女寶膠囊氣相特征圖譜

郭美玲，王藝純，孫丹，張紅梅

1.吉林省藥品檢驗所，吉林 長春 130033；2.中國人民解放軍空軍航空大學，吉林 長春 130000；3.吉林大學第一醫院二部 藥學部，吉林 長春 130000

女寶膠囊是由人參、川芎、紅花、桃仁等45味中藥材制成的中藥成方制劑。具有調經止血、溫宮止帶、逐瘀生新的功效；用于治療月經不調、行經腰腹疼痛、四肢無力、帶下、產后腹痛等癥[1]。全國共有43家生產企業、43個批準文號。女寶膠囊的現行國家藥品標準收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準》中藥成方制劑第五冊，標準號為WS3-B-0888-91，該標準中只收載性狀和檢查項，檢驗標準極低、檢驗指標控制不全，遠不能滿足中藥現代化質量控制的要求。目前也有對女寶膠囊中丹皮酚、丹參酮ⅡA[2]、芍藥苷[3]、延胡索乙素[4]等成分進行含量檢測以及薄層色譜[6]研究的報道。尚未見對女寶膠囊中揮發油類成分的研究。為了對女寶膠囊質量進行整體、綜合性控制，參照相關文獻[3-8]，建立了處方中6味揮發油類含量高的植物藥材的特征圖譜，并對特征峰進行指認。

關于女寶膠囊品種的研究性文獻較少，其中鑒別主要采用薄層色譜法(TLC)，而含量測定項主要采用高效液相色譜法(HPLC)。為對女寶膠囊的揮發油類成分進行整體、綜合性控制，本研究以桂皮醛為參照物，采用氣相色譜法對處方中的多種組分進行分離分析，建立了豆蔻、砂仁、荊芥穗、白術、肉桂、炮姜的特征圖譜檢查方法，并對特征峰進行指認，為女寶膠囊的質量評價提供了可靠依據。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 7890B氣相色譜儀、FID檢測器、柱溫箱；BS 124S電子天平(賽多利斯科學儀器有限公司)。

1.2 試藥

桂皮醛對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110710-201418)；正己烷(天津市科密歐化學試劑有限公司，色譜純)；無水硫酸鈉(北京化工廠，分析純)；水為超純水。

女寶膠囊129批。

2 方法與結果

2.1 色譜柱的選擇及系統適用性試驗

本實驗考察了HP-5(柱長為30 m，內徑為0.25 mm，膜厚度為0.25 μm)和DB-FFAP毛細管柱(柱長為30 m，內徑為0.25 mm，膜厚度為0.25 μm)兩根色譜柱，結果DB-FFAP色譜條件下均能使供試品溶液很好分離，且各色譜峰保留時間適中。故選用DB-FFAP毛細管柱作為實驗用色譜柱。

2.2 程序升溫的考察

分別考察了1)初始溫度100 ℃，保持5 min，以6 ℃·min-1的速率升溫至220 ℃，保持30 min；2)初始溫度100 ℃，保持15 min，以8 ℃·min-1的速率升溫至220 ℃，保持30 min；3)初始溫度100 ℃，保持15 min，以5 ℃·min-1的速率升溫至220 ℃，保持30 min。結果在第2個程序升溫條件下，供試品溶液中的各主要色譜峰達到完全分離，互不干擾，分離效果明顯優于其他兩個升溫程序，故選擇其作為本法的升溫程序。

2.3 采集時間的考察

采用正文擬定的色譜柱程序升溫，精密量取供試品溶液1 μL注入氣相色譜儀，記錄90 min的色譜圖，結果在50 min之后無色譜峰出現，故確定采集時間為50 min。

2.4 測定方法

2.4.1 色譜條件 色譜柱為DB-FFAP毛細管柱(柱長為30 m，內徑為0.25 mm，膜厚度為0.25 μm)；程序升溫：初始溫度100 ℃，保持15 min，以8 ℃·min-1的速率升溫至220 ℃，保持30 min；進樣口溫度為240 ℃；檢測器溫度為250 ℃。理論板數按桂皮醛峰計算應不低于50 000。

