辣木籽茶的制備工藝研究

1.中國科學院西雙版納熱帶植物園，云南 西雙版納 666100 ；2.云南中醫學院，云南 昆明 650500

辣木 (Moringaoleifera) 為辣木科辣木屬多年生木本植物，原產于熱帶、南亞熱帶的干旱或半干旱地區?，F在，世界上大約有 30 多個國家開展辣木引種栽培，中國的廣東、廣西、海南、四川和云南等省份分別從印度、緬甸等國家引進辣木種子或者栽培技術，興起了辣木的規?；N植的熱潮，目前初步形成了一定數量的辣木原料種植基地[1]。辣木籽作為純天然綠色食品，營養物質含量非常豐富，食用辣木籽可預防疾病、延緩衰老、改善睡眠、增強免疫力和記憶力[2]。經初步分析，辣木籽中含有黃酮類化合物。黃酮類化合物的生理活性比較廣泛，具有清除自由基、抗氧化、抗癌、防癌、治療心血管病、降血糖等作用。近年來對辣木的開發已成熱點，但從辣木籽中提取黃酮類化合物的研究鮮有報道[3]。

包合技術是指一種分子包合于另一種分子的空穴結構內形成包合物的技術。這種包合物由主分子和客分子組成，主分子具有較大空穴結構，它將客分子容納在空穴中形成分子囊。其主要作用歸結如下：增加藥物的穩定性；增加藥物溶解度；減少刺激和毒副作用；調節釋藥速度；提高藥物生物利用度；用于有效成分含量測定[4]。本研究以辣木籽為原料，經水提、醇提后，將辣木籽乙醇提的浸膏制備成包合物，加入輔料，擠壓制備出辣木籽茶，不僅掩蓋原辣木籽不良氣味，更使辣木籽茶湯色透亮、口感較佳。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-1800型紫外可見分光光度計(上海翱藝儀器有限公司)；FA2014電子分析天平(上海舜宇恒平科學儀器有限公司)；JA-20001電子天平(廣州玉治儀器有限公司)；DLSB-5/10低溫冷卻液循環泵(鞏義市予華儀器有限責任公司)；SG250HPT超聲波清洗器(上海冠特超聲儀器有限公司)；HH-4數顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)；BCD-186KB冰箱(青島海爾股份有限公司)；電熱鼓風干燥箱(北京市光明醫療儀器廠)；JBZ-300型多功能微丸包衣造粒機(中國.遼寧醫聯新藥技術研究所)。

1.2 材料 辣木籽(經云南中醫學院鑒定教研室楊竹雅副教授鑒定)為辣木科(Moringa-ceae) 辣木屬( Moringa Adans) 植物辣木的種子；β-環糊精、乙基纖維素(EC)、微晶纖維素(MCC)、淀粉、聚維酮(PVP)、聚乙二醇6000均為藥用輔料(安徽山河藥用輔料股份有限公司)；醫用酒精(廣東華光科技股份有限)；蘆丁對照品(批號：PRF8012042，成都普瑞法科技開發有限公司)；純凈水(昆明娃哈哈啟力飲料有限公司)。

2 方法

2.1 總黃酮含量的測定

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取蘆丁對照品6 mg,用少量60%乙醇溶解，再定容至25 mL，充分搖勻，備用。

2.1.2 標準曲線的制備 分別取蘆丁對照品溶液0、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50于25 mL容量瓶中，各加5%NaNO2溶液1 mL，放置6 min后，加10%A1( NO3)3溶液1 mL，放置6 min，加4%NaOH溶液10 mL，用60%乙醇溶液定容至刻度，搖勻。以不加對照溶液的相應溶液為空白，在510 nm處測定吸光度[8-9]，繪制標準曲線。

2.1.3 辣木籽總黃酮含量測定 將辣木籽原藥材粉碎，精密稱取5 g置于500 mL圓底燒瓶中，加40 mL60%乙醇回流提取2h,收集濾液，濾渣加入30 mL60%乙醇回流提取1h，合并兩次濾液于100 mL容量瓶中，濾渣用60%乙醇洗滌3次，定容。精密量取5 mL溶液按2.1.2項下顯色方法進行顯色，測定藥材中的總黃酮含量。

