醋酸阿托西班制備工藝的研究

高巍巍

摘? 要：醋酸阿托西班制備工藝的深入研究，一方面能夠在原有藥品基礎(chǔ)上進(jìn)行純化，使藥品制備的質(zhì)量得以保障;另一方面，憑借制備工藝的不斷精簡(jiǎn)，更便于降低藥品制備難度，使藥品制備質(zhì)量與效率得以顯著提升。本文基于醋酸阿托西班制備工藝展開分析，在明確工藝優(yōu)化措施同時(shí)，期望為后續(xù)藥品制備提供良好參照。

關(guān)鍵詞：醋酸阿托西班;藥品制備;工藝分析

醋酸阿托西班是現(xiàn)階段臨床醫(yī)療治療早產(chǎn)所使用的藥物。在藥物使用過程中，能夠憑借縮宮素受體的結(jié)合，阻止縮宮素在靶細(xì)胞的作用，由此預(yù)防孕婦早產(chǎn)。而基于近些年藥品服用安全性要求，阿托西班藥物在制備工藝方面已經(jīng)難以滿足現(xiàn)代臨床醫(yī)療要求，為此必須找尋出有效的工藝制備方法，才能確保藥品仍具備銷售市場(chǎng)。

1 試驗(yàn)儀器與材料

儀器：固相合成反應(yīng)柱、精密電子天平、循環(huán)水真空泵、真空干燥箱、液相分析儀、液相分析色譜柱、多肽合成儀。

材料：不同替代度的Rink AM樹脂、阿托西班制劑對(duì)照品、三氟乙酸、三異丙基硅烷、苯甲硫醚、苯酚、乙二硫醇、二異丙基乙胺、醋酸酐、二甲基亞砜、過氧化氫、乙醚、超純水、冰乙醚與二氯甲烷。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 阿托西班合成方法選擇

（1）樹脂材料類型的選擇：根據(jù)藥品以往制備工藝可知，通過2-氯三苯甲基氯樹脂可有選擇性的切斷肽鏈片段，而后在液相中將肽鏈羧酸酰胺化，以便使原有肽鏈保護(hù)基脫離，得到目標(biāo)鈦元素，使阿托西班藥品合成質(zhì)量得以保障。另外，也可以在氨基類樹脂合成時(shí)，直接切割得到肽酰胺，以此直接應(yīng)用于藥品的工業(yè)生產(chǎn)中。站在工藝制備難度與效率性角度，本次試驗(yàn)主要選擇氨基類樹脂切割的方法，以便阿托西班藥品制備工藝更具研究?jī)r(jià)值。

（2）樹脂替代度的選擇：在樹脂替代度分析期間，需根據(jù)不同樹脂類型肽鏈的長(zhǎng)短判斷合適范圍，以便阿托西班藥品制備質(zhì)量與水準(zhǔn)得以保障。期間，因阿托西班為九肽化合物，因此肽鏈長(zhǎng)度較短，在選擇樹脂替代度參數(shù)時(shí)，則需要按照逐步偶聯(lián)的方式制備阿托西班肽樹脂材料，以便通過裂解得到更好的藥品參數(shù)，使肽樹脂的增重率、線性關(guān)系、回收率得以保障，以此分辨樹脂替代度的適宜性。

2.2 氨基酸投料比分析

根據(jù)以往文獻(xiàn)報(bào)道的多為2～5倍的投料量，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了氨基酸投料比分別為2.0、3.0、4.0、5.0eq.4個(gè)水平的平行實(shí)驗(yàn)。通過逐步偶聯(lián)得到阿托西班肽樹脂，再裂解得到阿托西班線形肽，考察肽樹脂增重率、固體線性肽收率及粗肽純度等指標(biāo)，來確定最優(yōu)的投料比。根據(jù)投料試驗(yàn)可知，2.0、3.0倍氨基酸投料比，肽樹脂增重率，線型肽收率及粗肽純度均較低，而4.0、5.0倍氨基酸投料結(jié)果無明顯差異且較高，結(jié)合成本因素，本研究選擇4.0倍的氨基酸投料比。

2.3 激活劑材料的選擇

多肽合成中的激活劑大多數(shù)是通過活化羧基完成肽鍵縮合反應(yīng)，目前可用于肽鍵縮合的試劑和縮合方法較多，常見的有?；B氮物法、酸酐法、碳二亞胺法、活化酯法、磷鎓鹽試劑法、脲鎓鹽試劑法等。這些縮合方法及縮合試劑均具有各自的特點(diǎn)，綜合成本、激活效率、安全因素等考慮，本研究采用TBTU/HOBt組合來作為主要的激活劑。

2.4 溫度與反應(yīng)時(shí)間選擇

多肽縮合反應(yīng)為較溫和的化學(xué)反應(yīng)，對(duì)溫度要求并不苛刻，通常的潔凈區(qū)的18～26℃溫度范圍內(nèi)均是較適宜的反應(yīng)溫度;在此溫度范圍內(nèi)，每個(gè)氨基酸偶聯(lián)的時(shí)間可以通過經(jīng)典的游離氨基檢測(cè)方法--茚三酮檢驗(yàn)法來確定偶聯(lián)反應(yīng)終點(diǎn)，此方法的靈敏度及準(zhǔn)確度已經(jīng)得到研究者一致認(rèn)可。

