hAPOB的克隆、原核表達及抗體效價分析

徐志偉，王 期，徐一然，陳永霞，徐小波，于建寧*

(1.江蘇丘陵地區鎮江農業科學研究所，江蘇 句容 212400；2.南京師范大學生命科學學院 江蘇 南京 210023；3.江蘇大學土木工程與力學學院，江蘇 鎮江 212013；4.江蘇省句容市動物疫病預防控制中心，江蘇 句容 212400；5.江蘇省農業科學院畜牧研究所，江蘇 南京 210014)

【研究意義】載脂蛋白(APOlipoprotein，APO)是指來源于血漿脂蛋白中的蛋白部分[1]，APO既是脂蛋白的構成組分，又具有穩定脂蛋白的功能，同時能通過修飾與脂代謝有關的酶活性影響脂肪代謝[2-4]。人載脂蛋白B(hAPOB)在人體脂蛋白代謝中具有重要的生理功能，APOB是低密度脂蛋白(LDL)膽固醇的主要結構蛋白，能夠識別LDL受體，參與LDL代謝過程[5-8]，由此可見，hAPOB對人體保持體內恒定的血脂水平和介導體內脂類代謝必不可少。基于hAPOB在人體中的重要功能，檢測hAPOB對于診斷急性冠狀動脈綜合癥、糖尿病等心血管疾病以及后期臨床治療等方面具有重要的醫療應用價值[9-10]。【前人研究進展】在動物生物技術中，免疫血清制備是一項常用的技術。通過制備高效價、高特異性的免疫血清可以為免疫學診斷提供試劑，亦可用于醫學上特異性免疫治療或者相關醫療研究。要制備免疫血清，抗原是第一位，抗原的純度、質量好壞直接關系到免疫血清的效價與特異性；另一方面，由于采用大動物生產免疫血清需要的抗原量較大，目前多采用商業化的抗原，成本較高。因此通過免疫大動物獲得免疫血清時，如何在提高抗體效價的同時降低抗原成本，是拓寬免疫血清應用的主要限制因素之一。……