血漿miRNA-126表達與妊娠期高血壓疾病的相關性分析

何曉焱 彭詩寒 趙磊 羅玉萍 劉霞

[摘要] 目的 研究血漿miRNA-126表達與妊娠期高血壓疾病的相關性。 方法 選取2015年2月～2018年2月四川省瀘州市人民醫院診治的妊娠高血壓疾病患者93例作為研究對象，并將其按照疾病進行分組。其中妊娠期高血壓組30例，輕度子癇前期組29例，重度子癇前期組34例。另取同期體檢的健康妊娠婦女20名作為對照組。分別采用逆轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）技術檢測各組研究對象的血漿miRNA-126表達情況;同時比較各組收縮壓、舒張壓、24 h蛋白尿水平，并將其與miRNA-126表達進行相關性分析。 結果 與對照組比較，妊娠期高血壓組血漿miRNA-126表達下調，而輕度子癇前期組血漿miRNA-126表達低于妊娠期高血壓組，重度子癇前期組血漿miRNA-126表達低于輕度子癇前期組，差異均有統計學意義（P < 0.05）。妊娠期高血壓組收縮壓、24 h蛋白尿水平均明顯高于對照組;輕度子癇前期組收縮壓、24 h蛋白尿水平高于妊娠期高血壓組;重度子癇前期組收縮壓、24 h蛋白尿水平高于輕度子癇前期組;對照組舒張壓水平低于妊娠期高血壓組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組，差異均有統計學意義（P < 0.05）。經Spearman相關性分析，妊娠期高血壓疾病患者miRNA-126基因表達與其收縮壓、舒張壓、24 h蛋白尿水平均呈負相關（r = -0.583、-0.626、-0.611、均P < 0.05）。 結論 妊娠期高血壓疾病患者血漿miRNA-126表達明顯下調，且隨著病情的逐漸加重，血漿miRNA-126表達下調越明顯。血漿miRNA-126表達下調可能在妊娠期高血壓疾病的發生、發展過程中發揮著至關重要的作用。

[關鍵詞] 妊娠期高血壓疾病;miRNA-126;血漿;輕度子癇前期;重度子癇前期

[中圖分類號] R714.246? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）03（b）-0076-04

妊娠期高血壓疾病主要是指特發于女性妊娠期的一種疾病，其具體病因尚未完全明確，發病率在所有妊娠婦女中為7%～15%[1]。有研究報道[2]顯示，妊娠期高血壓疾病是導致妊娠婦女死亡的第二大原因，其導致的妊娠婦女死亡比例占所有妊娠相關死亡人數的10%～16%，對妊娠婦女以及新生兒的生命健康安全造成了嚴重影響。該病主要是發生在妊娠20周后，臨床主要表現為血壓升高，可伴有蛋白尿以及多臟器損傷。如不給予及時有效的治療，隨著病情日益加重，患者會出現抽搐、昏迷、心力衰竭、腦出血以及死亡等[3]。內皮祖細胞功能紊亂是導致子癇前期內皮細胞損失的基礎，其中miRNA-126在內皮細胞中存在明顯高表達，在血管的新生及維持血管完整性中發揮著至關重要的作用。另有研究[4]表明，miRNA-126可通過增強血管的內皮生長因子及成纖維細胞生長因子的血管新生作用，同時可通過調節控制多種基因的表達介導血管發育、血管新生以及血管炎性反應等生理、病理過程。鑒于此，本研究探討了血漿miRNA-126表達與妊娠期高血壓疾病的相關性，以期為臨床診治提供數據指導，現作以下報道：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年2月～2018年2月四川省瀘州市人民醫院（以下簡稱“我院”）診治的妊娠期高血壓疾病患者93例作為研究對象。納入標準：①所有患者均為首次妊娠;②均符合第7版《婦產科與內科學》教材所制訂的相關診斷標準[5];③年齡>18歲;④入院前未接受任何相關治療。排除標準：①伴有其他產科并發癥或合并癥者;②合并高血壓病3級或繼發性高血壓者;③存在心、肝、腎等臟器功能嚴重障礙者。參照診斷標準[5]將所有妊娠期高血壓疾病患者進行分組，妊娠期高血壓組：妊娠20周后血壓高于140/90 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），且血壓在產后12周內恢復正常;輕度子癇前期組：妊娠20周后血壓高于140/90 mmHg，且伴有蛋白尿≥0.3 g/2 h或隨機蛋白尿弱陽性，且血壓在產后12周內恢復正常;重度子癇前期組：妊娠20周后血壓高于160/110 mmHg，蛋白尿≥2.0 g/2 h或隨機蛋白尿陽性，且血壓在產后12周內水平恢復正常。其中妊娠期高血壓組30例，年齡24～37歲，平均（30.41±5.88）歲;孕齡37～41周，平均（38.76±1.20）周。輕度子癇前期組29例，年齡25～38歲;平均（29.04±6.23）歲;孕齡37～41周，平均（37.59±1.83）周。重度子癇前期組34例，年齡22～38歲，平均（29.11±6.28）歲;孕齡36～41周，平均（37.44±1.80）周。另取同期于我院進行體檢的健康妊娠婦女20名作為為對照組，年齡22～38歲，平均（28.48±6.33）歲;孕齡37～42周，平均（38.01±1.75）周。各組年齡、孕齡等情況比較，差異無統計學意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 方法

