蒙古野驢肝片吸蟲剖檢病例報(bào)告

曾林峰 ， 張學(xué)良 ， 李建喜

(1.江西省南昌市南昌動(dòng)物園管理處 ， 江西 南昌 330025； 2.江西省南昌市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 ，江西 南昌 330008； 3.江西省家畜血吸蟲病防治站 ， 江西 南昌 330023)

蒙古野驢為國(guó)家一級(jí)保護(hù)動(dòng)物，屬瀕危動(dòng)物。成年體重約250公斤，壽命25-30年。分布于中蒙邊界的高海拔地區(qū)。肝片吸蟲主要感染牛羊駱駝等反芻動(dòng)物，蟲體寄生于膽管，引起急性或慢性肝炎和膽管炎，并伴發(fā)全身性中毒現(xiàn)象和營(yíng)養(yǎng)障礙，以致死亡。2016年8月12日本園1頭28歲蒙古野驢經(jīng)治療無(wú)效死亡，剖檢發(fā)現(xiàn)大量肝片吸蟲。因江西地區(qū)為肝片吸蟲多發(fā)地，綜合發(fā)病經(jīng)過流行病學(xué)和剖檢結(jié)果診斷為感染肝片吸蟲致死。報(bào)告如下。

1 發(fā)病經(jīng)過

該蒙古野驢為雌性，老齡，未生育，自1歲時(shí)從外地引進(jìn)，6年前搬遷至新園。在本園共生活27年，體況健康，未曾出現(xiàn)任何疾病。平時(shí)以青草、苜蓿草、水果、精料為食。每年2次常規(guī)驅(qū)蟲。發(fā)病約半月，體重從260 kg急速下降至200 kg，出現(xiàn)不明原因消瘦。

2 臨床癥狀

發(fā)病期間精神食欲無(wú)異常，大小便正常，未見其他明顯臨床癥狀。曾給予消炎藥、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等，未有起色。死亡前1天突然不能站立，強(qiáng)行抬起后，勉強(qiáng)行走兩步，后肢無(wú)力支撐，又跌倒在地。立即給予氨基比林、維生素B1、B12等藥物。第2天早晨發(fā)現(xiàn)死亡。

3 剖檢

肝臟外觀大理石樣，腫大，硬化。肝臟膽管內(nèi)有大量肝片吸蟲，幾乎將膽管堵死。膽管壁紅腫增厚。膽囊內(nèi)有肝片吸蟲，膽汁紅褐色。膽總管出現(xiàn)3處囊腫，內(nèi)有肝片吸蟲，幾乎堵死十二指腸開口處。十二指腸空虛擴(kuò)張菲薄。共計(jì)有肝片吸蟲300余條。成蟲長(zhǎng)30～40 mm，寬10～15 mm，褐色，呈扁平葉片狀，表面覆有細(xì)刺。前端伸展呈圓錐狀突出，基部擴(kuò)展猶如一對(duì)寬肩，前部寬于后部，有口吸盤和腹吸盤。

4 防治措施

場(chǎng)地內(nèi)室和用具使用燒堿消毒，后灑布生石灰。其余動(dòng)物口服肝蛭凈2～3 mg/kg·bw，2周1次，連用3個(gè)月。

表1 儀器及其功能

表2 供血犬的選擇標(biāo)準(zhǔn)

6 常用血液制劑分類

人類臨床上血液制劑種類比較豐富，但寵物臨床上受技術(shù)手段、成本、人員培訓(xùn)等因素所限，主要血液制劑為全血、紅細(xì)胞懸液、新鮮冰凍血漿、冰凍血漿等。

