌素、有機酸和過氧化氫等多種天然抑菌物質(zhì)，具有調(diào)節(jié)腸道菌群、緩解乳糖不耐癥、增強機體免疫力、緩解過敏、降低膽固醇、改善呼吸道感染等作用[1-6]。研究發(fā)現(xiàn)在腸道菌群中，糖苷酶、葡萄糖醛酸酶、硝基還原酶的存在會把前致癌物激活成致癌物，而嗜酸乳桿菌能夠降低這些酶的水平[7]。嗜酸乳桿菌作為第三代酸奶發(fā)酵劑菌種，現(xiàn)已獲得美國食品藥物管理局和我國衛(wèi)生部批準(zhǔn),是可用于功能性食品中的益生菌種之一[8]。當(dāng)嗜酸乳桿菌的活菌數(shù)達到1×106CFU/mL時，能維持人體腸道中微生物的平衡[9]。

嗜酸乳桿菌在食品工業(yè)中有很多應(yīng)用，肉、奶、水果、蔬菜和谷物等天然食物可以分離出嗜酸乳桿菌。嗜酸乳桿菌可加工多種發(fā)酵乳制品,如酸乳飲料、酸奶酪、酸奶等。用嗜酸乳桿菌發(fā)酵雪菜、果蔬汁,可提高其營養(yǎng)價值,改善風(fēng)味,延長保存期。嗜酸乳桿菌發(fā)酵豆乳可以減少豆腥味和豆臭味,增加大豆異黃酮水平，同時保留植物蛋白原有的營養(yǎng)成分和保健功能[10-11]。嗜酸乳桿菌發(fā)酵牛乳，可以開發(fā)具有健康功效和不同風(fēng)味特征的嗜酸乳桿菌乳制品。

本研究采用單因素試驗、正交試驗、響應(yīng)面法對嗜酸乳桿菌IMAU30067的增菌培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件進行篩選和優(yōu)化，確定適合IMAU 30067菌體生長的增殖培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件，為后期高密度培養(yǎng)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗菌株

嗜酸乳桿菌IMAU30067分離自新疆傳統(tǒng)發(fā)酵酸馬奶，由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品生物技術(shù)與工程教育部重點實驗室乳酸菌菌種資源庫提供。

1.1.2 培養(yǎng)基

MRS液體培養(yǎng)基，參照文獻[12]配制。1.1.3 儀器與設(shè)備

SHIMADZU UV-1700型紫外可見分光光度計，日本島津株式會社分析儀器部；DG250型厭氧工作站Don Whitley Scientific；GUJS-5L×3全自動機械攪拌發(fā)酵罐，鎮(zhèn)江東方生物工程設(shè)備技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2 方法

1.2.1 菌種活化

取凍存IMAU 30067脫脂乳管接入MRS液體培養(yǎng)基中，37℃厭氧培養(yǎng)18 h，活化三代。

1.2.2 IMAU 30067菌體生長特性檢測

菌體密度測定：紫外可見分光光度計于600 nm波長下測發(fā)酵液的菌體密度。

活菌數(shù)測定：采用平板菌落計數(shù)法，37℃厭氧培養(yǎng)72 h。

1.2.3 IMAU 30067培養(yǎng)基成分優(yōu)化

在MRS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上選取葡萄糖、果糖、甘露糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、菊粉、低聚果糖、低聚半乳糖、水蘇糖、海藻糖等取代MRS中的碳源；選取大豆蛋白胨、小麥水解蛋白、牛肉膏、牛肝浸膏、牛肉蛋白胨、胰蛋白胨、魚蛋白胨、蛋白胨、酪蛋白胨、脫鹽乳清粉、脫脂乳粉、酵母浸粉、酵母蛋白胨等取代MRS中的氮源；根據(jù)菌體生長情況確定適宜的碳氮總量和碳氮比；在上述優(yōu)化好的碳氮源基礎(chǔ)上，選取檸檬酸鈉/乙酸鈉/K2HPO4、Na2HPO4/NaH2PO4、Na2HPO4/檸檬酸、Na2HPO4/KH2PO4、檸檬酸/檸檬酸鈉等緩沖鹽體系取代MRS中的緩沖鹽；以及添加不同的微量元素(Mg2+、Cu2+、Fe2+、Mn2+、Zn2+)、植物浸提物（馬鈴薯、山藥、香菇、番茄、豌豆、玉米、麥芽、胡蘿卜）、氨基酸（丙氨酸、精氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、絲氨酸、色氨酸、纈氨酸），分別以1×106CFU/mL的接種量于37℃厭氧培養(yǎng)18 h，根據(jù)菌體生長情況，確定促進嗜酸乳桿菌IMAU 30067生長的最佳培養(yǎng)基成分。