分別采用逆轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）技術檢測各組研究對象血漿miRNA-126表達情況，具體方式如下：分別采集各組研究對象清晨空腹靜脈血10 mL，將其注入乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管，并于1 h內以4℃、3000 r/min離心10 min，提取血漿轉移至新的EP管中。以16 000 g離心10 min，轉移至EP管中保存于-80℃冰箱中待檢。采用QIAGEN公司的miRNeasy Serum/Plasma Kit總RNA提取試劑盒提取血漿總RNA，采用Thermo生物分光光度計測定RNA樣品OD260/OD280的值，初步判斷RNA純度。參照GeneBank數據庫中的相關序列設計miRNA-126引物，以U6為參照基因。采用莖-環逆轉錄熒光技術進行定量PCR，內參為小核RNA U6。其中miRNA-126引物序列如下：上游引物：5′-GTCCGCTCGTACCGTGAGTAATA-3′，下游引物：5′-GTGCGTGTCGTGGAGTC-3′。采用逆轉錄試劑盒（購自美國TAKARA公司）進行逆轉錄反應，其中反應條件為37℃，30 min;75℃，5 min，獲取逆轉錄產物后馬上根據RT-PCR試劑盒（購自美國TAKARA公司）進行檢測，具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行，每個逆轉錄產物樣本檢測3次，循環閾值（Ct值）取平均值，配成20 μL的反應體系，其中PCR參數如下：95℃ 預變性15 min，94℃變性20 s，60℃退火34 s，72℃延伸60 s，40個循環。實驗重復3次。采用2-△△Ct法計算miRNA-126的相對表達量。

1.3 觀察指標

比較各組miRNA-126基因表達水平，同時比較各組收縮壓、舒張壓、24 h蛋白尿水平，并將其與miRNA-126基因表達水平進行相關性分析。收縮壓、舒張壓、24 h蛋白尿水平采用全自動生化分析儀進行檢測。

1.4 統計學方法

采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析;相關性采用Spearman相關性分析。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組miRNA-126基因表達、收縮壓、舒張壓、蛋白尿水平比較

