Survivin在結直腸癌組織中的表達及臨床意義

陳建發，謝奎龍，馮巧智，朱文彬，周勇軍，周淑蓉（中國人民解放軍南部戰區海軍第一醫院普通外科，廣東湛江 524009）

結直腸癌(colorectal cancer，CRC)為癌癥死亡的主要原因之一[1-3]，在中國的發病率及死亡率均排在前5位[4]。 CRC的 預后與腫瘤分期有關。由于大多數病例確診時已處于晚期，CRC患者5年及10年生存率分別為 65%和58%，如果發生遠端轉移則患者5年生存率僅為13%[5]。鑒定新的預后/治療分子標記物，精準地確定高風險患者亞群并實施合適的治療方案，是癌癥個體化治療的重要策略。 Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein，IAP)家族的重要成員，其在 CRC中的表達意義仍存爭議。在本研究中我們檢測了 Survivin與CRC臨床病理參數及患者術后生存之間的關系，探討了其作為 CRC分子標記物的可能性。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

收集 2006年7月至2011年12月本院普外科手術切除的原發性 CRC標本59例，癌組織取自癌灶中心，且術前未行放化療。男 35例，女 24例，年齡33～79歲，平均(56.0±10.8)歲。按美國癌癥聯合委員會(American Joint Committee on Cancer，AJCC)TNM分期法進行分期，按 WHO標準進行組織學分級。

1.2 隨訪

采用電話、電子郵件或門診方式進行，所有病例均有隨訪的完整資料?？偵鏁r間定義為自手術之日起至出現與 CRC相關的死亡時間，死于其他原因或在隨訪期內死亡的病例則作為截尾事件處理。本研究隨訪期為5 a。

1.3 免疫組化

取上述所選患者存檔的經福爾馬林固定、石蠟包埋的手術切除的癌組織標本， 4μm厚連續切片，脫蠟，浸于 0 .01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液內，微波爐加熱至沸騰并保持該狀態 15 min修復抗原；切片冷卻后洗滌，采用 a bcam公司封閉緩沖液封閉非特異性背景染色；滴加 S anta Cruz公司兔抗人 Survivin多克隆抗體(稀釋 200倍)， 4 ℃過夜；洗滌，浸于含0.3% H2O2的甲醇中滅活內源性過氧化物酶；洗滌，加VECTOR公司 Im mPRESS 試 劑抗兔二抗(稀釋1000倍)，室溫反應 15 min；洗滌后 D AB顯色，蘇木精輕染后封片。

1.4 判定標準

Survivin蛋白主要定位于胞質。采用雙評分半定量分析，根據陽性細胞百分比及顯色程度計分，200倍鏡下隨機取 5個視野，計算陽性細胞平均數。陽性細胞平均數為 0計為 0 分，≤ 25%記為 1分，26%～50%記為 2分， 51%～75%記為 3分，≥ 76%記為 4分；顯色程度為無著色記 0分，淡黃色記為 1分，棕黃色記為2分，棕褐色記為 3分。 2種分數相加后綜合判定，0～1 分 為(－)， 2～3 分為(＋)， 4～7 分 為(++)。(－～＋)定義為陰性染色，(++)則為陽性染色[6]。

1.5 統計學處理

數據采用 SPSS 22.0軟件進行處理。計數資料采用χ2檢驗， K aplan-Meier法進行生存分析。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Survivin 蛋 白在CRC組織中的表達

在CRC 組 織中， Survivin免疫組化表達陽性的腫瘤細胞其胞質呈棕黃色， 59例標本中 27例表達陽性，陽性表達率為45.76% (圖 1 )。

圖1 Survivin蛋白在CRC組織內的表達(×200)

2.2 Survivin 蛋 白表達及其與 CRC 臨床病理參數之間的關系

如表 1所示， Survivin蛋白陽性表達與 CRC淋巴結轉移、 TNM分期以及肝臟轉移有關(P<0.01)，但與年齡、性別、腫瘤大小及組織分化程度無關(P>0.05)。

表1 Survivin蛋白表達及其與CRC臨床病理參數之間的關系

2.3 生存分析

Kaplan-Meier生存分析顯示， Survivin蛋白陽性表達者 5a總生存時間較 Survivin陰性表達者更短(P<0.01)，詳見圖 2。

3 討論

Survivin是IAP家族的一個重要成員，參與保護細胞免于凋亡并調控有絲分裂。在大多數已分化的成熟組織內， Survivin表達極低以至不能檢測，但其在幾乎所有癌癥中卻過表達，并與進展期腫瘤、上升的腫瘤復發率、縮短的總生存期以及放化療抵抗有關。 Survivin幾乎觸及了癌癥所有方面，在腫瘤發生發展過程中扮演了一個重要角色[7]。

圖2 CRC患者總生存曲線與Survivin表達的關系

最近的研究顯示，在早期結腸癌中 Survivin表達上調可能參與了腫瘤進展[8]，并能夠促進 CRC的浸潤及轉移[9]。Survivin表達上調除了與放療抵抗有關外[10]，還與接受全腸系膜切除及術后化放療的局部晚期直腸癌的高復發率有關[11]。鑒于此，以Survivin為治療靶點的研究方興未艾，例如通過基因敲除、疫苗或者小分子抑制劑等手段抑制其表達，從而實現抑制 CRC生 長的目的[12-14]。但關于 Survivin表達與CRC病理參數及預后之間的關系，現有研究的結論并不一致。有研究稱Survivin 表達與CRC組織分化程度、淋巴結狀態及腫瘤分期有關，并且其高表達者5年存活期更短[15]。但也有報道顯示 Survivin表達與無病生存期及總生存期無關[16]。還有報道認為Survivin 表達與 CRC 組織分化、腫瘤大小及淋巴結轉移無關[17]。鑒于此，研究者有必要對盡可能多的CRC 樣 本進行回顧性評估，從而更好地理解Survivin表達的臨床價值。在本研究中，筆者發現CRC中Survivin 過 表達與淋巴結轉移、 TNM 分期以及肝轉移有關，并且與術后更短的 5年總存活期有關，表明Survivin在CRC發生發展過程中發揮了一個重要作用。關于不同研究 Survivin表達意義相互矛盾的原因，可能與所用標本在術前是否經過不同的治療有關，也可能與實驗所用不同的抗體、陽性染色判定標準以及樣本量不夠大有關。其中陽性染色判定標準的確定極具隨意性，染色深淺的判斷也極具主觀性，而這些都會直接影響到最終結果。

值得注意的是，約20%患者在 CRC確診時已發生遠處轉移，在整個疾病進程中多達 60%患者最終會出現遠處轉移。肝臟是最常見的轉移位置，并且肝轉移也被認為是轉移性 CRC的主要致死原因[18]。在本研究中， Survivin過表達被發現與 CRC肝轉移有關，與 Fang等[19-20]的研究結果相似，提示檢測Survivin 表達可能有助于及早發現CRC 是否存在發生肝轉移的風險。

綜上， Survivin表達有望成為評估 CRC生物學行為的重要指標之一。