HPLC法同時測定31批次消栓口服液中6種防腐劑的含量

張府君，馮貞，王海花，程永杰，王丕明

1.山西藥科職業學院，山西 太原 030031；2.山西省食品藥品檢驗所，山西 太原 030006

近年來，隨著人們安全意識的不斷提高，藥品中的添加劑的問題備受矚目。而含有蛋白質、糖類等營養物質的中藥口服液體制劑，因其藥品中的營養成分極易引起微生物的生長和繁殖，防腐劑的加入恰好能有效抑制微生物的生長與繁殖，從而延長保存時間。為了患者用藥的安全性，不僅有必要控制中藥口服液體制劑中防腐劑的使用及用量，還要篩查有無他類防腐劑的非法添加，對保障臨床用藥安全具有重要意義。[1]

消栓口服液收載于2015年版《中華人民共和國藥典》一部中的成方制劑，由黃芪、當歸、赤芍、地龍、川芎、桃仁、紅花等七味中藥組成，具補氣活血通絡功效，常用于中風氣虛血瘀癥[2]。在消栓口服液的現行標準中有加入防腐劑苯甲酸鈉及加入量的描述，但沒有收載相應的檢查方法[3]。本實驗設計同時測定中藥口服液體制劑中的6種防腐劑，分別為標準規定加入的苯甲酸以及其他5種要篩查的他類常見防腐劑，包括山梨酸鉀、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯、對羥基苯甲酸丁酯。

1 儀器、試劑與試藥

1.1 儀器與試劑

Waters Alliance E2695高效液相色譜系統；乙腈為色譜純，乙酸銨為分析純，水為純化水。

1.2 試藥

對照品：苯甲酸、山梨酸鉀、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯、對羥基苯甲酸丁酯6種對照品均購自中國食品藥品檢定研究院。苯甲酸對照品(批號：100419-201703，99.9%)、山梨酸鉀對照品(批號：101075-201602，99.7%)、羥苯甲酯對照品(批號：100278-201705)、羥苯乙酯對照品(批號：100847-201604，99.9%)、羥苯丙酯對照品(批號：100444-201403，99.6%)、對羥基苯甲酸丁酯對照品(批號：110792-200503)。

樣品：31批次消栓口服液均為市售。

陰性樣品：取消栓口服液處方中各藥味，模擬2015年版《中華人民共和國藥典》一部消栓口服液項下[制法]，制備，即得。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 標準溶液的制備 取苯甲酸對照品、羥苯甲酯對照品、羥苯乙酯對照品、羥苯丙酯對照品、對羥基苯甲酸丁酯各10 mg，分別置25 mL量瓶中，加甲醇適量使溶解后，定容，搖勻，備用；另取山梨酸鉀對照品10 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇適量使溶解后，定容，搖勻，備用。

精密量取上述苯甲酸對照品溶液10 mL、山梨酸鉀對照品溶液1 mL及其余4種對照品溶液各5 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

標準溶液的濃度配制在以上濃度，進樣10 μL，峰面積較適中，易于檢出和判斷(見圖1)。

2.1.2 供試品溶液的制備 精密量取樣品原液1 mL，加水稀釋至10 mL，搖勻，作為供試品溶液。

2.1.3 陰性對照品的制備 按消栓口服液處方比例和制備工藝，取處方中各藥材模擬2015年版《中華人民共和國藥典》一部消栓口服液項下的[制法]，自制不含防腐劑的消栓口服液陰性樣品，即得。

2.2 色譜條件

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(色譜柱規格為5 μm，4.6 mm×250 mm)；流動相：以A為乙腈，B為0.02 mol·L-1乙酸銨溶液，進行梯度洗脫[1]，梯度程序0～30 min，流動相A為4%～85%，流動相B為96%～15%；柱溫35 ℃，檢測波長為240 nm，同時用PDA監測，波長掃描范圍190～400 nm。

圖1 標準溶液色譜圖及光譜圖

2.3 專屬性實驗

陰性供試品溶液的制備：取自制陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備，即得。

結果：陰性樣品色譜中檢出與苯甲酸對照品、山梨酸鉀對照品保留時間相近的色譜峰，但其紫外光譜不一致(見圖2)。

故本法可用于苯甲酸、山梨酸鉀、羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯、對羥基苯甲酸丁酯6種防腐劑的檢查。

2.4 檢出限的確定

采用陽性供試品溶液，逐步稀釋后進樣，目前較為通行的是目視法來確認，即色譜峰高約為保留時間附近一段基線波動范圍的2～3倍時，認為此時的進樣量為在此方法下該物質的最小檢出限。同上述方法逐步稀釋后進樣，確認檢測的6種物質的檢出限(見表1)。

圖2 陰性供試品色譜圖及光譜圖

對照品名稱檢出限/μg·mL-1對照品名稱檢出限/μg·mL-1苯甲酸1.8山梨酸鉀0.43羥苯甲酯0.84羥苯乙酯0.85羥苯丙酯0.91對羥基苯甲酸丁酯1.0

2.5 樣品篩查

依法對7個企業的31批次樣品進行篩查，結果均未檢出與除苯甲酸以外5種對照品保留時間及紫外光譜圖均相一致的非法添加物(見圖3)；31批次樣品中苯甲酸含量結果，均符合規定(見表2)。《中華人民共和國藥典》2015年版四部中規定了合劑中根據需要可加入適宜的附加劑，并且規定了苯甲酸的用量不得超過0.3%，(其鉀鹽、鈉鹽的用量分別按酸計)。合劑系指飲片用水或其他溶劑，采用適宜的方法提取制成的口服液體制劑(單劑量灌裝者也可稱“口服液”)[4]。

圖3 供試品溶液色譜圖及光譜圖

所建立的方法陰性無干擾，專屬性、耐用性及檢出靈敏度均好，可用于消栓口服液中非法添加防腐劑物質的檢查[5]。

苯甲酸對照品進樣量為10 μL，含量為88.711 2 μg·mL-1。

表2 31批次樣品中苯甲酸含量

3 討論

本文建立了一種同時測定中藥口服液體制劑中6種防腐劑的高效液相色譜法，可為中藥口服液體制劑中防腐劑的質量控制提供依據。

本實驗在進行陰性樣品制備時，處方中桃仁屬于種子類中藥，因為有些種子類中藥存放時間長也有可能會分解出苯甲酸成分，但是即使有苯甲酸成分，實驗測出來的量也比標準規定低很多，可以忽略為沒有干擾。同時，要求選購陰性藥材時，注意各藥味的質量必須符合國家標準。