1.2.4 IMAU 30067培養(yǎng)基主成分比例優(yōu)化

IMAU 30067生長的主要影響因素包括碳源、氮源和緩沖鹽,對這三種成分進行中心組合設(shè)計和響應(yīng)面分析，確定IMAU30067培養(yǎng)基中主要成分的最優(yōu)配比。

1.2.5 IMAU 30067靜態(tài)培養(yǎng)條件優(yōu)化

采用正交試驗研究不同溫度、初始pH和接種量對IMAU30067生長情況的影響，確定最佳靜態(tài)培養(yǎng)條件。

1.2.6 發(fā)酵罐小試發(fā)酵

將IMAU 30067在5L全自動發(fā)酵罐中進行小試發(fā)酵試驗，對優(yōu)化后的培養(yǎng)基成分及靜態(tài)培養(yǎng)條件進行驗證，同時為后期高密度培養(yǎng)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 IMAU 30067培養(yǎng)基成分優(yōu)化結(jié)果

2.1.1 碳源優(yōu)化結(jié)果

在MRS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上根據(jù)伯杰細(xì)菌手冊中乳桿菌屬內(nèi)種的碳水化合物反應(yīng)選取IMAU 30067能利用的11種碳源進行菌體密度的測定。

表1 不同碳源對嗜酸乳桿菌IMAU30067菌體密度的影響(n=4,x±D)

從表1可知IMAU 30067對葡萄糖、麥芽糖、海藻糖的利用能力最強，但三者之間無顯著性差異(P＞0.05)，故進行復(fù)配實驗，正交設(shè)計結(jié)果見表2。

從表2看出三因素的極差值為RA＞RB＞RC，三種碳源物質(zhì)對于IMAU 30067生長影響的主次關(guān)系為：葡萄糖＞麥芽糖＞海藻糖，三種碳源物質(zhì)的最優(yōu)配比為A2B3C1，即葡萄糖0.75%、麥芽糖0.75%、海藻糖0.5%。優(yōu)化碳源后其活菌數(shù)可達8.850×107CFU/mL。

2.1.2 氮源優(yōu)化結(jié)果

蛋白胨中含有蛋白質(zhì)、自由氨基酸、多肽、糖類、脂肪和生長因子，能更好的促進嗜酸乳桿菌的生長。根據(jù)成本低廉和具有工業(yè)化生產(chǎn)潛力的原則選取13種氮源進行菌體密度的測定。

從表3可知，魚蛋白胨和大豆蛋白胨為氮源時，IMAU 30067菌體密度顯著高于其他氮源(P＜0.05)，但二者之間無顯著性差異。復(fù)合氮源比單一氮源更能促進嗜酸乳桿菌的生長，故設(shè)計復(fù)配試驗，結(jié)果見表4。

由表4可知，當(dāng)大豆蛋白胨和魚蛋白胨的復(fù)配比為1∶3時，IMAU 30067對兩種氮源的利用率最強，且與其他復(fù)配比相比有顯著差異(P＜0.05),其活菌數(shù)可達1.15×108CFU/mL。

表2 碳源L9（34）正交試驗

表3 不同氮源對嗜酸乳桿菌IMAU30067菌體密度的影響(n=4,x±D)

表4 不同氮源復(fù)配比對嗜酸乳桿菌IMAU30067的影響(n=4,x±D)

2.1.3 碳氮總量及碳氮比優(yōu)化結(jié)果

碳氮比對菌株生長有重要作用，直接影響其生長和發(fā)酵產(chǎn)物的積累。碳氮比過高時，會影響菌體的增殖，增加表多糖的產(chǎn)生[13-14]。有報道表明碳氮比在0.5～2.0時，菌體生長情況良好[15]。