7 血液的采集

輸注用的血液制劑，必須用含有抗凝劑的專用的一次性使用塑料血袋采集血液。用于制備全血制劑的血袋為單袋。用于制備成分血制劑的血袋為帶有衛(wèi)星袋的多聯(lián)袋。衛(wèi)星袋為血漿轉(zhuǎn)移帶和紅細(xì)胞保存液袋，各個(gè)衛(wèi)星袋與血袋之間通過導(dǎo)管形成一個(gè)密閉系統(tǒng)，減少了血液制劑制備過程中的暴露幾率。采血時(shí)需要4～5人，1人負(fù)責(zé)采血，1人為助手并負(fù)責(zé)記錄信息，2～3人負(fù)責(zé)安撫、保定供血犬。

8 血液制劑的制備

8.1 全血制劑 血液采集完成后，將血袋的采血導(dǎo)管熱合成段，以備配血、復(fù)檢使用，標(biāo)記相關(guān)信息，4 ℃儲(chǔ)存，等待檢測(cè)結(jié)果決定是否放行。

8.2 成分血制劑的制備 血液采集完成后，將聯(lián)袋中采血袋的采血導(dǎo)管熱合成段。將聯(lián)袋放入離心機(jī)離心，離心力5 000 g，離心5 min。而后利用血液分漿夾分離血漿與紅細(xì)胞。分離完成后，將衛(wèi)星袋中的紅細(xì)胞保存液與紅細(xì)胞混勻即為紅細(xì)胞懸液，標(biāo)記紅細(xì)胞懸液和血漿的相關(guān)信息。將血漿放入-50 ℃以下的環(huán)境中速凍，完成后即為新鮮冰凍血漿。在規(guī)定條件下儲(chǔ)存紅細(xì)胞懸液和新鮮冰凍血漿，等待檢測(cè)結(jié)果決定是否放行。采血后6-8 h內(nèi)分離的血漿速凍后為新鮮冰凍血漿；超過6-8 h分離的血漿速凍后為冰凍血漿。新鮮冰凍血漿儲(chǔ)存1年后，即作為冰凍血漿使用。見中插彩版圖1。

9 血液制劑的儲(chǔ)存

犬紅細(xì)胞制劑(犬全血、紅細(xì)胞懸液)應(yīng)放入專用的儲(chǔ)血冰柜，儲(chǔ)藏溫度1～6 ℃。犬血漿制劑(犬新鮮冰凍血漿、犬冰凍血漿)儲(chǔ)藏溫度為-20 ℃以下(表3)。新鮮冰凍血漿有效期滿后即為冰凍血漿，有效期在原有基礎(chǔ)上增加4年。

10 血液制劑的運(yùn)輸

運(yùn)輸容器應(yīng)有保溫和密封性，并能夠阻擋內(nèi)部泄漏和外部壓力。我們經(jīng)實(shí)踐后發(fā)現(xiàn)，厚度為35～40 mm高密度泡沫保溫箱即可達(dá)到以上要求。通過查閱文獻(xiàn)[14]并結(jié)合實(shí)際進(jìn)行調(diào)整，運(yùn)輸容器內(nèi)部構(gòu)造從底層開始依次為：蓄冷劑、吸水紙、緩沖帶、血液制劑、緩沖帶、吸水紙、蓄冷劑、容器蓋。

用于運(yùn)輸犬紅細(xì)胞制劑的蓄冷劑為化學(xué)冰袋。用于運(yùn)輸犬血漿制劑的蓄冷劑為干冰和化學(xué)冰袋，其中化學(xué)冰袋放置于血漿袋之間的間隙中。

表3 血液制劑保質(zhì)期

吸水紙是為了吸收運(yùn)輸容器內(nèi)的滲漏與水汽。材質(zhì)可為紙巾、報(bào)紙或一次性尿布，以一次性尿布效果最佳。盛有血液制劑的血袋，應(yīng)單獨(dú)包裝在一個(gè)封閉的塑料袋中，以防止意外導(dǎo)致的泄露。