2.4.2 溶液的制備

2.4.2.1 對照品溶液的制備 取桂皮醛對照品適量，精密稱定，用正己烷溶解并稀釋制成質量濃度為1.0 mg·mL-1的溶液，即得。

2.4.2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末約10 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水200 mL，連接揮發油測定器，自測定器上端加水至刻度3 mL，再加正己烷2～3 mL，連接回流冷凝管，加熱至微沸，并保持2 h，放冷，分取正己烷液，然后用鋪有無水硫酸鈉約1 g的漏斗濾過[8]，濾液置5 mL量瓶中，揮發油測定器內壁再用少量正己烷洗滌，洗液并入上述量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.4.3 測定法 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，測定，即得。結果見圖1～2，供試品溶液的特征圖譜中應有16個特征峰，其中1個峰應與參照物峰的保留時間相同，且以桂皮醛參照物峰為S峰，計算其他15個特征峰的相對保留時間，其均應在相應規定值的±3%之內。規定值分別為為：0.15(峰1)、0.32(峰2)、0.40(峰3)、0.50(峰4)、0.64(峰5)、0.71(峰6)、0.73(峰7)、0.79(峰8)、1.00(峰S)、1.11(峰9)、1.13(峰10)、1.16(峰11)、1.21(峰12)、1.34(峰13)、1.54(峰14)、1.63(峰15)。

圖1 桂皮醛對照品溶液色譜圖

注：1.豆蔻；2、5.荊芥穗；3、4、6、7、9、10.砂仁；S.肉桂；8、12、14、15.白術；11、13.炮姜。圖2 供試品溶液色譜圖

2.5 精密度試驗

取同一份供試品溶液，連續測定6次，以桂皮醛峰為參照物峰，分別計算其他15個特征峰的相對保留時間。結果各特征峰的相對保留時間的RSD均小于1.0%(n=6)，表明該儀器精密度良好[9]。

2.6 穩定性試驗

取同一份供試品溶液，分別于0、4、8、16、24 h，按照正文擬定的方法進行測定，以桂皮醛峰為參照物峰，分別計算其他15個特征峰的相對保留時間。結果各特征峰的相對保留時間的RSD均小于1.0%，表明該方法的穩定性良好[9]。

2.7 重復性試驗

取同一份供試品6份，精密稱定，按照正文擬定的供試品溶液制備方法分別制備供試品溶液，并進行分析測定，以桂皮醛峰為參照物峰，計算其他15個特征峰的相對保留時間。結果各特征峰的相對保留時間的RSD均小于1.0%(n=6)，表明該方法的重復性良好[9]。

3 樣品測定

按照正文擬定的條件，對5個不同生產廠家的129批樣品進行分析測定，結果見圖3、4。

圖3 5家不同生產企業樣品特征圖譜

注：A.濟邦；B.一正；C.雙藥；D.天強。圖4 生產企業樣品特征圖譜

4 討論

A企業生產的97批次樣品均未檢出荊芥穗的特征峰，97批次樣品中有47批次未檢出豆蔻的特征峰；C企業生產的5批次樣品均未檢出荊芥穗和豆蔻的特征峰；D企業生產的8批次樣品均未檢出荊芥穗特征峰。顯示部分企業存在不投或少投藥材，使用劣質藥材投料的違規生產行為，或者是藥材的滅菌方式不合理，造成藥材的揮發性成分的流失。

不同企業間樣品各特征峰峰面積差異較大，企業內樣品各特征峰峰面積差異不大，表明不同企業間投料藥材質量差異較大，企業內批次間投料藥材質量較穩定。

本實驗中供試品溶液制備方法考察了乙酸乙酯超聲提取、乙酸乙酯回流提取、揮發油提取器提取等方法，發現回流提取樣品溶液過于黏稠，超聲提取圖譜峰整體性差，揮發油提取器提取揮發性成分圖譜整體性好，峰數目多且分離度好，故選取揮發油提取器提取方法制備供試品溶液。

分別對女寶膠囊中肉桂、炮姜、白術、砂仁、荊芥穗、豆蔻6味藥材的揮發油提取液和相應的陰性對照揮發油提取液及相應的對照品溶液進行氣相圖譜測定，通過藥材、陰性對照溶液和對照品溶液的圖譜，提取出相應的藥材特征峰。

文中2.4.3項下給出的供試品溶液色譜圖是按照正常工藝自制小樣分析得出的色譜圖，具有可靠性和代表性，是符合該品種特點的特征性色譜圖。

通過建立女寶膠囊的特征圖譜方法，可以達到一測多評的目的，從整體上對多味藥材的質量進行綜合控制，并為女寶膠囊的質量評價提供可靠的依據。