宋智琴, 楊平飛, 劉 海, 羅 鳴, 夏 與, 吳明開*
(1.貴州省農業科學院 現代中藥材研究所, 貴州 貴陽 550006; 2.安龍縣欣蔓生物科技有限責任公司, 貴州 安龍 552400)
白及(Bletillastriata)是蘭科白及屬多年生草本植物,以干燥塊莖入藥,為歷版《中國藥典》收載,屬于我國傳統名貴的中藥,具有收斂止血,消腫生肌的功效,臨床上用于咯血、吐血,外傷出血,瘡瘍腫毒,皮膚皸裂等[1],又因其花色艷麗,也是一種很好的景觀植物。現代醫學研究表明,白及具有抗菌、抗腫瘤、抗潰瘍等作用[2-6],除在醫藥領域具有其他藥物不可替代的作用之外,還廣泛應用于食品工業、煙草工業、化工行業( 包括高檔美容產品)[7-12]等,其用途廣泛。因其無可替代的神奇療效和廣泛的用途導致了白及的市場需求量越來越大,市場主要依靠野生資源進行供應,導致白及野生資源破壞嚴重。中國植物物種信息數據庫將其列為國家重點野生植物名錄。為滿足龐大的市場需求,利用組織培養種球建設規范化白及種植基地是解決白及市場供需矛盾唯一出路。而今,白及經過種子無菌萌發獲得白及組織培養種莖的技術已經成熟,白及組織培養種莖移栽大田技術也得到突破,白及已經步入開展規模化人工種植之路。中藥材屬于特殊商品,種植采收后的產地初加工技術直接關系到后續的貯藏和臨床應用效果,影響著藥材的質量,是藥材發展產業鏈中重要環節。白及在產地加工中,藥農根據自己的加工習慣和銷售需求,有的直接烘干或曬干,有的隨意的蒸或煮后干燥,有的去皮,有的不去皮等,導致白及的質量參差不齊,從而影響白及的藥用效果。選擇白及適宜的加工貯藏方法對保證珍稀藥材白及的質量具有重要意義。為此,筆者對白及不同產地的加工貯藏方法進行研究,篩選出適宜白及的最佳加工貯藏方法,以期為其產業化發展和促進貴州藥材資源優勢轉化為現實生產力提供科學依據。
白及塊莖:于2016年11月在貴州省現代中藥材研究所資源圃采收。其原植物經貴陽中醫學院鑒定為蘭科白及屬植物白及〔Bletillastriata(Thunb.)Reichb. f.〕。
試劑:D-無水葡萄糖標準物質,中國食品藥品檢定研究院購買,批號:P-012-140730;白及對照品,購買于中國食品藥品檢定研究院,編號121262-201405。
儀器:HP8453型紫外可見分光光度計,101-AB型電熱鼓風干燥箱,賽多利斯電子天平,數顯恒溫水浴鍋(上海梅香儀器有限公司)。
1.2.1樣品處理采收的白及塊莖除去泥土、非藥用部位等雜質,用清水洗凈,控干水分,備用。
1.2.2新鮮塊莖蒸/煮的時間選擇在備用白及中挑選大小均勻者混勻,采用四分法取樣24份,隨機分為8組,每組3個平行試驗設計白及開水沸騰狀態蒸的時間分別為6 min、8 min、10 min和12 min;沸騰狀態煮的時間分別為3 min、5 min、8 min和10 min,經蒸或煮處理后將塊莖最大的白及塊莖沿中心切開,觀察切面情況,判斷蒸透心和煮透心的最佳時間。
1.2.3干燥方法挑選大小均勻的白及,采用四分法取樣27份,隨機分為9組,每組3個平行。隨機取8組按如下方法處理:處理1~4為新鮮塊莖切片分別于30℃、40℃、50℃和60℃烘干;處理5為新鮮塊莖切片曬干;處理6為新鮮塊莖切片陰干;基于新鮮塊莖蒸或煮的時間選擇的試驗結果,處理7為新鮮塊莖煮8~10 min切片60℃烘干,處理8為新鮮塊莖蒸10~12 min切片60℃烘干。《中國藥典》2015版中白及加工需要搓去外皮,故處理9,取樣1組(3份),用刀輕刮外皮,取新鮮塊莖皮,60℃烘干[13-14]。
1.2.4包裝貯存方式將鮮莖切片白及60℃烘干至恒重,隨機取樣12份,每份50 kg,分成4組,分別直接堆放、網袋包裝、塑料袋包裝、編織袋包裝,置于溫度(25±2)℃,濕度(60±5)%條件下,貯存1年。