11 血液制劑管理

11.1 供血犬與血液制劑信息登記 供血犬要做好檔案以備查驗(yàn)，檔案包括出生日期、血型、體重、臨床健康狀況、免疫記錄、驅(qū)蟲記錄、病原檢測(cè)記錄、體溫檢測(cè)記錄、血常規(guī)檢測(cè)記錄、采血記錄等。血液制劑制備完成后，登記血液制劑編號(hào)、采血日期、供血犬耳號(hào)、血傳病原與無(wú)菌檢測(cè)結(jié)果、儲(chǔ)存記錄、銷毀或出庫(kù)記錄，每一袋血液制劑都有清楚的來(lái)源與去處。

11.2 血液制劑生物安全檢測(cè) 對(duì)血液制劑進(jìn)行血傳病原檢測(cè)、無(wú)菌檢測(cè)。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，剔除不合格的血液制劑。

11.3 血液制劑分區(qū)儲(chǔ)存與放行 應(yīng)設(shè)立物理隔離的合格品區(qū)、待檢區(qū)和不合格品區(qū)，并有明顯標(biāo)識(shí)。進(jìn)出不同儲(chǔ)存區(qū)的血液制劑應(yīng)做好記錄，至少包括編號(hào)、血型、數(shù)量、時(shí)間、交接人等。對(duì)檢測(cè)不合格、外觀不合格、異常采集等的血液制劑進(jìn)行標(biāo)識(shí)，移入不合格品區(qū)，統(tǒng)一按醫(yī)療廢棄物處理。將尚無(wú)最終檢測(cè)結(jié)果的血液制劑，繼續(xù)儲(chǔ)存在待檢區(qū)，并做好標(biāo)識(shí)。檢測(cè)合格的全血制劑或成分血制劑，都應(yīng)有唯一編碼，確保可追溯性。只有外包裝、內(nèi)容物及儲(chǔ)存過程完全合格，標(biāo)識(shí)清楚，可追溯到相應(yīng)供血犬的產(chǎn)品，才可放行。

12 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

12.1 常規(guī)檢測(cè) 檢測(cè)供血犬的血常規(guī)，并抽檢血傳病原及抗體滴度，抽檢合格后方可進(jìn)行血液制劑制備。供血犬采血時(shí)，需同步留樣，用以檢測(cè)血液中可能攜帶的病原，合格后放行。

12.2 血傳病原的檢測(cè) 輸血過程中，絕對(duì)的安全是無(wú)法保證的。除輸血反應(yīng)外，血傳病原可引起受血犬發(fā)病，因此所有供血犬都應(yīng)該進(jìn)行血傳病原檢測(cè)。根據(jù)美國(guó)獸醫(yī)內(nèi)科學(xué)學(xué)會(huì)關(guān)于供血犬傳染病篩查的共識(shí)聲明[15-16]，需要檢測(cè)的病原至少符合以下標(biāo)準(zhǔn)中的4個(gè)：(1)病原被證實(shí)能通過血液傳播而導(dǎo)致受血犬臨床感染；(2)病原能引起犬的亞臨床感染，導(dǎo)致臨床人員將其誤認(rèn)為健康供血犬；(3)被感染動(dòng)物的血液，可以分離培養(yǎng)出病原，或可以用分子生物學(xué)方法檢出病原；(4)受血犬感染病原后，發(fā)生危及生命的疾病，且用抗菌藥物難以治愈。

結(jié)合國(guó)內(nèi)犬病流行情況，血傳病原檢測(cè)至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：無(wú)形體屬(Anaplasmaspp)，巴貝蟲屬(Babesiaspp)，巴爾通體屬(Bartonellaspp)，埃立克體屬(Ehrlichiaspp)，嗜血支原體(Hemoplasmas)，利什曼原蟲屬(Leishmaniaspp)，犬布魯菌(Brucellacanis)。檢測(cè)頻率半年1次，并不定時(shí)抽檢。利什曼原蟲屬，在感染風(fēng)險(xiǎn)低的地區(qū)不需要檢測(cè)。