圖1 不同碳氮總量及比例對嗜酸乳桿菌IMAU30067菌體密度的影響

由圖1可知，IMAU 30067在碳氮比為2∶1的培養(yǎng)基中生長狀況較好，這種現(xiàn)象在不同碳氮總量的情況下均出現(xiàn)。IMAU30067在碳氮總量由3%增長到12%的過程中，菌體密度相應(yīng)增加，并在12%之后隨著碳氮總量的增加菌體密度下降。故選擇最優(yōu)碳氮總量12%、碳氮比2∶1。此時活菌數(shù)可達2.29×108CFU/mL。

2.1.4 緩沖鹽優(yōu)化結(jié)果

乳酸菌在生長過程中代謝糖產(chǎn)生乳酸，使乳酸菌生長過程中培養(yǎng)液的pH值不斷降低，酸性增強，從而抑制乳酸菌的生長，使菌體易受到損傷甚至死亡。培養(yǎng)基中添加適量的緩沖鹽中和培養(yǎng)液中的酸性物質(zhì)，緩減菌液pH下降的速率。同時，緩沖鹽中一些離子可參與菌體細(xì)胞的合成代謝活動，調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透壓平衡，促進菌體生長。

圖2 嗜酸乳桿菌IMAU30067在不同緩沖鹽體系下的菌體密度(n=4,x±D)

由圖2可知，分別添加檸檬酸鈉/乙酸鈉/K2HPO4、Na2HPO4/NaH2PO4、Na2HPO4/檸 檬 酸、Na2HPO4/KH2PO4這四對緩沖對時，均會不同程度的促進IMAU30067生長，其中添加0.06 mol/L的檸檬酸鈉/乙酸鈉/K2HPO4菌體密度最高，對菌株生長有明顯的促進作用。因此將0.06 mol/L的檸檬酸鈉/乙酸鈉/K2HPO4作為IMAU 30067增殖培養(yǎng)基的緩沖鹽，優(yōu)化緩沖鹽后菌體活菌數(shù)可達2.73×108CFU/mL。

2.1.5 微量元素優(yōu)化結(jié)果

Fe、Mg、Cu、Mn、Zn等微量元素作為酶的激活劑或生物活性物質(zhì)的組成成分是微生物生長繁殖過程中不可缺少的。由圖3可知，添加0.8 g/L的MgSO4·7H2O對菌體的促生長作用最明顯。鎂離子是生物體內(nèi)多種新陳代謝活動所必須的陽離子。Mg2+可加速細(xì)胞的代謝活動，同時加速降解蛋白質(zhì)這類不能直接利用的有機大分子。在菌體增殖過程中，物質(zhì)透過細(xì)胞膜運輸以及生物合成均需要消耗ATP，ATP的合成對乳酸菌的生長至關(guān)重要，而適當(dāng)濃度的Mg2+可以促進ATP的生成[16]。因此，實驗最終選用0.8 g/L的MgSO4·7H2O。

圖3 微量元素對嗜酸乳桿菌IMAU30067菌體密度的影響

2.1.6 植物提取物優(yōu)化結(jié)果

植物提取物中含有一些乳酸菌生長繁殖所需的基本營養(yǎng)物，例如礦物質(zhì)、維生素、抗氧化劑和膳食纖維，能滿足乳酸菌對營養(yǎng)的需求，可促進其生長[17]。天然果蔬在研磨糊化或榨汁調(diào)配的過程中會導(dǎo)致營養(yǎng)成分的丟失，同時使培養(yǎng)基配制步驟增加，操作繁瑣，不適合工業(yè)化生產(chǎn)[18]。而植物提取物以植物為原料，經(jīng)過物理化學(xué)的提取分離，定向獲取和濃集植物中的有效成分，不改變其有效成分結(jié)構(gòu)的一類物質(zhì)。天然產(chǎn)物中提取出的植物提取物具有抗氧化和清除自由基活性物質(zhì)的特點。

