卵巢子宮內(nèi)膜異位癥患者BDNF、CA125水平檢測及其診斷價(jià)值分析

李紅霞 孟憲寧 霍志平 吳亞男 王宏利 郝媛媛

[摘要] 目的 探究卵巢子宮內(nèi)膜異位癥患者的腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）、糖類抗原125（CA125）水平變化及其診斷價(jià)值。 方法 選擇2017年2月～2018年6月中國石油天然氣總公司中心醫(yī)院（以下簡稱“我院”）婦產(chǎn)科收治的78例卵巢子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）患者作為EMs組，另選擇同期在我院進(jìn)行常規(guī)體檢的50例健康女性作為對照組。比較兩組患者以及不同r-AFS病理分期患者的BDNF表達(dá)情況及血清CA125水平，分析卵巢EMs發(fā)病、r-AFS病理分期與BDNF表達(dá)、血清CA125水平的相關(guān)性，計(jì)算BDNF、CA125單項(xiàng)檢測以及聯(lián)合檢測在診斷卵巢EMs中的診斷效能。 結(jié)果 EMs組患者的BDNF表達(dá)及血清CA125水平均明顯高于對照組（P < 0.05）。不同r-AFS病理分期患者的BDNF表達(dá)及血清CA125水平存在顯著差異（P < 0.05），BDNF表達(dá)、血清CA125水平隨著r-AFS病理分期的增高而明顯升高。BDNF表達(dá)及血清CA125水平與卵巢EMs發(fā)病、r-AFS病理分期均呈明顯正相關(guān)性（P < 0.05）。BDNF、CA125聯(lián)合檢測診斷卵巢EMs的敏感度、特異度和準(zhǔn)確率分別為98.72%、100.00%和99.22%，明顯高于BDNF、CA125單項(xiàng)檢測（r > 0.7，P < 0.05）。 結(jié)論 BDNF表達(dá)及血清CA125水平的異常升高與卵巢EMs的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，BDNF、CA125水平聯(lián)合檢測有助于卵巢EMs的分期診斷和病情評估。

[關(guān)鍵詞] 卵巢子宮內(nèi)膜異位;r-AFS分期;腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子;糖類抗原125

[中圖分類號] R737.31;R711.71? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）03（b）-0080-04

病理活檢是診斷卵巢子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）的“金標(biāo)準(zhǔn)”[1～3]，但其屬于有創(chuàng)檢查，且檢查過程比較繁復(fù)。相關(guān)研究[4]發(fā)現(xiàn)，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）在多種惡性腫瘤中存在高表達(dá)，卵巢EMs盡管屬于良性病變，但也具有侵襲性強(qiáng)、復(fù)發(fā)性高等類似惡性腫瘤的生物學(xué)行為。糖類抗原125（CA125）是一種與卵巢癌相關(guān)的糖類蛋白，其在卵巢EMs患者發(fā)病時(shí)會顯著升高，因此常作為輔助診斷卵巢EMs的參考指標(biāo)[5]。本研究對卵巢EMs患者的BDNF、CA125水平進(jìn)行檢測，分析、探討其診斷價(jià)值，旨在為卵巢EMs的早期診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年2月～2018年6月中國石油天然氣總公司中心醫(yī)院（以下簡稱：“我院”）婦產(chǎn)科收治的78例卵巢EMs患者作為研究對象，將其作為EMs組，年齡21～40歲，平均（31.58±5.12）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理學(xué)明確診斷為卵巢EMs[6];②月經(jīng)周期正常;③卵巢子宮內(nèi)膜分離簡單、徹底。排除標(biāo)準(zhǔn)：①卵巢、子宮發(fā)育異常者;②近6個(gè)月內(nèi)服用激素或其他影響月經(jīng)周期藥物者;③合并有血液系統(tǒng)疾病、心腦血管疾病、惡性腫瘤、肝腎功能不全者。選擇同期在我院行常規(guī)體檢的50名健康女性作為對照組，所有入選者經(jīng)婦科、超聲檢查未見異常，年齡20～41歲，平均（31.49±5.08）歲。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)，所有受檢者均對本研究均知情同意并簽署了知情同意書。兩組患者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 BDNF的測定? EMs組患者取卵巢異位病灶組織，對照組受檢者取子宮內(nèi)膜組織，獲取樣本組織后采用10%福爾馬林緩沖液固定，石蠟包埋組織塊后連續(xù)切片（片厚4 μm），其后進(jìn)行免疫組化染色。