犬心絲蟲(Heartworm)不符合通過輸血傳播病原的標(biāo)準(zhǔn)，不在篩查范圍內(nèi)。因?yàn)楣┭褐械奈⒔z蚴輸入受血犬后，并不會(huì)導(dǎo)致受血犬發(fā)生心絲蟲病[15]，但美國(guó)獸醫(yī)內(nèi)科學(xué)學(xué)會(huì)2015年更新了這一說(shuō)法，因?yàn)榇嬖谖⒔z蚴攜帶沃爾巴克(氏)體屬(Wolbachiaspp)的情況，遂建議在其流行地區(qū)進(jìn)行病原篩查[16]。

13 討論

人類臨床與國(guó)外寵物臨床更多地用成分血制劑替代全血制劑，不但節(jié)約了血液資源，還降低了輸血風(fēng)險(xiǎn)。成分血制劑是在一定條件下，用物理方法分離出全血內(nèi)的一種或幾種血液成分而制成的血液制劑。

目前國(guó)內(nèi)寵物臨床過多使用全血制劑由兩個(gè)方面造成：首先是由于專業(yè)血站的缺乏，寵物臨床上很難獲得合格的成分血制劑；其次是臨床醫(yī)師輸血知識(shí)欠缺。輸血時(shí)輸注的血液成分并不是“越全越好”，正確使用血液成分進(jìn)行治療，可達(dá)到更好的療效，同時(shí)可避免多余成分帶來(lái)的危害[17]。解決問題的關(guān)鍵，即在于建立專業(yè)血站，生產(chǎn)保障質(zhì)量與生物安全的血液制劑，同時(shí)提供臨床輸血相關(guān)資料，規(guī)范血液制劑用法。

國(guó)外動(dòng)物血站供血犬的來(lái)源主要為2個(gè)：血站自行飼養(yǎng)的小規(guī)模種群和向社會(huì)征集供血犬。就目前國(guó)內(nèi)寵物業(yè)現(xiàn)狀來(lái)看，我們認(rèn)為，維持一個(gè)穩(wěn)定的供血犬種群是更好的選擇。首先，國(guó)內(nèi)寵物主人對(duì)寵物獻(xiàn)血認(rèn)可度低下，寵物醫(yī)師缺乏制備血液制劑的知識(shí)，限制了向社會(huì)廣泛征集供血犬的可行性；其次，用目前社會(huì)上現(xiàn)存供血犬制備的血液制劑，質(zhì)量無(wú)保障，特別是存在巨大生物安全風(fēng)險(xiǎn)。

以保障動(dòng)物福利為根本，以提供優(yōu)質(zhì)的血液制劑為目的，專業(yè)化犬血站可以維持一個(gè)較大規(guī)模、隔離飼養(yǎng)的供血犬群，隨時(shí)監(jiān)測(cè)犬的健康狀態(tài)，杜絕血傳病原的傳播；血液制劑的采集、制備、儲(chǔ)存和運(yùn)輸均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，這是目前的個(gè)體散戶不可能做到的。

經(jīng)過長(zhǎng)期努力，我們已初步建立了專業(yè)的犬血站及相關(guān)企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)定了供血犬種群的紅細(xì)胞生理值與脆性，調(diào)查了比格犬DEA1血型的遺傳規(guī)律，檢測(cè)了健康比格犬凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ含量及其在犬新鮮冰凍血漿儲(chǔ)存過程中的穩(wěn)定性，檢測(cè)了犬新鮮冰凍血漿總蛋白、白蛋白含量及CPV、CDV、CAV的抗體滴度，建立了犬血液采集及血液制劑制備的操作流程，制定了犬血站運(yùn)行的一些標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，并對(duì)犬新鮮冰凍血漿進(jìn)行了較大規(guī)模的臨床試驗(yàn)等。

專業(yè)化犬血站建設(shè)在我國(guó)才剛剛開始，需要更多專家與同行投入資源，積累經(jīng)驗(yàn)。相信不久的將來(lái)，專業(yè)化、標(biāo)準(zhǔn)化血站會(huì)成為寵物臨床供血的主體，這不僅有利于寵物的健康，同時(shí)對(duì)保障社會(huì)公共安全也有重要意義。