圖4 植物提取物對嗜酸乳桿菌IMAU30067菌體密度的影響

由圖4可知，8種植物提取物均可不同程度的促進嗜酸乳桿菌的生長，當(dāng)提取物的濃度為0.6%時，菌體密度均達到最高。植物提取物的濃度過高或過低都會抑制嗜酸乳桿菌IMAU 30067的生長，從而使其活菌數(shù)降低[19]。高濃度的玉米和麥芽提取物會抑制IMAU 30067的生長。由于馬鈴薯的促生長明顯高于其他植物提取物且濃度在0.6%時菌體密度最高，因此選取0.6%的馬鈴薯提取物作為IMAU 30067的天然促生長因子。此時菌體的活菌數(shù)可達2.97×108CFU/mL。

2.1.7 氨基酸優(yōu)化結(jié)果

乳酸菌菌體細(xì)胞內(nèi)缺乏各種生物合成系統(tǒng)，需要依賴生長環(huán)境供應(yīng)某些氨基酸。

表5 氨基酸對嗜酸乳桿菌IMAU30067菌體密度的影響(n=4,x±D)

表5反映了IMAU 30067對13種氨基酸的利用情況，與空白對照相比，添加0.1g/L、0.3g/L、0.5g/L的組氨酸、絲氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸、色氨酸、異亮氨酸均有增菌效果，其中添加0.1g/L的組氨酸增菌效果最顯著（P＜0.05），菌體密度為9.347。添加丙氨酸、精氨酸、亮氨酸、纈氨酸對嗜酸乳桿菌有抑制作用。王磊等[20]研究發(fā)現(xiàn)蛋氨酸對嗜酸乳桿菌有促進作用，丙氨酸、纈氨酸對嗜酸乳桿菌有抑制作用。乳酸菌在含有氨基酸的培養(yǎng)基中生長可從中吸收相容性物質(zhì)，這些相容性物質(zhì)加強水分子與細(xì)胞內(nèi)生物大分子物質(zhì)的親和性，維持蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和酶活性從而提高菌株的生存能力[21-22]。白鳳翎等[23]研究表明在嗜酸乳桿菌增殖培養(yǎng)基中添加氨基酸可以提高氮源利用率。根據(jù)菌體密度可知，0.1g/L的組氨酸對嗜酸乳桿菌IMAU 30067的促生長作用最明顯，優(yōu)化氨基酸后的菌體活菌數(shù)可達3.27×108CFU/mL。

2.2 響應(yīng)面法(RSM)優(yōu)化結(jié)果

響應(yīng)面法(RSM)能快速、有效的對主要影響因子進行優(yōu)化與評價,確定各因子水平的最佳組合和響應(yīng)面的最優(yōu)值。目前,響應(yīng)面法已被廣泛用于培養(yǎng)基成分、發(fā)酵條件的相關(guān)研究[24-26]。中心組合設(shè)計和響應(yīng)面分析相結(jié)合可以確定最優(yōu)實驗條件[27]。

實驗以菌體密度為評價指標(biāo)，依據(jù)旋轉(zhuǎn)中心組合設(shè)計添加至優(yōu)化后的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，具體設(shè)計及結(jié)果見表6。

實驗采用Design Expert 8.0軟件響應(yīng)面分析程序進行二次多項回歸擬合，獲得3種關(guān)鍵生長因子與菌體的二次多項式回歸模型方程：

表6 旋轉(zhuǎn)中心組合設(shè)計及結(jié)果

OD=10.64+0.33A+1.35B+0.55C+0.065AB+0.05AC-0.38BC-1.19A2-1.77B2-1.49C2

各項方差分析結(jié)果如表7所示。

表7 二次多項式模型的系數(shù)及其方差分析

對二次模型進行方差分析，結(jié)果顯示二次項A2、B2、C2以及交叉項BC對嗜酸乳桿菌IMAU 30067菌體密度有顯著影響(p＜0.01)。整體模型顯著(p＜0.01)，失擬項的P值為0.5093＞0.05，可知失擬項不顯著。該模型的系數(shù)R2=0.9996，Radj2=0.9993,表明響應(yīng)面的99.93%的變化可以由此模型解釋，模型與實驗的擬合度較高，可用于嗜酸乳桿菌IMAU 30067的生長增值情況預(yù)測。

