前梯度蛋白2在食管鱗癌組織中的表達及其與預后的相關性

杜永紅，崔園園，李晟磊

(1.鄭州大學基礎醫學院病理學系，河南 鄭州 450001；2.鄭州大學第一附屬醫院病理科，河南 鄭州 450052)

食管癌是常見的惡性腫瘤，由于腫瘤侵襲的特性及缺乏有效的個體治療方法，食管癌患者5 a生存率僅為36%～47%，尋找新的分子靶點對于改善食管癌患者的預后具有十分重要的價值[1]。前梯度蛋白2(anterior gradient-2,AGR2)屬于蛋白質二硫鍵異構酶家族成員之一，有助于腫瘤的存活、促進腫瘤的進展和惡性轉化，可能成為腫瘤新的預后因子及潛在的治療靶點[2]。本研究采用免疫組織化學的方法，研究AGR2在食管鱗癌組織中的表達，并探討其與食管鱗癌患者臨床病理特征及預后的關系，為AGR2用于靶向治療提供依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料收集2015年4月至2018年9月鄭州大學第一附屬醫院收治的經病理學確診的97例食管鱗癌標本和對應的97例正常食管上皮組織，總結患者臨床理學特征。

1.2 指標檢測手術標本經質量分數4%中性甲醛固定、常規脫水、石蠟包埋、4 μm切片，HE染色光鏡檢查。免疫組織化學采用Envision二步法。AGR2抗體(小鼠單克隆抗體)購于美國Santa Cruz公司。

1.3 判讀標準AGR2染色的陽性信號呈棕黃色，主要定位于細胞質，隨機選取5個高倍視野，對每個視野計數不少于200個染色細胞，按如下標準計數：1)染色深淺的判定標準：無顯色(0分)；呈淺黃色(1分)；呈現棕黃色(2分)；呈現棕褐色(3分)；2)陽性細胞數的判定標準如下：陽性細胞數的比率<5%(0分)；5%～<25%(1分)；25%～<50%(2分)；50%～<75%(3分)；≥75%(4分)；3)將染色深淺和陽性細胞數的百分比相乘，這一結果即是每張切片染色的最終分值，具體的判定標準為：分值為0～1分為陰性(-)，分值為2～3分為弱陽性(+)，分值≥4分為陽性(++)，其中后兩者均記為陽性。

1.4 隨訪電話隨訪主要隨訪方式，隨訪終止為出現由食管癌導致的相關死亡。

1.5 統計學處理采用SPSS 17.0進行統計學處理，免疫組織化學結果比較用χ2檢驗，AGR2蛋白表達與食管鱗癌患者預后之間的關系用log rank檢驗進行分析。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 AGR2蛋白在食管鱗癌組織和正常食管上皮組織中的表達AGR2定位于腫瘤細胞的細胞質中(圖1)，其在食管鱗癌組織中的陽性率(82/97，84.5%)顯著高于對應的正常食管上皮組織(11/97，11.3%)，差異有統計學意義(χ2=104.115，P<0.05，表1)。

圖1 AGR2在食管鱗癌(A)和正常食管上皮(B)組織中的陽性表達(IHC，×200)

表1 AGR2在食管鱗癌和正常食管上皮組織中的表達

2.2 AGR2蛋白的表達與食管鱗癌患者臨床病理學特征之間的關系AGR2蛋白表達與食管鱗癌患者的性別和年齡無關(P均>0.05)，但與分化程度、臨床分期以及淋巴結轉移密切相關(P均<0.05，表2)。

2.3 AGR2與食管鱗癌患者預后之間的關系AGR2高表達的食管鱗癌患者的生存時間顯著短于AGR2低表達者，差異有統計學意義(P<0.05，圖2)。

3 討論

食管癌是世界范圍第8常見的惡性腫瘤，每年估計有450 000例新發病例和400 000例死亡病例,以鱗癌多見。目前有多種治療手段，但由于腫瘤侵襲的特性及缺乏有效的個體治療方法，患者的預后差[1]。

AGR首次在爪蟾中被鑒定，根據其在早期發育階段特異的表達模式而命名[3]。人類的AGR2主要高表達于肺、胃、結腸、前列腺和小腸組織中，這些組織包含黏液分泌的細胞。AGR2定位于染色體7p21.3區域，由8個外顯子和9個轉錄本構成[4]。Pohler等[5]證實了AGR2作為存活因子，可在DNA損傷后通過抑制p53的磷酸化減弱p53的活性，提示AGR2與腫瘤的發生發展密切相關。研究[6]表明，當細胞缺氧的環境中，促進生存、血管生成、遷移或侵襲的基因被激活。AGR2就屬于這樣一類基因。目前，AGR2的過表達已經在多種不同的腫瘤中被報道，其過表達能促進腫瘤的進展和惡性轉化。最為重要的是，AGR2作為潛在的診斷標志也已經在一些腫瘤中被證實，并可能成為腫瘤新的預后因子[7-8]。這些研究充分表明，AGR2可能在多種腫瘤的發生、發展、進展和轉移中發揮重要的作用，因而可能成為許多腫瘤潛在的分子治療靶點和預后因子。

表2 AGR2蛋白的表達與食管鱗癌患者臨床病理學之間的關系

圖2 AGR2蛋白的表達與食管鱗癌患者預后之間的關系

大多數研究認為AGR2在腫瘤的發生、發展過程中發揮癌基因的功能。Chung等[9]研究表明，AGR2在肺腺癌組織中上調9.9倍，能選擇作為潛在肺腺癌的生物學標記，最為顯著的是，AGR2在肺腺癌患者中的陽性率高達94%，陰性的AGR2表達與患者低的生存率密切相關(P=0.007)。Pizzi等[10]研究發現，AGR2 mRNA在鱗癌組織中顯著上調，并且其蛋白表達與mRNA表達趨勢具有一致性。Tsuji等[11]研究表明胞外AGR2能激活基質成纖維細胞，促進胃印戒細胞癌成纖維細胞相關腫瘤的侵襲。通過cDNA微陳列、免疫組織化學和組織芯片技術檢測胰腺癌組織中AGR2的表達，發現前列腺癌組織中具有高水平AGR2表達[12-13]。這些研究均表明AGR2在腫瘤發生、發展中有重要作用。本研究采用免疫組織化學方法研究了AGR2在食管鱗癌以及正常食管黏膜組織中的表達，我們發現AGR2在食管鱗癌組織中的表達顯著高于正常食管上皮。這說明AGR2與食管鱗癌的發生密切相關。我們還發現，AGR2的表達與患者的分化程度、臨床分期和淋巴結轉移相關，并且高表達AGR2的食管鱗癌患者的生存時間顯著低于低表達AGR2的食管鱗癌患者。這提示AGR2可以作為一個預測食管鱗癌患者預后的指標。

總之，AGR2在食管鱗癌組織中表達顯著上調，并且患者的分化程度、臨床分期、淋巴結轉移以及預后相關，這提示AGR2在食管鱗癌的發生、發展中發揮重要的作用。因此，抑制AGR2的表達可能成為未來食管鱗癌分子靶向治療潛在的靶點。對于AGR2在食管鱗癌組織中高表達的機制，尚需要進一步的研究。