與對照組比較，妊娠期高血壓組血漿miRNA-126表達明顯下調，而輕度子癇前期組血漿miRNA-126表達低于妊娠期高血壓組，重度子癇前期組血漿miRNA-126表達低于輕度子癇前期組，差異均有統計學意義（P < 0.05）;妊娠期高血壓組收縮壓、24 h蛋白尿水平均明顯高于對照組，輕度子癇前期組收縮壓、24 h蛋白尿水平高于妊娠期高血壓組，重度子癇前期組收縮壓、24 h蛋白尿水平高于輕度子癇前期組;對照組舒張壓水平低于妊娠期高血壓組、輕度子癇前期組、重度子癇前期組，差異均有統計學意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 相關性分析

經Spearman相關性分析可知，妊娠期高血壓疾病患者miRNA-126基因表達與收縮壓、舒張壓、蛋白尿水平均呈負相關（r = -0.583、-0.626、-0.611，均P < 0.05）。

3 討論

妊娠期高血壓疾病可能是多種復雜因素共同作用導致的結果，其中主要因素包括免疫調節功能紊亂、遺傳因素、營養因素、母體內病理改變以及胎盤結構與胎兒發育異常等[6-10]。隨著相關研究的逐漸深入，越來越多的學者認為妊娠期高血壓疾病屬于一種血管內皮細胞疾病，且與血管的形成、血管完整性以及血管損傷存在密切相關[11-13]。另有研究[14-15]顯示，miRNA-126在內皮細胞中呈現高表達，其可促進血管新生，同時對維持內皮細胞穩態與血管的完整性起著至關重要的作用。

本研究發現，與對照組比較，妊娠期高血壓組血漿miRNA-126表達較低，而輕度子癇前期組血漿miRNA-126表達低于妊娠期高血壓組，重度子癇前期組血漿miRNA-126表達低于輕度子癇前期組，差異均有統計學意義（P < 0.05），這與既往研究[16-17]相符，提示血漿miRNA-126可能在妊娠期高血壓疾病的發生、發展過程中起著至關重要的作用。分析原因，筆者認為血漿miRNA-126可能是通過以下途徑參與妊娠期高血壓疾病的發生、發展：①血漿miRNA-126可能參與子宮螺旋動脈重鑄異常，從而導致母胎界面血壓供應缺乏，促使胎盤有效灌注降低，造成胎盤局部組織缺血、缺氧，進一步促進了異常胎盤結構的形成，繼而導致血管炎癥反應與內皮細胞功能障礙，并最終引發妊娠期高血壓疾病。②在miRNA-126表達下調時，其靶基因SPRED與PI3KR2均呈過表達狀態，從而會對絲裂原活化蛋白激酶與磷脂酰肌醇-3-激酶信號途徑產生較明顯的抑制作用，進一步影響血管新生因子信號的傳遞，兩者共同作用導致血管生成受阻、血液供應不足，導致處于氧化應激狀態下的母胎界面形成，并相互影響造成惡性循環，從而促使母體血液循環緩慢進入胎盤釋放部分細胞碎片，最終引起全身免疫反應，導致妊娠期高血壓疾病的發生。目前，臨床上已有不少研究報道[18-21]證實收縮壓、舒張壓、24 h蛋白尿水平是臨床上評價妊娠期高血壓疾病的金標準。經Spearman相關性分析可知，妊娠期高血壓疾病患者miRNA-126基因表達與收縮壓、舒張壓、尿蛋白水平均呈負相關（r = -0.583、-0.626、-0.611，均P < 0.05）。這充分證明了上述結果，并提示miRNA-126可能在妊娠期高血壓的發生、發展過程中起著至關重要的作用。臨床上可通過聯合檢測血漿miRNA-126與收縮壓、舒張壓、24 h蛋白尿水平，從而對妊娠期高血壓患者病情進行準確評估[22-24]。

綜上所述，妊娠期高血壓疾病患者血漿miRNA-126表達存在明顯下調，且隨著病情的逐漸加重，血漿miRNA-126表達下調越明顯。血漿miRNA-126表達下調可能在妊娠期高血壓疾病的發生、發展過程中發揮著至關重要的作用。

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（收稿日期：2018-08-03? 本文編輯：王? ?蕾）