圖5 各因素交互作用響應(yīng)面圖以及相應(yīng)的等高線圖

由二次多項方程得到的響應(yīng)面的二維等高線和三維立體圖如圖5所示，等高線圖的圓心越接近橢圓表示交互作用越強，等高線的稀疏表示響應(yīng)面圖形的平陡。對采用響應(yīng)面法得到的最終培養(yǎng)基中碳源80.00 g/L、氮源40.00 g/L、緩沖鹽10.32 g/L，模型預(yù)測最大菌體密度為10.73。采用上述最優(yōu)添加量培養(yǎng)IMAU 30067，37℃培養(yǎng)18 h，IMAU 30067實際菌體密度為10.64，可見該模型能夠較好的預(yù)測嗜酸乳桿菌IMAU 30067的菌體生長情況。

2.3 靜態(tài)培養(yǎng)條件優(yōu)化結(jié)果

在培養(yǎng)基成分優(yōu)化后，采用正交試驗確定嗜酸乳桿菌IMAU30067的靜態(tài)培養(yǎng)條件（溫度、pH、接種量）。結(jié)果如表8所示。

實驗結(jié)果見表8，通過對三個因素的極差分析，靜態(tài)培養(yǎng)條件對嗜酸乳桿菌的影響順序為：A(溫度)＞B(p H值)＞C(接種量)，最佳的增菌培養(yǎng)基配方為A2B3C1，即嗜酸乳桿菌最優(yōu)靜態(tài)培養(yǎng)條件為：溫度為37℃，pH 6.5，接種量1×106CFU/mL。在此條件下進行靜態(tài)培養(yǎng)，嗜酸乳桿菌經(jīng)37℃靜置培養(yǎng)18 h后進行平板計數(shù)，活菌數(shù)達到3.85×108CFU/mL。

2.4 5L發(fā)酵罐發(fā)酵試驗結(jié)果

乳酸菌高密度培養(yǎng)過程中不適當(dāng)?shù)膒H會抑制菌體某些酶活性使菌體的新陳代謝受阻，需要確定合適的恒p H來延長菌體的對數(shù)生長期、減輕過酸對菌體的抑制、提高菌體密度從而增加菌泥產(chǎn)量。

Kang等[28]研究表明，pH 5.0-6.0時利于菌體的生長。由表9可知，通過選擇不同的恒pH值，記錄菌體密度、發(fā)酵耗堿量、發(fā)酵時間以及活菌數(shù)的變化，當(dāng)恒p H為5.0時菌體密度、活菌數(shù)最高有利于增加菌泥的產(chǎn)量,同時發(fā)酵耗堿量最低可以降低成本。恒pH為6.0時發(fā)酵時間最短，但其活菌數(shù)太低會導(dǎo)致產(chǎn)量降低，綜合考慮，最佳恒pH值為5.0。

表8 靜態(tài)培養(yǎng)條件L9（34）正交試驗

表9 發(fā)酵pH值對嗜酸乳桿菌IMAU30067的影響

圖6 不同培養(yǎng)類型對嗜酸乳桿菌IMAU30067活菌數(shù)及菌體密度的影響

由圖6可知，分別在MRS培養(yǎng)基、靜態(tài)優(yōu)化培養(yǎng)基以及優(yōu)化培養(yǎng)基的發(fā)酵罐小試中培養(yǎng)嗜酸乳桿菌IMAU30067，菌體在5L發(fā)酵罐中生長的菌體密度和活菌數(shù)是極顯著的(P＜0.01)，其活菌數(shù)為3.72×109CFU/mL是靜態(tài)優(yōu)化培養(yǎng)基的9.6倍，是MRS培養(yǎng)基的82.6倍。