1.3.1白及折干率和乙醇提取率 折干率:連續3次稱定藥材重量不變時,計算折干率。提取率:取白及塊莖樣品粉末適量,精密稱定,置于具塞錐形瓶中,按1∶10的料液比加75%的乙醇,以80℃恒溫水浴回流提取2次,每次提取1 h,過濾,合并濾液并減壓濃縮后,烘干至恒重,計算白及乙醇提取率。
1.3.2白及多糖的測定
1) 標準葡萄糖溶液的制備。取D-無水葡萄糖標準物適量,精密稱定到1.0 mg,置于10 mL容量瓶中,加適量蒸餾水溶解并定容至刻度,混勻,配制成0.1 g/mL的D-無水葡萄糖溶液。
2) 標準曲線的制備。精密稱取上述D-無水葡萄糖溶液0.1 mL、0.3 mL、0.7 mL和0.9 mL于10 mL容量瓶中,用蒸餾水補至1 mL,精密加入5%苯酚溶液(現配)1 mL,搖勻,精密加入5 mL濃硫酸,立即搖勻,于沸水浴中加熱20 min,冷卻至室溫。以蒸餾水同法制備空白對照,在488 nm處測定吸光度。以吸光度A為縱坐標,濃度C(μg/L)為橫坐標繪制標準曲線,得回歸方程:y=0.058 9x+0.004 5,R2=0.999 7,表明D-無水葡萄糖在1.574~14.152 mg/L濃度范圍內與吸光度呈良好線性關系。
3) 供試品溶液的制備。取白及塊莖樣品粉末適量,精密稱定,置于具塞錐形瓶中,加約80 mL水回流2 h,冷卻至室溫,過濾,濾渣經水少量多次洗滌,洗滌液與濾液合并定容至100 mL,搖勻,從中精密吸取0. 2 mL,加無水乙醇0.8 mL,放入冰箱,次日取出,10 000 r/min離心5 min,沉淀再分別加1 mL 80%的乙醇洗滌2次,同法離心,棄去上清液,低溫干燥,精密加入1 mL水將沉淀轉移至15 mL具塞玻璃試管中,精密加入臨配的5%苯酚水溶液1 mL,搖勻,再精密加入5 mL硫酸,搖勻,于沸水浴中加熱20 min,冷至室溫作為供試品溶液。[15]
4) 樣品含量測定。精密稱取白及塊莖粉末,按1.3.2第3項制備供試品溶液,在488 nm處測定吸光度,每個溶液進樣3次,計算白及多糖含量。
新鮮塊莖蒸6 min和8 min的白及切面中心有白點和明顯的環,未透心,而蒸10 min和12 min的已透心;新鮮塊莖煮3 min的白及切面也可見有白點和明顯的環,未透心,而煮5 min及以上的均已透心。白及塊莖采用蒸制時開水鍋沸騰蒸10~12 min,或沸騰狀態煮制5~8 min即可。
2.2.1不同干燥處理白及的質量從表1可知,不同干燥處理方法對折干率、提取率和白及多糖含量都有影響。折干率以新鮮塊莖切片60℃烘干最高,為30.63%,鮮莖切片曬干和和鮮莖切片40℃烘干次之,分別為24.82%和24.61%;提取率以新鮮塊莖切片60℃烘干最高,為25.33%,煮透切片60℃烘干最低,為17.27%。新鮮塊莖切片后烘干的乙醇提取率普遍高于曬干、陰干和蒸煮后干燥;白及多糖含量從高到低依次為蒸后切片60℃烘干>新鮮塊莖皮60℃烘干>煮后切片60℃烘干>鮮莖切片60℃烘干>鮮莖切片50℃烘干>鮮莖切片曬干>鮮莖切片30℃烘干>鮮莖切片陰干>鮮莖切片40℃烘干,其中不同溫度烘干時提取率和多糖含量均以60℃最高,綜合白及多糖含量及折干率看,蒸透切片60℃烘干的多糖含量最高,折干率也較高,故白及的干燥處理以蒸透切片60℃烘干最佳。

表1 不同處理方法的白及質量
注:表中同列不同小寫字母表示差異顯著,P<0.05,下同。
Note:Different lowercase letters in the same column indicate significant difference at 5% level.The same below.
