艷山姜薄層色譜鑒別方法的建立

唐藝 陳舒憶 楊再清

【摘 要】目的：建立艷山姜的薄層色譜鑒別方法。方法：樣品加入石油醚（60～90℃）5ml，振蕩30min，離心，取上清液作為供試品溶液，另取艷山姜對照藥材同法操作，作為對照品溶液。取供試品和對照品溶液各5μl點于硅膠板上，以石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（9：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果：所得的薄層色譜圖譜有7個斑點，斑點清晰且分離效果和顯色效果佳。結(jié)論：該鑒別方法操作簡單，試劑少、時間短，定性特征明顯、結(jié)果易于判定，可作為艷山姜的薄層鑒別方法。

【關(guān)鍵詞】艷山姜;薄層色譜鑒別;對照藥材

中圖分類號： R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A 文章編號： 2095-2457（2019）06-0111-003

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2019.06.041

【Abstract】Objective：To establish a thin layer chromatography identification method of Alpinia zerumbet.Methods Petroleum ether（60-90℃）were added in samples with 5ml，stired for 30 minutes，and centrifuged，the upper liquid was taken as the test solution.Alpinia zerumbet was used as the control medicinal materials，and operated in the same way as the reference solution.The test and reference solutions were spreaded on the silica gel plate at 5μl，with etroleum ether（60-90℃）：ethyl acetate（9：1）as mobile phase，and 5% sulfuric acid solution as color developing reagent.Heated at 105℃ until the spots color were clear.Results The TLC chromatogram had 7 well-separated clear spots，the separation and color development effect were good.Conclusion The identification method had the advantages of simple operation，less reagents，short-time operation，obvious qualitative characteristics and easy judgment，and it can be used as a thin layer identification method for Alpinia zerumbet.

【Key words】Alpinia zerumbet;TLC;reference crude herb

艷山姜系姜科山姜屬植物艷山姜Alpinia zerumbet（Pert）Burtt et.Smith的干燥成熟果實，生于海拔400～650m的林中蔭處[1]，別名玉桃、草扣、大良姜、大草蔻、土砂仁[2]，是貴州省少數(shù)民族地區(qū)的傳統(tǒng)習(xí)用藥物，廣泛分布于我國東南部至西南部各地。最早記載于《廣州常見經(jīng)濟(jì)植物》，收錄于2003版《貴州省中藥、民族藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中。性味辛、澀，溫;歸心、胃、大腸經(jīng);具有溫中燥濕，行氣止痛，截瘧的功效;用于心腹冷痛，胸腹脹滿，消化不良，嘔吐腹瀉，瘧疾等病癥。揮發(fā)油是艷山姜的主要化學(xué)成分，具有顯著的藥理活性[3-6]，同時艷山姜藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未曾收載過薄層鑒別的檢測方法，通過對艷山姜的研究，提取出艷山姜的揮發(fā)油成分，建立一種簡便易行，專屬性好的TLC色譜鑒別方法。

1 材料和儀器

1.1 材料：艷山姜原植物采集于貴州貞豐，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)魏升華教授鑒定為姜科植物艷山姜Alpinia zerumbet（Pert）Burtt et.Smith，其干燥成熟果實作為對照藥材（見圖1）。

1.2 儀器設(shè)備：TLC PLATE HEATER Ⅲ薄層板加熱器（瑞士CAMAG）;BSA224S萬分之一電子天平（德國Sartorius）;KQ-500DE數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;HY-4A往復(fù)式調(diào)速多用振蕩器（群安實驗儀器有限公司）;硅膠G薄層板（青島海洋化工廠，批號：20180902）。

1.3 試劑試藥：石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、香草醛、濃硫酸等（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法和結(jié)果

2.1 對照藥材溶液的制備：取艷山姜對照藥材粉末（過3號篩）1g，加入石油醚（60～90℃）5ml，振蕩30min，離心，取上清液作為對照藥材溶液;

2.2 供試品溶液的制備：取5批艷山姜藥材粉末（過3號篩）各1g，加入石油醚（60～90℃）5ml，振蕩30min，離心，取上清液作為供試品溶液;

2.3 點樣：用點樣毛細(xì)管吸取對照藥材溶液和供試品溶液各5μl，分別點于同一塊硅膠G薄層板上;

2.4 展開：以石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（9：1）為展開劑，吸取10ml展開劑于展開缸中，放入硅膠G薄層板預(yù)飽和15min后展開，當(dāng)溶劑前沿距硅膠G薄層板頂端1cm處，取出，晾干;

2.5 顯色：噴以5%香草醛硫酸溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。

2.6 結(jié)果：從下到上有7個清晰的斑點。見圖2。

3 討論

3.1 對照的選擇

艷山姜的揮發(fā)油中含有β-蒎烯、α-蒎烯、β-水芹烯、莰烯、龍腦、樟腦、冰片等成分[5]。通過研究α-蒎烯、龍腦和冰片等對照品的薄層色譜，展開后均未得到理想的斑點，其中α-蒎烯對照品易分解，難購買，龍腦和冰片對照品在艷山姜中含量低，斑點不明顯，展開時間長，故選擇經(jīng)過鑒定的艷山姜作為對照藥材，展開后具有斑點多，易分離，信息量大等特點。

3.2 供試品溶液的制備

揮發(fā)油可按照中國藥典2015版四部通則2204揮發(fā)油測定法[7]進(jìn)行提取，但此方法提取時間長達(dá)6小時，操作復(fù)雜，不能滿足薄層色譜鑒別快速和簡便的特點。通過多次的試驗研究，采用石油醚（60～90℃）能有效的提取揮發(fā)油等非極性化合物，溶劑只需5ml就能較好的提取出艷山姜的揮發(fā)油成分，可直接使用上清液進(jìn)行點樣，避免再次濃縮溶解，簡化了提取過程;同時考察了超聲提取和振蕩提取兩種方式，無顯著差異，因超聲儀產(chǎn)生較大的噪聲，故選用振蕩提取的方式。

3.3 展開劑的確定

根據(jù)揮發(fā)油的化學(xué)性質(zhì)，考察了石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（9：1）和環(huán)己烷：丙酮（9：1）兩組展開劑，結(jié)果顯示前一組展開劑展開的斑點清晰度、分離度、Rf值等參數(shù)較后一組好，故確定石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（9：1）為展開劑。

4 結(jié)論

綜上所述，制定的艷山姜薄層色譜鑒別方法操作簡便快速、斑點信息完整、專屬性較好，能夠準(zhǔn)確的鑒別艷山姜藥材，建議納入艷山姜藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。

【參考文獻(xiàn)】

[1]貴州植物志編輯委員會.貴州植物志[M].四川：四川民族出版社，1989：702.

[2]國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會，中華本草（第8冊）[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2004（24）：607-608.

[3]張彥燕等.艷山姜化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J]. 中藥藥理和臨床，2010，26（5）：179-181.

[4]徐旖旎等.基于NOS信號的艷山姜揮發(fā)油對ox-LDL誘導(dǎo)HAECs損傷的保護(hù)作用[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2017， 23（15）：143-147.

[5]張彥燕等.正交試驗法研究艷山姜揮發(fā)油保護(hù)脂多糖誘導(dǎo)HUVEC損傷的活性組分[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2014. 20（20）：9-12.

[6]陶玲等.艷山姜果實揮發(fā)油對離體家兔胸主動脈條收縮性能的影響[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2010，30（23）：1966～1969.

[7]國家藥典委員會，中華人民共和國藥典2015年版.四部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：203.