以已知陽性標(biāo)本為陽性對照，磷酸緩沖鹽溶液（PBS）代替一抗為陰性對照。石蠟切片行常規(guī)脫蠟、水化后采用乙二胺四乙酸（EDTA）修復(fù)液（pH=9.0）進(jìn)行高溫高壓抗原修復(fù)，滴加50 μL內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑阻斷10 min，滴加兔抗人BDNF單克隆抗體（abcam108319，以1∶200的濃度進(jìn)行稀釋）后在室溫環(huán)境下孵育1 h，滴加50 μL生物素標(biāo)記的羊抗鼠/兔IgG孵育10 min，滴加50 μL鏈霉素抗生物蛋白-過氧化酶孵育10 min，在DAB顯微鏡下觀察顯色，自來水沖洗，蘇木精復(fù)染，鹽酸酒精分化，自來水沖洗反藍(lán)，脫水透明，封片。

BDNF主要在上皮細(xì)胞或腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)中表達(dá)，陽性效應(yīng)產(chǎn)物為黃色或棕黃色顆粒。免疫組化染色后將切片置于400倍光鏡的光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察，隨機(jī)選擇5個(gè)具有上皮細(xì)胞或腺上皮細(xì)胞的高倍鏡視野進(jìn)行圖像采集。采用組織化學(xué)評分（H-score）法[7][H-score=∑Pi（i+1）]對不同組織切片中的BDNF表達(dá)進(jìn)行評價(jià)，其中i表示細(xì)胞染色強(qiáng)度，不著色為0分，黃色、淺棕色為1分，棕色為2分，棕褐色為3分;Pi表示每種染色強(qiáng)度細(xì)胞所占比例，波動范圍為0%～100%，每張切片的H-score最終分值為5個(gè)高倍鏡視野評分的平均值，以H-score分值≥2分為陽性[8]。

1.2.2 CA125檢測? 兩組均于非月經(jīng)期清晨抽取空腹肘部靜脈血5 mL，靜置在室溫環(huán)境下自動凝固，以3500 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，分離血清，放置在-20℃的環(huán)境下保存，待測。采血當(dāng)日應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）對血清CA125水平將進(jìn)行測定，儀器為羅氏COBA8000化學(xué)發(fā)光儀，試劑盒為羅氏公司配套提供，檢測過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，CA125>35 U/mL時(shí)為陽性[9]。

1.3 觀察指標(biāo)

比較BDNF在EMs組患者卵巢異位病灶及對照組受檢者子宮內(nèi)膜中的表達(dá)情況，并比較兩組的血清CA125水平;比較不同r-AFS病理分期患者的BDNF表達(dá)及血清CA125水平情況;分析卵巢EMs發(fā)病及不同r-AFS病理分期與BDNF表達(dá)、血清CA125水平的相關(guān)性，計(jì)算并比較BDNF、CA125單項(xiàng)檢測與兩者聯(lián)合檢測在診斷卵巢EMs上的診斷效能。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn);相關(guān)性檢驗(yàn)采用Pearson相關(guān)分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組BDNF表達(dá)及血清CA125水平比較

本研究采用H-score法對不同組織切片中的BDNF表達(dá)進(jìn)行評價(jià)。EMs組患者的H-score評分、血清CA125水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 不同r-AFS病理分期患者的BDNF表達(dá)及血清CA125水平情況比較

不同r-AFS病理分期患者的BDNF表達(dá)及血清CA125水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），BDNF在卵巢異位病灶中的表達(dá)以及血清CA125水平隨著r-AFS病理分期的增大而明顯升高。見表2。

2.3 卵巢EMs發(fā)病及r-AFS病理分期與BDNF、CA125的相關(guān)性

Pearson相關(guān)性分析顯示，卵巢EMs發(fā)病、r-AFS病理分期與BDNF表達(dá)以及血清CA125水平均呈明顯正相關(guān)（P < 0.05）。

2.4 BDNF、CA125單項(xiàng)及其聯(lián)合檢測在卵巢EMs診斷中的診斷效能比較

BDNF、CA125聯(lián)合檢測診斷卵巢EMs的敏感度、特異度和準(zhǔn)確率分別為98.72%、100.00%和99.22%，明顯高于BDNF、CA125單項(xiàng)檢測，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。