2.2.2不同包裝貯存白及的質量從表2可知,相同條件下,不同包裝貯存的白及提取率差異顯著,直接堆放的多糖含量最高,為21.44%;編織袋包裝的多糖含量最低,為14.03%。綜合評定以提取率和多糖含量的乘積計,不同包裝貯存的白及質量依次為直接堆放>塑料袋包裝>網袋包裝>編織袋包裝。
中藥材產地初加工是藥材生產與品質形成的重要環節,加工的目的是保證藥材質量、利于包裝、貯藏和運輸,防止藥材變色、變質、霉爛腐敗等影響療效。試驗以白及折干率、提取率和白及多糖含量為指標,考察在不同溫度條件下烘干、多種處理方法之間的差異。結果表明,白及產地加工以蒸10~12 min后切片60℃烘干為最佳,此時折干率為24.65%,提取率為18.40%,多糖含量為37.43%;塊莖皮折干率也較高,且提取率和白及多糖含量表現較好,因此在產地加工時可考慮不必特意除掉。貯存時以干燥塊莖直接堆放最佳。
白及塊莖皮折干率最高可能與其本身細胞排列較緊密的顯微結構有關,塊莖皮中也有較高的多糖分布,是否與多糖在塊莖中貯存的位置有關,靠近表皮位置的細胞貯存多糖量需要進一步試驗探討。不同溫度烘干造成多糖含量差異顯著,導致此結果的原因可能與白及多糖本身屬于大分子鏈柔性大易變性有關;且在干燥過程中自身仍維持著一定的呼吸作用,需消耗糖分以維持機體的生理活動,因此溫度可能成為影響藥材多糖含量的重要因素之一[15]。烘干法、曬干法和陰干法對白及多糖的影響也較大,蒸后切片60℃烘干處理下白及多糖含量最高,該結果與邢麗花等[13]研究結果有差異,可能是曬干過程中曬的時間長短和光強度有差異導致,其原因需要進一步證實。曬干、陰干過程中和蒸煮處理時某些成分被損耗或溶出,導致了切片后直接烘干的提取率普遍高于其他處理。無論哪種方法都能使藥材干燥,但筆者認為烘干法會使藥材中的水分迅速蒸發而達到干燥效果;曬干及陰干的加工過程緩慢、受氣候影響較大、溫度較低且不易控制、耗時長、水分不易排出,藥材中的酶不能迅速滅活導致多糖含量下降。尤其是新鮮塊莖不適合直接陰干,一般放置2周以后容易發生變質現象,白及塊莖芽部和損傷部位發紅、霉變而影響質量。切片后干燥時間短,產地大規模加工時可視天氣情況和本身條件采用曬干或烘干的干燥方式。
中藥材的貯存,也是影響中藥材質量的關鍵環節。在貯存過程中,貯存方式是控制水氣對中藥材影響的關鍵一環。多數中藥材貯存時需要陰涼、通風、干燥的條件,其中通風不僅是要求倉庫通風性,也對包裝通氣性有關。白及塊莖本身呈不規則形狀,堆放時每個塊莖之間的空隙是相互連通透氣的,具有較好的透氣性;而網袋和編織袋,也具有一定的透氣性,但跟堆放相比稍差;塑料袋的透水透氣性最差,但能有效保持內部的干燥性。