芫荽愈傷組織分化及細胞培養試驗研究

[摘 要] 為了防止芫荽因天氣情況造成大量減產，提高芫荽產量，保證市場供求平衡，可采用組織培養方法培育芫荽。根據芫荽易于組織培養、易于誘導胚狀體這一特點，本文對芫荽的愈傷組織進行分化及細胞培養，以期培育出優質高產芫荽。

[關鍵詞] 芫荽;愈傷組織;分化;細胞培養

[中圖分類號] S636 [文獻標識碼] B [文章編號] 1674-7909（2019）02-87-2

芫荽（Coriandrum satium L.），又名胡荽，俗稱香菜，是雙子葉草本植物[1]。植物基因型不同，組織培養的難易程度不同，如草本植物易于木本植物，雙子葉植物易于單子葉植物[2]。組織培養的再生途徑受植物基因型影響，芫荽易于誘導胚狀體[3]。2018年，我國部分芫荽主產區皆因為天氣原因導致芫荽收成不好，多地芫荽還未收割就已經爛在地里，而芫荽市場需求旺盛，供求關系的不平衡導致各地芫荽價格一路飆升，人們甚至將芫荽戲稱為“芫荽礦”。進行芫荽組織培養可以使芫荽避免自然生長過程中受到天氣原因的影響，具有一定的現實意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗儀器。恒溫光培養箱、立體壓力蒸汽滅菌器、SW-CJ-2F型雙人雙面凈化工作臺（超凈工作臺）、分析天平、大燒杯（1 000 mL）、容量瓶、玻璃棒、三角瓶、培養基、電爐、無菌紙、解剖刀、鑷子、刀片、若干燒杯、封口膜、牛皮紙、pH試紙、量筒、試劑瓶、刻度吸管、洗瓶、洗耳球、移液管、一次性手套和標簽紙。

1.1.2 試驗試劑。CuSO4·5H2O、NH4NO3、KNO3、MgSO4·7H2O、Na2EDTA、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、FeSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CoCl2·6H2O、CaCl2·2H2O、ZnSO4·7H2O、甘氨酸、煙酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、肌醇、蔗糖、2，4-D、6-KT、瓊脂粉、NaOH、HCl、無水乙醇、NaClO溶液和蒸餾水。

1.1.3 試驗材料。本試驗將芫荽作為試驗材料。

1.2 試驗方法

首先，配置MS培養基。按照表1配方稱量各試劑置于大燒杯中，在其中加入1.0 mg/L KT和1.5 mg/L 2，4-D和0.7%瓊脂（瓊脂粉3.5 g），用少量的1 mol/L HCl和NaOH調節pH值至6.5，定容至500 mL，在電爐上加熱并充分攪拌使瓊脂粉和培養基溶解。其次，制備無菌水，將240 mL蒸餾水加入250 mL三角瓶中。再次，對培養基、無菌水與接種用具進行滅菌，芫荽的表面消毒在超凈工作臺上進行，先用75%酒精消毒表面2～3 min，并用無菌水沖洗，然后用0.1%NaClO溶液浸泡1～2 min，最后用無菌水沖洗數次。然后，切取芫荽主枝和葉子之間易于誘導分化的葉柄0.5 cm接種于6組已滅菌的培養基表面，分別標號1～6號，方便分析試驗結果，其中4號接種了2個葉柄。最后，將接種后的培養基放于恒溫培養箱內培養，溫度控制在20～25 ℃，光照強度控制在1 500～2 000 lx，每天光照10 h。

2 結果與分析

2.1 結果

1號和2號三角甁出現相同情況，輕微長菌且為白色，有些輕微透明，表面光滑，濕潤易挑取，但菌落污染不明顯。3號和4號三角瓶大面積長菌，其中3號周圍培養基布滿淡粉色菌落，且菌落連成片，再者淡粉色之外有白色菌落，有3個菌落較大、較明顯，淡粉色和白色菌落表面都光滑，濕潤易挑取，且葉柄由一開始的鮮綠色變為黃色發輕微的黑色。另外，4號三角瓶接種了2個葉柄，一個周圍沒有長滿菌落，且長勢為青色，長勢良好，但另外一個周圍大面積長滿白色菌落，且該白色菌落和2號與3號有很大不同，該菌落表面粗糙，長有菌絲，干燥且不易挑取，葉柄發黑比較嚴重且有發霉的跡象，該三角瓶是最早長菌的。對于沒有污染的5號和6號三角瓶，觀察到在切口處出現淡黃綠色的愈傷組織，接種的葉柄有些變黃。

2.2 分析

試驗中出現3種菌落污染，原因可能是在無菌操作時不夠嚴謹，導致細菌污染。觀察到5號和6號在切口處出現淡黃綠色愈傷組織，原因可能是切口處太小，肉眼對顏色辨別不準確，或者細胞分裂素與生長素的配比偏低，或者培養時間不夠。因高壓滅菌不徹底，芽孢桿菌是細胞污染中數量最多的，1～3號均為細菌污染。本試驗接種后4 d出現菌絲，為真菌污染，繼而很快出現白色孢子，其中4號最先出現的菌落污染為真菌中的霉菌污染[4]。

由此可知，對芫荽的愈傷組織進行分化及細胞培養可以實現，而要想培育出優質品種，還需要進一步完善實驗過程，盡量消除培養過程中可能會出現的細菌和真菌污染，進而可以進行大規模生產。

參考文獻

[1]嚴玉華.香菜的營養與藥膳食療[J].醫藥與保健，2007（11）：61-62.

[2]滕春喜.甜菜M14單體附加系的組織培養[D].哈爾濱：黑龍江大學，2007.

[3]馬珂馨.藍百合組織培養再生體系的建立[D].哈爾濱：東北林業大學，2007.

[4]連榮芳.馬鈴薯組織培養中常見的污染類型及防治措施[C]//中國作物學會馬鈴薯專業委員會年會，2004.