2.1.4 辣木籽醇提浸膏總黃酮含量測定 精密稱取0.5 g醇提浸膏于25 mL容量瓶中，加入適量60%乙醇，超聲30 min，用60%乙醇定容至刻度。濾過，取續濾液即供試品溶液，備用。按2.1.2項下顯色方法進行顯色，測定各浸膏中總黃酮的含量。

2.1.5 辣木籽醇提浸膏包合物中總黃酮含量測定 精密稱取0.5 g β-環糊精于25 mL容量瓶中，加入適量60%乙醇，超聲30 min，用60%乙醇定容至刻度。濾過，取續濾液按2.1.2項下顯色方法進行顯色，置200～800 nm波長下掃描。

精密稱取辣木籽醇提浸膏包合物0.5 g于25 mL容量瓶中,加入無水乙醇適量，超聲30 min，用60%乙醇定容至刻度，濾過；精密量取續濾液5 mL溶液按2.1.2項下顯色方法進行顯色，測定辣木籽醇提浸膏包合物的總黃酮含量，并按包合率計算方法計算黃酮包合率。

包合率(%)=(辣木籽包合物質量×包合物中的總黃酮含量)/(辣木籽黃酮浸膏質量×浸膏中總黃酮含量)×100%

2.1.6 辣木籽茶中總黃酮累積釋放量測定 精密稱取適量辣木籽茶，按照傳統泡茶方法，加入100 mL沸水沖泡15 min，過濾，濾渣按上述操作繼續沖泡三次，濾過；精密量取續濾液5 mL溶液按2.1.2項下顯色方法進行顯色，測定辣木籽茶總黃酮的含量，并計算總黃酮釋放量。黃酮釋放量=C1V1+C2V2+C3V3+C4V4……(注：C1為第一泡辣木籽茶中總黃酮濃度，V1為第一泡茶濾液體積；C2為第二泡辣木籽茶中總黃酮濃度，V2第一泡茶濾液體積；依次類推。)

2.2 辣木籽茶的制備

2.2.1 辣木籽乙醇提取工藝研究 以辣木籽醇提浸膏中總黃酮的轉移率為評價指標， 采用L9( 34)正交試驗設計，進行微波提取。因數水平表見表1。

表1 辣木籽乙醇提取因素水平表

注：料液比為藥材質量與乙醇體積之比。

2.2.2 辣木籽水提工藝研究 以辣木籽水提干膏得率為評價指標， 采用L9(34)正交試驗設計，進行煎煮提取。因數水平表見表2。

表2 辣木籽水提因素水平表

2.2.3 辣木籽醇提浸膏包合物制備正交試驗設計 采用超聲法制備，稱取適量β-CD置于燒杯中，加一定量的水攪拌制備成飽和溶液。將辣木籽醇提浸膏溶于適量的70%乙醇，再將其緩慢加入β-CD飽和溶液中，混合后超聲，冷藏，抽濾，用乙醇洗滌，沉淀低溫干燥，稱重即得[10]。以包合物的包合率為考察指標，以超聲時間、主客分子比、超聲功率、冷藏時間為因素，設計四因素三水平實驗，結果見表3。

表3 辣木籽醇提浸膏包合物制備因素水平表

2.2.4 辣木籽茶的制備方法 取辣木籽醇提浸膏包合物12 g、未包合醇提浸膏5 g、辣木籽水提浸膏4 g、稀釋劑10 g混合均勻，并加入適量黏合劑，擠壓成型，干燥，整粒，即得辣木籽茶。

2.2.5 輔料的篩選 ① 稀釋劑的篩選以合格率、總黃酮釋放量、外觀性狀為評價指標，以淀粉、乙基纖維素(EC)、微晶纖維素(MCC)、乙基纖維素+微晶纖維素(EC+MCC)為稀釋劑，按2.2.1項進行制備。②黏合劑篩選以合格率、外觀性狀為評價指標，分別以10%淀粉、3%聚維酮(PVP)、30%聚乙二醇6000(PEG6000)、3%EC為黏合劑，按2.2.1進行制備。

2.3 驗證性實驗 取三份藥材，每份2 kg，經水提、醇提；醇提后，將辣木籽醇浸膏制備包合物，并與未包合醇提浸膏、辣木籽水提浸膏按比例混合，加入輔料擠壓制備成辣木籽茶。