3 討論

卵巢EMs既有惡性腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等特點(diǎn)，又有生長限制性的本質(zhì)差異[9-10]。卵巢EMs的發(fā)病機(jī)制目前尚未明確，且部分患者臨床表現(xiàn)不典型，缺乏特異性，難以做到早期診斷。病理活檢作為診斷卵巢EMs的“金標(biāo)準(zhǔn)”，盡管能夠?qū)β殉睧Ms做出明確診斷，但是其屬于有創(chuàng)檢查，且檢查過程比較繁復(fù)[11]。尋求一種簡便易行、創(chuàng)傷小、診斷準(zhǔn)確性高的檢查手段對于及早診斷、及時(shí)治療卵巢EMs非常必要[12]。

卵巢EMs發(fā)生時(shí)，病灶表面和周圍存在大量的新生血管，新生血管的生成是其病情進(jìn)展的關(guān)鍵步驟[13]。BDNF作為神經(jīng)營養(yǎng)因子家族中的重要成員，其通過與其受體TrKB結(jié)合促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞中蛋白激酶B（AKT）的磷酸化[14-15]，進(jìn)而促進(jìn)血管形成，并在神經(jīng)纖維的生長、存活和分化以及腫瘤發(fā)生、軀體內(nèi)臟疼痛和高敏感性中發(fā)揮重要作用。

r-AFS病理分期作為目前臨床上最為常見的卵巢EMs分期標(biāo)準(zhǔn)，主要是依據(jù)卵巢異位病灶的大小、浸潤程度、黏連程度及范圍等項(xiàng)目進(jìn)行量化分級，能夠比較準(zhǔn)確地體現(xiàn)卵巢EMs的病變情況及嚴(yán)重程度[16]。本研究結(jié)果顯示，BDNF在EMs組患者卵巢異位病灶中的表達(dá)明顯高于其在健康女性子宮內(nèi)膜中的表達(dá)，且不同r-AFS病理分期患者間的BDNF表達(dá)也存在顯著差異，r-AFS病理分期越高，其BDNF表達(dá)越高。提示BDNF可能參與了卵巢EMs的發(fā)生和發(fā)展，其高表達(dá)可能進(jìn)一步促進(jìn)了子宮內(nèi)膜在異位種植過程中的失巢凋亡抑制、促進(jìn)細(xì)胞侵襲、增殖以及新生血管的生成[17-18]，導(dǎo)致異位病灶不斷形成、加重，而異位病灶可繼續(xù)合成BDNF，從而形成惡性循環(huán)。

CA125是一種體腔上皮細(xì)胞分泌的高分子糖蛋白表面抗原，普遍認(rèn)為是卵巢腫瘤的標(biāo)志物之一，其血清水平變化與子宮內(nèi)膜發(fā)育密切相關(guān)[19-21]。正常情況下，子宮內(nèi)膜分泌的CA125幾乎不能通過腹膜屏障，然而當(dāng)子宮內(nèi)膜出現(xiàn)異位種植時(shí)，盆腔腹膜屏障受損，大量CA125進(jìn)入機(jī)體血液循環(huán)，血清CA125水平顯著提升[22]。本研究結(jié)果顯示，EMs組患者的血清CA125水平明顯高于同期健康女性，且EMs組患者的血清CA125水平隨著r-AFS病理分期的增大而明顯升高。提示血清CA125水平與卵巢EMs的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)，血清CA125水平隨著卵巢EMs病理分期的嚴(yán)重性增加而升高，可將其作為評估卵巢EMs病情的客觀指標(biāo)[23-25]。

本研究通過Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，BDNF表達(dá)及血清CA125水平與卵巢EMs發(fā)病、分期均呈明顯正相關(guān)（r > 0.7，P < 0.05）。BDNF、CA125聯(lián)合檢測診斷卵巢EMs的敏感度、特異度和準(zhǔn)確率分別為98.72%、100.00%和99.22%，明顯高于BDNF（分別為89.74%、90.00%、89.84%）、CA125單項(xiàng)檢測（分別為88.46、86.00%、87.50%）。BDNF表達(dá)以及血清CA125水平可作為診斷、評估卵巢EMs子宮內(nèi)膜異位種植增生的可靠指標(biāo)。

綜上所述，卵巢EMs發(fā)生時(shí)患者的BDNF表達(dá)和血清CA125水平異常升高，BDNF、CA125可能參與了卵巢EMs的發(fā)生、發(fā)展，BDNF、CA125水平聯(lián)合檢測結(jié)果可作為參考指標(biāo)用于卵巢EMs的分期診斷和病情評估。

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（收稿日期：2018-07-23? 本文編輯：王? ?蕾）