GC-FID技術(shù)測(cè)定蘇麻降脂軟膠囊中α-亞麻酸的含量

田軍軍，蘇 喆，張一飛

（哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，哈爾濱 150086）

近年來(lái)隨著人們生活水平的日益提高，高脂血癥的發(fā)病率逐年增加，已成為危害人類健康的一種常見(jiàn)代謝紊亂疾病，還可能導(dǎo)致脂肪肝、肥胖癥等疾病[1-2]。蘇麻降脂軟膠囊是由蘇籽油、亞麻籽油和葡萄籽油組成的復(fù)方制劑，蘇籽油和亞麻籽油中的主要活性成分為α-亞麻酸，具有顯著的降血脂、降血壓、增強(qiáng)人體免疫力等作用，用于治療高脂血癥。本課題組前期實(shí)驗(yàn)研究表明，該軟膠囊可顯著降低高脂血癥模型大鼠血清TG、TC、LDL水平，適當(dāng)升高HDL水平。參考2015版《中國(guó)藥典》和2003版《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》[3]，以α-亞麻酸（α-linolenic acid，ALA）的含量為考察指標(biāo)，評(píng)價(jià)其品質(zhì)優(yōu)劣，建立簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、易于推廣的檢測(cè)方法，適用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 材料

1.1 儀器 Agilent 7820A氣相色譜儀（安捷倫科技有限公司），檢測(cè)器為氫火焰離子檢測(cè)器（FID）；Agilent Innowax毛細(xì)管柱（0. 25 μm × 0. 32 mm × 30 m，安捷倫科技有限公司）；分析天平（上海嘉鵬科技公司）；KL512J型數(shù)控恒溫水?。ǖ祪x專用，北京康林科技有限責(zé)任公司）。

1.2 試藥 蘇麻降脂軟膠囊（批號(hào)：170412、070512、070612，均由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院制劑室提供），α-亞麻酸甲酯（批號(hào)：111624-201604，中國(guó)食品藥品檢定研究院），正己烷（色譜純，格里斯天津醫(yī)藥化學(xué)技術(shù)有限公司），14%三氟化硼甲醇溶液（美國(guó)Sigma公司），其余試劑均為分析純，高純氮（純度≥99.999%，哈爾濱卿華工業(yè)氣體有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Agilent Innowax毛細(xì)管柱（0.25 μm×0.32 mm×30 m，i.d 0.25 μm），進(jìn)樣口溫度230 ℃，檢測(cè)器（FID）溫度250℃，柱溫控制采用程序升溫，以180 ℃為起始柱溫，以5 ℃/min升溫至210 ℃，以0.5 ℃/min升溫至215 ℃，以5 ℃/min升溫至220 ℃?？刂品椒榫€速率，載氣為氮?dú)猓泊盗髁?0 mL/min，氫氣流量45 mL/min，空氣流量500 L/min。采用手動(dòng)分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量為1 μL，分流比為30:1，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖 1 對(duì)照品及樣品氣相色譜

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取α-亞麻酸甲酯對(duì)照品171.2 mg，加正己烷溶解定容于25 mL容量瓶中，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，再吸取1 mL定容于25 mL容量瓶中制成濃度為0.6848 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取蘇麻降脂軟膠囊內(nèi)容物2 g，加入20 mL無(wú)水乙醇，加熱回流提取1 hr，濾液濃縮至5 mL，加入8 mL，0.5 moI/L的KOH甲醇溶液[4-7]，同磁力攪拌子一同放入250 mL磨口燒瓶中，由冷凝管上端吹入氮?dú)?，使燒瓶中充滿氮?dú)?，開(kāi)啟磁力攪拌器，并加熱反應(yīng)液，使溫度保持（65±5）℃，攪拌回流約15 min。從冷凝管上部加入8 mL的14%三氟化硼甲醇溶液，（65±5）℃攪拌回流2 min，冷卻至室溫，從冷凝管上部加入10 mL正己烷攪拌5 min，加入氯化鈉飽和水溶液10 mL，搖動(dòng)數(shù)分鐘，轉(zhuǎn)移至125 mL分液漏斗中，分離水相和有機(jī)相，再加6 mL正己烷洗水相，分離，棄去水相，合并有機(jī)相[8-9]，定容至25 mL容量瓶中，制得供氣相用的供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系的考察 精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.3、0.6、1.2、2.4、4.8、9.6 mL，分別加入正己烷定容于10 mL容量瓶中，搖勻，用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，再分別精密吸取上述不同濃度的對(duì)照品溶液1 μL依次注入氣相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，濃度（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。Y=3.09×106X+1.21×107，r=0.999 6。結(jié)果表明α-亞麻酸在0.21～6.57 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一份供試品溶液1 μL，注入氣相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定α-亞麻酸含量的RSD值為1.69%（n=6）。表明所用儀器精密度良好。2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取一份供試品溶液1 μL，于配制后0、2、4、6、8、10、12 h注入氣相色譜儀，測(cè)定α-亞麻酸峰面積，其RSD值為2.73%。結(jié)果表明，供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取蘇麻降脂軟膠囊內(nèi)容物6份，平行操作，按“2.3”項(xiàng)下的方法分別制成供試品溶液。精密吸取供試品溶液1 μL，注入氣相色譜儀，測(cè)定峰面積，結(jié)果α-亞麻酸平均含量為13.21%，RSD值為2.33%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同一批次蘇麻降脂軟膠囊內(nèi)容物，共6份，分別精密加入α-亞麻酸甲酯對(duì)照品，按“2.3”項(xiàng)下的方法分別制成供試品溶液。再吸取供試品溶液1 μL注入氣相色譜儀，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算α-亞麻酸含量和回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 α-亞麻酸加樣回收率測(cè)定結(jié)果（n=6）

2.9 樣品測(cè)定 稱取三個(gè)不同批次的蘇麻降脂軟膠囊內(nèi)容物，精密稱定，按上述方法制成供試品溶液，注入氣相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算α-亞麻酸含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 蘇麻降脂軟膠囊中α-亞麻酸的測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討論

由于α-亞麻酸是蘇籽油和亞麻籽油中的主要活性成分，另一方面，α-亞麻酸作為多不飽和脂肪酸，易受環(huán)境影響而發(fā)生氧化或酸敗，所以我們將α-亞麻酸作為質(zhì)量控制指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)該制劑的質(zhì)量?jī)?yōu)劣。本實(shí)驗(yàn)建立了用氣相色譜法測(cè)定蘇麻降脂軟膠囊中α-亞麻酸甲酯的方法，進(jìn)而計(jì)算其中α-亞麻酸的含量（亞麻酸換算系數(shù)0.952），保證了測(cè)定結(jié)果的穩(wěn)定和可靠，可以有效控制蘇麻降脂軟膠囊的質(zhì)量。