3 結果

3.1 總黃酮含量測定

3.1.1 標準曲線 標準曲線方程為Y=7.5868X-0.003(R2=0.9993),結果表明：蘆丁在0.0048～0.0384 mg/mL濃度范圍內線性關系良好。如圖1所示。

3.1.2 辣木籽包合物中總黃酮含量測定 經200～800 nm波長下掃描，β-環糊精在510 nm處無吸收。

3.2 辣木籽茶的制備

3.2.1 辣木籽乙醇提取工藝研究正交試驗設計結果 由表4中分析，最終確定最佳工藝條件為A1B3C3D2，即微波提取時間為3 min，料液比1∶10，乙醇濃度為80%，提取次數為2次。

表4 微波提取辣木籽正交試驗設計結果

3.2.2 辣木籽水提工藝研究正交試驗設計結果 從表5中分析，最終確定最佳工藝條件為A1B3C3，即煎煮時間為1 h，料液比1∶10，煎煮3次。

表5 煎煮法提取辣木籽正交實驗設計結果

3.2.3 辣木籽醇提浸膏包合物制備正交試驗設計結果 從表6中分析，最佳包合工藝為A1B3C1D1，各因素的影響程度為D>B>C>A。直觀分析得到超聲法的最佳包合條件為超聲時間為30 min、β-環糊精質量與醇提浸膏的質量比為3∶1超聲功率為100 w、冷藏時間為3 h。

表6 辣木籽醇提浸膏包合物制備正交試驗設計L9(34)結果表

3.2.4 辣木籽茶制備方法結果 稀釋劑篩選結果：由表7數據分析可篩選出稀釋劑為EC+MCC。外觀性狀顆粒干燥、均勻、色澤一致，無吸潮、軟化、結塊、潮解等現象。黃酮釋放量操作及計算見2.1.6。由表8數據分析可篩選出稀釋劑比例為EC+MCC。

表7 稀釋劑種類篩選結果

注：1.合格率 將制備好的顆粒稱重,過1號篩再過5號篩,收集能通過1號篩但不能通過5號篩的顆粒稱重。合格率%=過篩后顆粒質量/過篩前顆粒質量×l00%

表8 稀釋劑比例及用量篩選結果

黏合劑的篩選結果:由表9數據分析可篩選出黏合劑種類為EC。由表10數據分析可篩選出黏合劑濃度為10%EC。由表11數據分析可篩選出黏合劑的用量為6 mL。

表9 粘合劑種類篩選結果表

表10 黏合劑濃度的篩選結果

表11 黏合劑用量的篩選結果表

通過以上數據分析，辣木籽茶的最佳制備工藝為：辣木籽醇提浸膏包合物12.00 g、未包合醇提浸膏5.31 g、辣木籽水提浸膏4.39 g、稀釋劑為EC+MCC為10 g(EC∶MCC=1∶1)、黏合劑為10%EC6.00 mL。

3.4 驗證性實驗 由表12可知，辣木籽醇提浸膏包合物12.00 g、未包合醇提浸膏5.31 g、辣木籽水提浸膏4.39 g、稀釋劑為EC+MCC為10 g(EC∶MCC=1∶1)、黏合劑為10%EC6.00 mL的條件穩定。

表12 工藝驗證性實驗結果

4 討論

本實驗中通過正交試驗得出了辣木籽醇提浸膏β-CD包合物的最佳包合條件，該工藝具有對設備能耗條件要求較低、實際包合率均較高的特點。本實驗通過制備成包合物增加了辣木籽茶中黃酮的溶解度，解決了辣木籽黃酮水溶性差、口服吸收效果不好的問題。用β-CD制備的辣木籽黃酮包合物可進一步制備成其它劑型。本實驗將辣木籽原藥材制備成辣木籽茶，其合格率較高，并且有效地改善了湯色和口感，增加服用者的接受度。按照傳統泡茶方法，需將茶沖泡四次，并且黃酮釋放不宜過快，本實驗按照最佳工藝制備的辣木籽茶，能達到一個較好的釋放效果，并為辣木籽的進一步綜合開發利用提供參考依據。