病理技術HE染色改進前后組織質譜結果分析

吳玉戈

病理診斷作為現代醫學中一種權威性診斷方式，在疾病診斷方法中有重要地位，可為疾病后續治療方案的制定提供重要依據[1]。然而，病理診斷也存在一定局限性，即病理診斷準確性會受到病理檢查醫師操作技術水平、染色效果、組織病理切片處理質量等因素的影響，加上標本脫水不徹底、標本固定時間過長以及試劑濃度變化等現代病理因素影響，導致切片質量也受到巨大影響，增加準確診斷的難度系數[2]。鑒于此，有必要進一步改進病理技術HE染色方法，但改進后效果如何，是否能進一步提高病理診斷準確性，相關報道鮮見，應作進一步分析。本研究旨在明確病理技術HE染色應用在病理診斷中的效果，以病理技術HE染色處理一組石蠟切片，對病理技術改進前后染色標準組織學質譜差異作比較，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇某院2016年9月至2017年9月病理科接收的石蠟切片300例作為研究樣本，主要包括骨石蠟切片、脂肪石蠟切片、膽石蠟切片、胃腸石蠟切片，嚴格依據相關規范予以操作，進行HE染色。其中，病理診斷技術改進前和改進后的診斷樣本以及例數均150例，均為：骨石蠟切片58例、脂肪石蠟切片44例、膽石蠟切片27例、胃腸石蠟切片21例。

1.2 檢查方法 病理技術HE染色方法：自手術室中獲得本研究所需的組織或器官標本，在超聲等影像學工具引導下穿刺所獲得的標本作為實驗所用穿刺小標本。醫師在取材中保證準確、快速。在選材、制片期間應根據不同組織選取相應固定和脫水時間以及制片染色方法，以確保組織病理制片質量，比如：小標本的固定與脫水時間均縮短，脂肪組織固定、脫水時間延長，對于破碎組織以及軟組織均應選擇已用過的舊刀片予以制片處理。病理診斷HE染色方法具體操作如下：①經三次二甲苯進行去蠟處理，時間是5～10 min。②脫蠟水洗3 min，其中無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇各占1 min。③應用蘇木紫液進行染色處理，時間是3～5 min，而染色時間應針對實際情況進行增減。④使用1%濃度酸性乙醇與1%濃度鹽酸分化予以水洗。⑤流水浸洗的時間應在15 min以上，直到細胞核改為藍色。如果染色深度欠佳，無法判斷，則重染。⑥以伊紅液染色，時間是0.5～1 min，隨后使用85%乙醇、95%乙醇和無水乙醇予以水洗，各兩次，每次時間是1～2 min。⑦應用二甲苯進行透明處理，共3次，3～5 min/次。⑧以中性樹膠完成蓋片封片操作，并貼上標簽。

病理技術改進方法：對不同標本應依據不同組織特性進行制片、固定、脫水、染色。其中，在蘇木精染色下，細胞核應為鮮明藍色、黏液呈灰藍色、軟骨基底和鈣鹽顆粒為深藍色。在伊紅染色下，細胞間質為不同層次的紅色，比如胞漿中嗜酸性顆粒細胞為鮮紅色，而膠原纖維淡粉紅色、彈力纖維亮粉紅色。因組織的著色程度、組織與細胞種類之間存在密切關系，并能根據病理變化與生活周期變化而改善。比如大部分細胞胞漿經伊紅染色，在新生時期較淡，進入衰老期會逐漸加深。

1.3 觀察指標 比較病理診斷技術改變前、改變后的染色結果，包括骨石蠟切片、脂肪石蠟切片、膽石蠟切片、胃腸石蠟切片。

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0統計學軟件包進行數據分析，計數資料用率表示，行X2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

與病理診斷技術改進前比較，改進后的骨石蠟切片、脂肪石蠟切片、膽石蠟切片、胃腸石蠟切片病理診斷準確率均明顯升高，并與改進前相比差異有統計學意義(均P＜0.05，表1)。

表1 病理診斷技術改進前、改進后的染色結果比較[n(%)]

3 討論

病理檢查，即通過明確人體組織、器官、細胞內病理變化進行診斷的病理形態學方法，從而發現對應部位發生或者可能發生的病變，最終了解病變發生原因、機制、過程等，因而在諸多疾病診斷中被稱之為“金標準”[2-3]。現階段，病理診斷已經大量用于各個學科疾病診斷工作以及科學研究中，作出了較大醫學貢獻[4-6]。然而，經既往臨床實踐發現，病理診斷依賴于臨床對于組織細胞的取材、固定、脫水以及切片各個操作質量，最終所獲組織染色質量水平可直接影響疾病診斷結果[7-8]。

臨床醫師在病理診斷中強調，針對不同標本，取材要求應隨之變化，同時還包括取材方法、范圍、工具，預防標本組織受擠壓，導致其組織結構變異。細胞、組織HE染色質量在較大程度上會受上述各個措施影響，因而在診斷中應考慮各個類型不同，酌情選取相應方法、工具完成。病理技術HE染色(蘇木精-伊紅染色法)中蘇木精染液為堿性，主要使細胞核內的染色質與胞質內的核酸著紫藍色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。它作為臨床病理檢查中常見染色方法，也是病理技術中常見方法之一，病理學切片均需接受一種及以上的染料，從而顯現切片中各個物質，經光學顯微鏡仔細觀察各個結構，從而準確判斷，幫助臨床醫師獲得可靠證據[9-10]。因此，臨床醫師應不斷提高病理診斷技術，以免切片染色錯誤，致使結構不明、層次不清，影響診斷準確性。經本次研究發現，病理診斷技術改進后，染色結果顯著優化，對于骨石蠟切片、脂肪石蠟切片、膽石蠟切片、胃腸石蠟切片的病理診斷準確率均升高，從60%～70%升高到90%以上，充分證明了在病理診斷中改進病理技術HE染色方法的臨床意義。

綜上所述，病理技術HE染色方法在病理診斷中的臨床價值顯著，而持續改進病理技術HE染色方法，有助于提高診斷準確率，值得借鑒。