2.5 裂化捕獲劑的選擇

肽鏈組裝完畢后需要用強(qiáng)酸[Fmoc/tBu化學(xué)通常選用三氟乙酸作為酸切割劑]將肽鏈從樹脂上釋放出來，在切割肽的同時(shí)側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)也會(huì)被脫除，這時(shí)需要捕獲劑來捕獲側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)形成的正碳離子等活性離子，以避免其再次與多肽氨基酸殘基的活性側(cè)鏈基團(tuán)結(jié)合生成副產(chǎn)物，根據(jù)Fmoc/tbu策略選擇的氨基酸側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)主要有三苯甲基、叔丁基、叔丁氧羰基3種，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，常用乙二硫醇和水作為捕獲劑，因此選擇EDT和水作為捕獲劑。

2.6 藥品環(huán)化方法的選擇

根據(jù)以往藥品制備資料可知，阿托西班藥品結(jié)構(gòu)內(nèi)含有二硫鍵，此藥品鍵位形成主要是通過游離的單巰基氧化所得。而在氧化方法選擇時(shí)，則可通過載體劃分為固相與液相環(huán)化法兩種，期間環(huán)化法在選擇時(shí)需考慮到氧化劑、環(huán)化濃度與pH值等極易影響藥品制備質(zhì)量因素，以便阿托西班藥品制備水準(zhǔn)得以顯著提升。

本試驗(yàn)設(shè)計(jì)了用碘作為氧化劑的固相環(huán)化和液相環(huán)化兩種方法，其中液相環(huán)化又設(shè)計(jì)了線型肽溶解濃度分別為0.5、1、5mmol/L三個(gè)水平的平行環(huán)化實(shí)驗(yàn)，所使用的肽樹脂合成方法參見表1，環(huán)化實(shí)驗(yàn)條件參見表2，通過比較環(huán)化粗肽純度來選擇最佳的方法或濃度。

2.7 阿托西班制備步驟

（1）樹脂材料的制備。試驗(yàn)以標(biāo)準(zhǔn)樹脂材料為主要試驗(yàn)載體，確保溶液濃度貼合藥品標(biāo)準(zhǔn)要求，并提供二甲基甲酰胺溶脹30min，再清洗樹脂材料兩次，確保每次保持在2～5min，才能將PIPE/DMF混合溶液加入樹脂融溶液內(nèi)部，確保反應(yīng)時(shí)間滿足15min，在通過二甲基酰胺溶液洗滌數(shù)值材料，并對(duì)抽干材料內(nèi)水分。在制備氨基酸偶聯(lián)溶液過程中，需按照標(biāo)準(zhǔn)要求以4倍的投料比制得溶液，并加入甘氨酸與1-羥基苯并三唑，通過二甲基甲酰胺溶液溶解并混合，直至溶液澄清在緩慢加入TBTU，充分融合再導(dǎo)入盛有樹脂材料的反應(yīng)容器內(nèi)，確保偶聯(lián)反應(yīng)2h，再取少量洗滌劑進(jìn)行監(jiān)測(cè)，若樹脂溶液不顯色則說明反應(yīng)完全。（2）線性肽環(huán)化措施。在線性肽環(huán)化過程中，需在材料中加入醋酸水溶液，并借由乙醇溶液滴加至肽反應(yīng)溶液內(nèi)1h，通過高效液相色譜儀監(jiān)測(cè)環(huán)化進(jìn)程，確保環(huán)化終點(diǎn)后可氧化制得樹脂藥品。（3）樹脂材料的裂解。在藥品制備期間，應(yīng)分組配置溶液密度不同的裂解液，而后分別在冷浴環(huán)境下加入樹脂材料中，待加入完畢再逐漸升溫抵達(dá)至室溫，期間反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)2.5h，而后在經(jīng)由TFA溶液洗滌與過濾樹脂，將濾液濃縮并除去三氟醋酸，再加入乙醚溶液，進(jìn)行沉淀、離心，收集沉淀后真空干燥，以此得到樹脂樣品，經(jīng)回收率檢測(cè)數(shù)值為106.83%，環(huán)肽藥品純度則為88.23%。

3 制備工藝結(jié)論分析

多肽固相合成反復(fù)添加氨基酸的制備過程盡管看似簡(jiǎn)單，并且有效降低了產(chǎn)品步驟之間的提純難度，但在中間體純化方面仍存在較大的技術(shù)難題，無法進(jìn)一步優(yōu)化藥品的制備質(zhì)量、因此在阿托西班藥品制備期間，必須嚴(yán)格控制樹脂材料類型、替代度、氨基酸投料比、激活劑品類、環(huán)化法、捕獲劑與反應(yīng)環(huán)境，確保樹脂合成步驟與影響元素較低并且藥品產(chǎn)率比較傳統(tǒng)制備方法有顯著提升，才能確保醋酸阿托西班制備效率與純度得到顯著提升。

4 結(jié)束語

醋酸阿托西班制備工藝的深入研究，不但能夠?yàn)楹罄m(xù)藥品工業(yè)生產(chǎn)提供更好的指引，同時(shí)更能夠增強(qiáng)藥品制備的效率與質(zhì)量。故而，在論述醋酸阿托西班制備工藝期間，必須明確以往制備工藝潛在問題，并提供詳細(xì)的技術(shù)補(bǔ)償措施，才能為后續(xù)藥品制備提供良好保障。

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