近年來，含有嗜酸乳桿菌的乳制品深受消費者的歡迎，進而掀起國內(nèi)外研究學(xué)者對嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基增菌研究的熱潮，增菌過程中所采取的試驗方法也多種多樣。施大林[29]等采用正交試驗優(yōu)化嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基，其主成分為蔗糖2.0%、蛋白胨1.5%、酵母膏0.5%，活菌數(shù)可達9.3×108CFU/mL。熊濤[30]等通過中心組合試驗，確定影響嗜酸乳桿菌生長的三個主成分為乳糖1.766%、番茄汁31.602%、牛肉膏1.458%，最終活菌數(shù)可達2.88×109CFU/mL，乳糖濃度過高會產(chǎn)生大量乳酸，抑制菌體的生長，而番茄汁的需求量太大、制作過程中會損失營養(yǎng)成分同時會增加成本，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。Lee等[31]利用響應(yīng)面法確定嗜酸乳桿菌的培養(yǎng)基的主成分配方為乳糖17.7 g/L，酵母提取物18.6 g/L，CaCl20.9 g/L，活菌數(shù)可達9.33 Log CFU/mL，其中CaCl2對菌體生長的影響最大，CaCl2能夠改變菌體細(xì)胞壁的通透性，同時也是許多種酶的激活劑。Pedram等[32]通過Box-Behnken試驗對嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基主要成分葡萄糖，酵母提取物，KH2PO4進行優(yōu)化，4%的酵母提取物對菌體生長的影響最大，實際生產(chǎn)中酵母提取物的開發(fā)過程復(fù)雜，不適合工業(yè)化應(yīng)用。Chen等[33]通過Plackett-Burman和最陡爬坡試驗使嗜酸乳桿菌活菌數(shù)達到2.72×109CFU/mL，Plackett-Burman和最陡上坡試驗可提高培養(yǎng)基優(yōu)化的準(zhǔn)確性。Meena等[34]在嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌混合優(yōu)化培養(yǎng)中采用人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)技術(shù)（ANN）、遺傳算法（GA）構(gòu)建系統(tǒng)模型，確定6個影響最大的因子最大值和最小值并進行組合,優(yōu)化結(jié)果為碳源42.31%、氮源14.20%、培養(yǎng)時間30 h、培養(yǎng)溫度38℃、pH6.5、接種量1.6%，同時Meena在試驗中驗證人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)技術(shù)（ANN）和遺傳算法（GA）兩者結(jié)合應(yīng)用更靈敏、更精準(zhǔn)。本試驗獲得的配方中含氮源4%、碳源8%，碳氮含量較合理，培養(yǎng)基成本低，同時選取的馬鈴薯提取物是經(jīng)過物理化學(xué)的提取分離，濃集馬鈴薯中的有效成分，適合工業(yè)化應(yīng)用。本試驗采用中心組合設(shè)計和響應(yīng)面分析相結(jié)合的方法，快速有效的確定了主成份的最優(yōu)含量。綜合上述結(jié)論，嗜酸乳桿菌IMAU 30067的增殖培養(yǎng)基工藝可以為后期高密度培養(yǎng)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

3 結(jié) 論

實驗通過單因素試驗、正交試驗和響應(yīng)面法確定嗜酸乳桿菌IMAU30067的最優(yōu)配方為：葡萄糖30.00 g/L、麥芽糖30.00 g/L、海藻糖20.00 g/L、魚蛋白胨30.00 g/L、大豆蛋白胨10.00 g/L，檸檬酸鈉2.29 g/L、乙酸鈉5.74 g/L、K2HPO42.29 g/L、MgSO4·7H2O 0.80 g/L、馬鈴薯提取物6.00 g/L、組氨酸0.10 g/L。嗜酸乳桿菌IMAU 30067最佳培養(yǎng)條件為：接種量1×106CFU/mL、初始pH值6.5，于37℃恒pH 5.0厭氧培養(yǎng)，優(yōu)化后其活菌數(shù)達3.85×108CFU/mL。利用優(yōu)化好的培養(yǎng)基進行5 L發(fā)酵罐小試試驗，發(fā)酵液活菌數(shù)可達3.72×109CFU/mL，是靜態(tài)優(yōu)化培養(yǎng)基的9.6倍，是MRS培養(yǎng)基的82.6倍(優(yōu)化前MRS活菌數(shù)為4.50×107CFU/mL)。試驗中培養(yǎng)基所選成分成本低、碳氮源均采用復(fù)配從而營養(yǎng)成分豐富、活菌數(shù)多，同時操作工藝簡單具有工業(yè)化生產(chǎn)潛力。